氣相色譜-質(zhì)譜法檢測植物油中腐霉利和氟硅唑含量

楊天慶，韓 娟，龔 珊，劉 旭，師麟閣，郭 靖

(陜西省糧油產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，西安 710016)

腐霉利，國際通用名為Procymidone，化學(xué)名稱N-(3，5-二氯苯胺)-1，2-二基環(huán)丙烷-1，2-二羰基亞胺，是20世紀(jì)70年代于我國投入使用的二甲酰亞胺類內(nèi)吸性殺菌劑，主要是抑制菌體內(nèi)甘油三酯的合成，具有保護和治療的雙重作用，低溫高濕條件下使用效果明顯。腐霉利可用于多種農(nóng)作物，對葡萄孢屬和核盤菌屬真菌有特效[1-3]。氟硅唑，國際通用名為Flusilazole，化學(xué)名稱雙(4-氟苯基)甲基(1H-1，2，4-唑-l-基亞甲撐)硅烷，為保護性和治療性內(nèi)吸三唑類殺菌劑，通過抑制或干擾菌體附著胞及吸器的發(fā)育、菌絲和孢子的形成，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，從而降低病原菌致病力[4-5]。

隨著腐霉利和氟硅唑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用量的增加，其殘留也成為人們擔(dān)心的問題[6]。有研究表明[7]，化學(xué)農(nóng)藥在人體內(nèi)蓄積至一定量將直接危及人體的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等，長期低劑量接觸農(nóng)藥可使患帕金森氏綜合癥的風(fēng)險提高70%，農(nóng)藥接觸導(dǎo)致的惡性疾病還包括骨髓瘤、唇癌、胃癌、皮膚癌等，因此如何快速高效地檢測出農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量至關(guān)重要。

關(guān)于糧油產(chǎn)品中腐霉利和氟硅唑的檢測方法有高效液相色譜法、氣相或液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等多種方法[8-12]。Soares等[13]分別用4種萃取方法從人參提取物中萃取腐霉利，采用高效液相色譜法檢測，發(fā)現(xiàn)水溶解-石油醚超聲萃取腐霉利的方法有較高的提取率，干擾峰少。陳章明等[14]采用高效液相色譜法，以甲醇-水(體積比85∶15)為流動相，流速為1 mL/min，220 nm為檢測波長，對樣品中氟硅唑進(jìn)行液相色譜測定，分離效果好，精密度與準(zhǔn)確度高。Fulgêncio等[15]利用微分脈沖和方波伏安法測定了巴西蘋果中的腐霉利殘留量。Araújo等[16]利用低溫固液萃取技術(shù)萃取胡蘿卜樣品中的腐霉利，通過GC-MS檢測出有10%的樣品腐霉利農(nóng)藥殘留超標(biāo)。Korba等[17]采用頂空固相萃取技術(shù)測定紅葡萄酒的農(nóng)藥殘留。但是有關(guān)植物油中腐霉利和氟硅唑檢測的研究較為鮮見。本研究選用QuEChERS快速凈化小柱對植物油樣品進(jìn)行前處理，對植物油中腐霉利和氟硅唑含量的測定方法進(jìn)行了驗證，以期為植物油產(chǎn)品中腐霉利和氟硅唑農(nóng)藥含量的測定提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

植物油；乙腈，色譜純；環(huán)氧七氯(BePure，160906)，純度>99%；腐霉利標(biāo)準(zhǔn)品(AccuStandard，217091251)，純度>99%；氟硅唑標(biāo)準(zhǔn)品(AccuStandard，216021251-01)，純度>99%。

氣相色譜-質(zhì)譜儀，配有電子轟擊源(EI)；分析天平；渦旋混合器；高速離心機，離心管；QuEChERS快速凈化小柱；移液器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

1.2.1.1 樣品的提取

稱取4.0 g植物油置于20 mL離心管中，加入20 mL乙腈，于渦旋混合器上渦旋20 min進(jìn)行提取，再置于高速離心機5 000 r/min離心5 min，取上清液14 mL待凈化。

1.2.1.2 樣品的凈化

取1.2.1.1待凈化液過QuEChERS快速凈化小柱，然后取10 mL于35℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸干，用1 mL乙腈溶解，取900 μL加入100 μL環(huán)氧七氯溶液供氣相色譜-質(zhì)譜儀分析測定。

1.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜測定條件

HP5MS石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 mm(內(nèi)徑)，膜厚0.25 μm；柱溫，80℃保持1 min，以10℃/min升至250℃并保持10 min；進(jìn)樣口溫度230℃；檢測溫度250℃；柱流量2 mL/min；分流比5∶1；色譜質(zhì)譜接口溫度280℃；載氣為氦氣，純度大于等于99.995%，流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量1.0 μL；進(jìn)樣方式，無分流進(jìn)樣，1 min后開閥；EI電離方式；電離能量70 eV；選擇離子監(jiān)測方式(SIM)；監(jiān)測離子(m/z)為96，254，283，285；定量離子(m/z)為285；溶劑延遲8 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 QuEChERS快速凈化小柱的選擇

QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)是近年來國際上發(fā)展起來的一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的快速樣品前處理技術(shù)。原理與高效液相色譜(HPLC)和固相萃取(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到除雜凈化的目的。QuEChERS方法有以下優(yōu)勢[18]：①回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農(nóng)藥品種的回收率大于85%；②精確度和準(zhǔn)確度高，可用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行校正；③可分析的農(nóng)藥范圍廣，包括極性、非極性的農(nóng)藥種類均能利用此技術(shù)得到較好的回收率；④分析速度快，能在30 min內(nèi)完成6個樣品的處理；⑤溶劑使用量少，污染小，價格低廉且不使用含氯化物溶劑；⑥操作簡便，無需良好訓(xùn)練和較高技能便可很好地完成；⑦乙腈加到容器后立即密封，使其與工作人員的接觸機會減少；⑧樣品制備過程中使用很少的玻璃器皿，裝置簡單。因此，本文采用QuEChERS快速凈化小柱對植物油樣品進(jìn)行前處理。

2.2 方法驗證

2.2.1 加標(biāo)回收率

分別稱取3份空白植物油樣品，做低、中、高3個添加量的加標(biāo)回收實驗，每個添加量做3個重復(fù)實驗，計算加標(biāo)回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率實驗結(jié)果

由表1可見，在不同加標(biāo)量下，腐霉利平均回收率分別為85.0%、89.0%和96.0%，氟硅唑平均回收率分別為88.3%、89.2%和94.1%?；厥章示_(dá)到GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》標(biāo)準(zhǔn)中附錄F對回收率的要求。

2.2.2 精密度實驗

根據(jù)低、中、高3個添加量的加標(biāo)回收實驗中所測定的結(jié)果計算本實驗精密度，結(jié)果見表2。由表2可見，在3種不同添加量下腐霉利的實驗室內(nèi)變異系數(shù)(CV)分別為1.7%、1.5%、8.9%，氟硅唑的分別為6.8%、2.7%、2.1%，實驗室內(nèi)變異系數(shù)均達(dá)到GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》標(biāo)準(zhǔn)中附錄F對精密度的要求。

表2 精密度驗證結(jié)果

2.2.3 方法定量限和檢出限

經(jīng)測定，按10倍信噪比計算腐霉利定量限為0.025 mg/kg，氟硅唑定量限為0.075 mg/kg；按3倍信噪比計算腐霉利檢出限為0.007 5 mg/kg，氟硅唑檢出限為0.022 5 mg/kg。

3 結(jié) 論

本研究采用QuEChERS快速凈化小柱進(jìn)行快速樣品前處理，利用氣相色譜-質(zhì)譜法檢測植物油中腐霉利和氟硅唑農(nóng)殘含量，檢測結(jié)果顯示其回收率及精密度均達(dá)到GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》標(biāo)準(zhǔn)中附錄F要求標(biāo)準(zhǔn)，可用于日常植物油樣品中腐霉利和氟硅唑農(nóng)殘檢測。