魚金注射液對大鼠的亞急性肝腎毒性研究

1.黔西南民族職業技術學院，貴州 黔西南 562400；2.黔西南州人民醫院，貴州 黔西南 562400

魚金注射液是一種純中藥注射劑，由魚腥草、金銀花提取制成，現有質量標準采用GC色譜法測定甲基正壬酮。魚腥草始載于《名醫別錄》，為三白草科植物蕺菜(HouttuyniacordataTunb)的鮮全草或干燥地上部分，性微寒、味辛，歸肺經，具有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋的功效，用于肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱痢、癰腫瘡毒等癥[1]。其主要活性成分為揮發油和黃酮類化合物，尚含生物堿、脂肪酸、有機酸、蕺菜堿、鉀鹽等。現代藥理研究[2-7]表明，魚腥草具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化、抗過敏、鎮咳、增強機體免疫力等藥理作用。現部分地區已對其進行人工培植，以四川、貴州、云南等地較為廣泛。金銀花(LoniceraJaponicaThunb)又名忍冬花，具有悠久的用藥歷史，是忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花[1]。“忍冬”始載于《名醫別錄》，初始以莖葉入藥，李時珍所著《本草綱目》載：“莖葉及花，功用皆同”。自此，花與藤葉以“忍冬”或“金銀花”為名，同作一藥使用，當代主以花入藥。金銀花性寒，味甘，入肺、心、胃經，具有清熱解毒、抗炎、補虛療風的功效，主治脹滿下疾、溫病發熱、熱毒癰瘍，丹毒和腫瘤等癥[1,8]。從金銀花中分離鑒定的化學成分類型較多，主要有揮發油類、有機酸類、黃酮類、三萜皂苷類、環烯醚萜類等[9]。藥理研究[10]表明，金銀花具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利膽、降血糖、降血脂、增強免疫、抗氧化、抗生育、止血等作用。

魚金注射液被廣泛地應用于臨床治療呼吸、消化、泌尿生殖等系統的感染性疾病，取得了較好的效果[11]。有研究[12]選取128例支氣管肺炎患者為研究對象，使用中藥魚金注射液聯合抗生素治療，臨床療效顯著。另有學者研究發現山海丹牌魚金注射液口腔霧化給藥具有抗炎、解熱及抗菌作用[13]。研究以小兒支氣管肺炎為研究對象，發現魚金注射液用于霧化吸入對發熱、咳嗽、氣急等癥狀療效顯著，具有起效快、退熱作用好、且全身副作用小等特點[14]。目前，尚未出現專門針對魚金注射液毒副作用、毒性物質基礎和產生毒副作用的劑量范圍的相關研究。本實驗以大鼠為研究對象，觀察2 mL/kg、4 mL/kg魚金注射液較長時間應用對機體肝、腎功能的影響，為魚金注射液臨床使用劑量、時間等提供相應實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 動物 SD大鼠60只，雌雄各半，(200±20) g，清潔級，購自重慶騰鑫生物技術有限公司，動物許可證號SCXK(軍)2012-0011。

1.2 藥品 魚金注射液(批號：17060621E，朗致集團萬榮藥業有限公司)。

1.3 試劑 采血針(批號：170905，南昌市贛達醫療器械有限公司)；采血管(批號：180529，南昌市贛達醫療器械有限公司)；高效切片石蠟(批號：20180118，上海華靈康復器械廠)；多聚甲醛(批號：20180112，國藥集團化學試劑有限公司)；PBS磷酸鹽緩沖液(批號：ZLI-9062，北京中杉金橋生物技術有限公司)；無水乙醇(AR級，批號：GB678-90，江蘇海興化工有限公司)；二甲苯(AR級，批號：20180110，天津致遠化學試劑有限公司)；蘇木素染液(批號：BA-4097，珠海貝索生物技術有限公司)；伊紅染液(批號：BA-4099，珠海貝索生物技術有限公司)；鹽酸(AR級，批號：20180118，成都市科龍化工試劑廠)；中性樹膠(批號：20171009，國藥集團化學試劑有限公司)；重鉻酸鉀(AR級，批號：20180120，成都市科龍化工試劑廠)；濃硫酸：(AR級，批號：20180119，成都市科龍化工試劑廠)；組織包埋盒(批號：31050102W，江蘇世泰實驗器材有限公司)。

1.4 儀器 5800全自動生化儀(貝克曼)；R35刀片(日本羽毛安全剃刀株式會社)；轉輪式切片機(德國徠卡-2016)；TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機(常州市中威電子儀器有限公司)；BMJ-Ⅲ型包埋機(常州郊區中威電子儀器廠)；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀(常州市中威電子儀器有限公司)；BA400Digital數碼三目攝像顯微鏡(麥克奧迪實業集團有限公司)；Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件(美國Media Cybernetics公司)。

2 方法

2.1 動物分組和給藥 60只清潔級SD大鼠隨機分為3組，每組20只，雌雄各半。正常組、魚金注射液低劑量組(2 mL/kg)、魚金注射液高劑量組(4 mL/kg)，分別灌胃給予生理鹽水2 mL/kg、魚金注射液2 mL/kg、魚金注射液4 mL/kg，每天灌胃給藥1次，連續給藥5周。

2.2 鼠肝臟指數和腎臟指數 取大鼠新鮮肝臟、腎臟，使用生理鹽水將其沖洗干凈，分別稱取肝臟和腎臟濕重，計算肝臟指數和腎臟指數。肝臟指數=肝重(mg)/體重(g)，腎臟指數=腎重(mg)/體重(g)。

2.3 大鼠肝、腎功能檢測 摘眼球采集大鼠血液，以2500 rpm/min，4 ℃離心15 min后吸取血清，全自動生化儀檢測大鼠血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。

2.4 大鼠肝臟和腎臟病理檢測 取大鼠新鮮肝腎組織適當大小迅速放入4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片，HE染色，采用麥克奧迪實業集團有限公司生產的BA200Digital數碼三目攝像顯微攝像系統對切片進行圖像采集，每張切片先于40倍下觀察全部組織，觀察大體病變，選擇要觀察的區域采集100倍、400倍圖片，觀察具體病變。

3 結果

3.1 大鼠肝、腎臟器指數檢測結果 與正常組比較，魚金注射液低、高劑量組雄性與雌性大鼠體重及肝臟指數、腎臟指數差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1～2。

表1 魚金注射液對大鼠肝臟指數的影響

表2 魚金注射液對大鼠腎臟指數的影響

3.2 大鼠血清肝、腎功能檢測結果 與正常組比較，魚金注射液低高劑量組雄性與雌性大鼠肝腎功能檢測指標ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3～5。

表3 魚金注射液對大鼠肝臟功能的影響

表4 魚金注射液對大鼠肝臟功能的影響

表5 魚金注射液對大鼠腎功能的影響

3.3 大鼠肝組織病理檢測結果 正常組肝臟：肝臟被膜完整，肝細胞分葉不明顯，肝索排列紊亂，少量肝細胞顆粒或空泡變性，胞質染色不均，可見數量不等的細小顆粒物質或大小不等的空泡；肝竇內未見明顯的炎細胞浸潤；門管區結構較為完整，未見明顯的纖維組織增生及炎細胞浸潤；其他亦未見明顯病理變化。魚金注射液低高劑量組肝臟組織鏡下所見與正常組比較無明顯差異。見圖1、圖2。

3.4 大鼠腎組織病理檢測結果 正常組腎臟組織被膜完整，皮質和髓質分界清晰，腎小球結構完整清晰，未見毛細血管基底增厚及炎性滲出；部分腎小管可見上皮細胞變性，胞質染色不均；間質內未見炎細胞浸潤及纖維組織增生；其他亦未見明顯病理變化。魚金注射液低高劑量組腎臟組織鏡下所見與正常組比較無明顯差異。見圖3、圖4。

4 討論

魚金注射液是一種新型中藥注射劑，具有清熱解毒、疏散風寒之功效，療效可靠。臨床應用中，其多采用靜脈滴注、穴位注射或霧化吸入等方式，可用于治療急性上呼吸道感染、急性支氣管炎等，有“中藥中的抗生素”之稱。但由于中藥制劑藥物純度一直存在爭議，因此目前在臨床的推廣運用上有一定阻礙。目前，尚未出現專門針對魚金注射液毒副作用、毒性物質基礎和產生毒副作用的劑量范圍的相關研究。本實驗分別對大鼠灌胃給予魚金注射液低劑量(2 mL/kg/d)、高劑量(4 mL/kg/d)，分別相當于人體推薦劑量的 50、100 倍，持續5周，就肝腎功能血清指標谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量，肝臟指數、腎臟指數及肝腎HE染色組織病理改變，探討其對肝、腎組織的亞急性毒性。結果顯示，魚金注射液低劑量組、魚金注射液高劑量組血清ALT、AST、TP、ALB、BUN、Cr水平，肝臟指數、腎臟指數及肝腎組織病理改變與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)，表明連續較長時間(5周)應用大劑量魚金注射液(臨床等效劑量的50、100倍)無顯著肝腎毒性，其安全性較佳。本研究部分填補了魚金注射液藥理毒理內容，為其在臨床上的推廣運用提供了理論基礎。