氣相色譜法測(cè)定紫雪散中麝香酮的含量

1.廣西壯族自治區(qū)梧州市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，廣西 梧州 543001； 2.廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院中藥房，廣西 南寧 530003

紫雪散收載于2015年版中國(guó)藥典一部，是由石膏、北寒水石、滑石、磁石、玄叁、木香、沉香、升麻、甘草、丁香、芒硝(制)、硝石(精制)、水牛角濃縮粉、羚羊角、人工麝香、朱砂等藥材組成的復(fù)方制劑，具有清熱開竅、止痙安神的功能。由于麝資源的不足，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足許多名貴中成藥(包括急救藥)的生產(chǎn)及臨床用藥，現(xiàn)國(guó)家規(guī)定處方中麝香以人工麝香等量替代使用[1]，本處方中的人工麝香芳香以開心竅，三藥配伍，清熱開竅熄風(fēng)，為佐使藥[2]。人工麝香具有降壓、抗缺氧、抗缺血、抗炎等藥理作用，臨床用于高血壓、急性腦缺血損傷及中風(fēng)急性期的治療[3]，常用于配制化妝品，亦在香精料、醫(yī)藥工業(yè)上使用[4]。麝香酮在紫雪散中的含量緊緊關(guān)聯(lián)著藥物的質(zhì)量和藥物的有效性，目前對(duì)中成藥中的麝香酮含量測(cè)定已有相關(guān)報(bào)道[5-7]，但尚未見有對(duì)紫雪散中麝香酮的含量測(cè)定方法進(jìn)行報(bào)道，而在中國(guó)藥典中有用氣相色譜法對(duì)紫雪散中麝香酮成分進(jìn)行鑒別，供試品提取方法為索氏提取，以供試品色譜峰應(yīng)呈現(xiàn)出與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰而鑒別出紫雪散中含有麝香酮[8]，但并沒有對(duì)其含量進(jìn)行明確的規(guī)定，因此建立紫雪散中麝香酮的含量測(cè)定方法對(duì)控制該藥的質(zhì)量和保證其臨床用藥的有效性、安全性有著重要的意義。麝香酮的含量測(cè)定方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、薄層掃描法和比色法[9-11]，已有文獻(xiàn)使用GC-MS法測(cè)定麝香酮含量[12-14]，因麝香酮在大多數(shù)的中成藥中的含量極低，干擾成分多，氣相色譜法靈敏度和分離效率高，適用于含量低的樣品測(cè)定[9]。本文采用氣相色譜法，以麝香酮為對(duì)照品對(duì)紫雪散中麝香酮含量進(jìn)行測(cè)定，該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、便捷，可以用于控制紫雪散中人工麝香的麝香酮含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀GC-2010(配備火焰離子化檢測(cè)器FID，日本島津公司)；GR-202電子分析天平(梅特勒-托利多公司)；KM-1990QFY智能型液晶數(shù)控型超聲波清洗機(jī)(威固特新型設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥 麝香酮對(duì)照品(批號(hào)：110719-20121，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，紫雪散樣品(批號(hào)：150803、141202、140903，分別由3個(gè)不同制藥公司提供，方法學(xué)采用批號(hào)為150803)；乙酸乙酯(分析純)。

2方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：聚乙二醇(ZB-Wax)毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm,涂層厚0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度：250℃；色譜柱溫度180℃；FLD檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度250℃；分流比10∶ 1；進(jìn)樣量1 μL。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取麝香酮對(duì)照品適量，加入乙酸乙酯配制成0.02 g·L-1的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取供試品約1 g，精密稱定，置具塞錐形杯中，精密加入乙酸乙酯10 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取人工麝香外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約5 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液，即得。

取對(duì)照品溶液，陰性樣品溶液和樣品溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1～3。結(jié)果表明，樣品中缺麝香酮以外的成分對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾，保留時(shí)間8.694 min，理論塔板數(shù)均不低于5000。

2.3 線性關(guān)系考察 取麝香酮對(duì)照品0.4709 g/L，然后分別精密吸取該溶液0.2、0.5、1、2、5 mL置25 mL容量瓶中，加入乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，并依照上述方法測(cè)定，結(jié)果詳見圖4。以濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸處理，求得回歸方程：Y= 1639.2X-69.329，r= 0.9993。麝香酮在3.767～94.180 ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品(批號(hào)：150803)，按2.2.2項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品溶液。以1 μL為進(jìn)樣量，測(cè)定樣品中麝香酮的峰面積。然后放置0、2、4、6、10 h后按上述色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果RSD為0.42%。試驗(yàn)表明，在24 h內(nèi)被測(cè)物穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取相同批號(hào)的樣品(批號(hào)：150803)，共6份，按2.2.2項(xiàng)下的提取方法提取供試品溶液，進(jìn)樣量為1 μL，按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果測(cè)得樣品中麝香酮的含量為0.1082 mg/g，RSD為2.77%。試驗(yàn)表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 以2.3項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按上述相同色譜條件連續(xù)測(cè)定6次，所得平均峰面積為28800.23，RSD=0.46%，試驗(yàn)表明本方法的精密度較好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品(批號(hào)：150803，麝香酮含量為0.1082 mg/g)0.5 g，共取6份，置具塞錐形瓶中，精密加入麝香酮對(duì)照品溶液適量，按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率.結(jié)果麝香酮的的平均回收率(n=6)為101.11%;RSD為2.11%，詳見表1。

表1 加樣回收率結(jié)果 (n=6)

2.8 樣品測(cè)定 取3個(gè)不同廠家的紫雪散共3批，按正文含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制得供試品溶液，測(cè)定麝香酮的含量，結(jié)果3批含量分別為(0.118±0.002)mg/g、(0.066±0.001)mg/g、(0.075±0.001 )mg/g。詳見表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

根據(jù)麝香酮的極性,參考相關(guān)的文獻(xiàn)[15-22]，本文提取溶劑分別考察了無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲醇等有機(jī)溶劑對(duì)樣品進(jìn)行提取，結(jié)果分析表明，用乙酸乙酯作為提取溶劑，雜質(zhì)干擾較小，而其余均存在不同程度的干擾，容易影響測(cè)定結(jié)果，所以選用乙酸乙酯作為提取溶劑。對(duì)常用的3種提取方法浸漬、超聲、回流進(jìn)行考察，3種方法分別為：超聲30 min、浸漬4 h、回流1 h，超聲30 min與浸漬4 h提取效果基本相同，而回流提取樣品麝香酮的含量降低，分析原因在于麝香酮有揮發(fā)性，回流過(guò)程中較高溫度使麝香酮的含量在提取過(guò)程中有所減失，故排除回流作為提取方法。所以，在提取時(shí)間和提取方法的簡(jiǎn)便性上綜合比較，選用超聲30 min作為提取方法。對(duì)提取方法為超聲時(shí)長(zhǎng)進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲30 min能夠達(dá)到滿意的效果。

目前人工麝香的質(zhì)量控制指標(biāo)尚未得到全面的控制以及采用，所以在制備紫雪散時(shí)選用與購(gòu)買的人工麝香的質(zhì)量會(huì)有所差別，而這個(gè)差別也是影響麝香酮在該藥中含量的原因之一，但人工麝香配方工藝嚴(yán)格保密[23]，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也未見有相關(guān)的報(bào)道，所以在原料藥人工麝香的選取上也會(huì)對(duì)紫雪散中麝香酮的含量造成影響。本文通過(guò)對(duì)麝香酮的含量測(cè)定研究結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，目前市面上的紫雪散，相同廠家，不同批號(hào)測(cè)定出的麝香酮的含量也有所不同，分析其原因可能為本文中檢測(cè)的紫雪散生產(chǎn)年份不同，即生產(chǎn)的時(shí)間上有所區(qū)別，而麝香酮在放置環(huán)境與儲(chǔ)存時(shí)間的長(zhǎng)短也會(huì)影響麝香酮在紫雪散中的含量[24-25]; 人工麝香的質(zhì)量控制指標(biāo)尚未得到全面的控制以及采用，所以在制備紫雪散時(shí)選用與購(gòu)買的人工麝香的質(zhì)量會(huì)有所差別，而這個(gè)差別也是影響麝香酮在該藥中含量的原因之一。因此本文建立紫雪散中麝香酮的含量測(cè)定方法有著重要的作用，本文采用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定，該方法具有操作簡(jiǎn)便、迅速、準(zhǔn)確、干擾少、精密度與重復(fù)性較好等優(yōu)點(diǎn)，可用來(lái)測(cè)定紫雪散中麝香酮的含量。