抗高原反應中草藥添加劑的安全性研究

婁紅軍 顏澤清 宋珍華

項目編號：2017GABJC21

天然中草藥已成為國內外飼料添加劑研究的熱點，是具有中國特色的綠色飼料添加劑。中草藥飼料添加劑是指以中草藥的物性、物味、物間關系等傳統中醫藥理論為主導，輔以動物飼養和飼料工業等現代化科學理論技術而制成的純天然飼料添加劑；中草藥添加劑中的免疫活性物質能提高機體免疫機能、抗應激、抗病、改善動物生產性能,且具有無殘留、不易產生耐藥性等優點,同時還含有多種營養成分和生物活性物質，兼有藥物和營養的雙重作用。為此，我們根據犬的生理及現代中草藥藥理研究抗高原反應的科研成果，按中醫理論組方，研制出純中草藥添加劑，主要成分包括：紅景天、黃芪、當歸、玫瑰花等。

經反復試驗證明，該中草藥添加劑有活血止血、補氣固表，增強造血功能，增強機體免疫功能、抗缺氧、促進血液循環及新陳代謝的作用，能降低高原反應對犬的影響。為了驗證其安全性，特做如下試驗。

一、材料與方法

（一）中草藥添加劑

中草藥添加劑主要由紅景天、黃芪、當歸、玫瑰花等多味中藥材按比例精制成粉末狀。

（二）試驗動物

試驗用小白鼠，體重為19 ～20g左右；大白鼠，體重為150g 左右，由南京中醫藥大學實驗動物中心提供，SPF 級，雌雄兼用，按性別分籠飼養，食固體飼料，自由飲水，室溫20 ～25℃，相對濕度45%～52%。

二、試驗方法

（一）急性毒性試驗

取小白鼠20 只，分成試驗組和對照組，雌雄各半，分籠飼養，每籠5 只，共4 籠。常規飼養3d后開始試驗，將中草藥添加劑經口投服于試驗組小白鼠，最大服量為0.375g/20g/次，3 次/d；對照組等量固體飼料，連續服用7d。給藥后立即觀察小白鼠的反應情況，連續觀察7 天，記錄小白鼠的外觀、行為、精神、飲食、大小便、分泌物以及死亡等情況。實驗結束時，處死所有小白鼠進行尸體剖檢，取其內臟進行病理組織學檢查。

（二）亞急性毒性試驗

1.分組及試驗條件

取50 只大白鼠隨機分成5 個組，第5 組為對照組，每組10 只，雌雄各半。大白鼠禁食20h 后，經口投服中草藥飼料添加劑，投服量1～4 組分別為1.5g、1.125g、0.75g、0.375g，每天分3 次口服，對照組給予等量固體飼料，連續7d。各組均采用相同的飼養管理方式，在飼養過程中，對其進行觀察，并記錄各組大白鼠的毒性反應及死亡情況。

2.大白鼠生長體重的測定

試驗期間，每15 天稱重1 次。

3.大白鼠血液生理生化指標的檢測

在灌服添加劑的第30 天斷尾采血，進行紅細胞、白細胞計數，血紅蛋白、白蛋白、總蛋白含量測定，以及對堿性磷酸酶、谷丙轉氨酶、尿素氮與血清膽固醇活性的測定，除紅細胞和白細胞分類計數外，其余指標均采用MD-100 自動生化分析儀檢測。

4.病理組織學變化特征

實驗過程中剖檢死亡和瀕死大白鼠，以及實驗結束時處死所有大白鼠進行剖檢，取其內臟進行病理組織學檢查，首先用肉眼觀察剖檢變化，然后取心、肺、肝、腎、腸等組織，用10%福爾馬林固定，常規脫水，透蠟，石蠟包埋，切片，H.E染色，光鏡觀察。

5.數據統計處理

用t 檢驗法分析組間差異。

三、結 果

（一）急性毒性試驗

通過7d 喂養試驗，56.25g/kg體重的中草藥添加劑給小白鼠灌胃，試驗中所有小白鼠活動正常，行為、精神、飲食、大小便、分泌物等無異常，也未見死亡。小白鼠反應靈敏，呼吸平穩。小白鼠精神狀況正常，采食量、增長率與對照組相比,均無顯著性差異(P＞0. 05)。試驗結束時處死小鼠，解剖肉眼觀察主要臟器顏色及形態學改變，結果心、肝、脾、肺、腎等主要臟器未見異常。據此，中草藥飼料添加劑經小白鼠灌胃給藥1日最大給藥劑量56.25 g/kg，未見明顯急性毒性反應，表明該制劑安全無毒。

表1 7d 小白鼠喂養試驗情況

表2 大白鼠試驗詳細情況

表3 喂養30d 后的大白鼠血液生理生化指標

(二 )亞急性毒性試驗

1.大白鼠基本狀況

試驗中，多數大白鼠于經口投服后精神狀況、活動正常，反應靈敏，呼吸平穩，高劑量組稍有行動遲緩的情況，15 分鐘后恢復正常。急性毒性大鼠經口大于或等于10000mg/kg，沒有出現副作用和不良反應。喂養15d、30d 時,試驗組大白鼠平均日增重0.3275g，對照組平均日增重0.32g；處理組與對照組的體重均無顯著性差異(P＞0.05)（見表2）。內臟經組織病理學檢查，無任何異常病變。

2.大白鼠血液生理生化指標的檢測

從表3 可以看出（見表3），喂養30d 的大白鼠，紅細胞、白細胞以及血紅蛋白略有上升，其他指標均無明顯變化，與對照組相比，差異均不顯著(P＞0.05)。說明灌服中草藥飼料添加劑對機體血清酶的活性與生理指標均無顯著影響。

3.組織學觀察

試驗結束臟器處理后光鏡觀察心、肺、肝、腎、腸等，未見明顯異常。

四、討 論

我們針對犬高原反應的特點和中草藥的作用機理，對傳統中草藥經現代藥理學研究篩選，研制出對犬高原反應具有預防和治療作用的中草藥添加劑。方中主要成分包括：紅景天、黃芪、當歸、玫瑰花等中草藥，以紅景天為君藥起主要作用，輔助其他各味以活血止血、補氣固表，增強免疫、抗缺氧之功效。

急性毒性試驗中，中草藥添加劑經小鼠口服的1日最大量56.25g/kg，相當于一頭工作犬(30kg)用量的281倍，沒有出現副作用和不良反應；結果表明該中草藥飼料添加劑對犬等動物基本無毒害作用 。

從亞急性毒性試驗結果可以看出，中草藥添加劑可使大白鼠的紅細胞、白細胞、血紅蛋白的數量有所增加，體重平均日增重0.3275g，說明該中草藥添加劑具有增強機體免疫力和促進動物生長的作用，這主要是中草藥中含有的苷類、多糖類、氨基酸和動物所需的轉化酶等免疫活性物質能活化機體的免疫系統。這些物質從不同環節激發免疫應答，其中包括增強機體免疫功能，抗缺氧，促進血液循環及新陳代謝的作用。