江西省2005～2017年鯉春病毒血癥病毒感染流行病學研究

田飛焱，歐陽敏，謝世紅，徐節華，劉文珍，孟霞，銀旭紅，花麒

（江西省水產技術推廣站，江西 南昌 330046）

鯉春病毒血癥病毒（Spring Viremia of Carp Virus,SVCV）可引起鯉科魚類大規模暴發鯉春病毒血癥（Spring Viremia ofCarp,SVC），該病是一種急性、高致病性的傳染性疾病，曾在歐洲很多國家發生，給當地鯉養殖業造成巨大的經濟損失[1,2]。2003年以來我國不斷檢測到SVCV，在個別地區暴發SVC疫情，表明SVC在我國逐步蔓延[3,4]。SVC發生和傳播對我國水產養殖業，特別是鯉科魚類的養殖構成潛在威脅，因此深入研究其病原的自然感染率、地區分布、遺傳變異等流行病學特征，對疾病的監測、防控及診斷試劑和疫苗的研發都具有重要意義。

本研究于2005—2017年間，應用細胞分離法和反轉錄聚合酶鏈式反應（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,PCR）方法監測了江西省一些重要漁場養殖鯉科魚類SVCV，比較了不同地區SVCV分離株的分子特征，旨在摸清本省SVCV流行情況，提高疫病風險預警防控能力，保障江西省養殖業的持續健康發展。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2005—2017 年春秋季，根據SC/T 7103-2008[5]的采樣要求，組織縣級水生動物防疫站在全省范圍內的漁場采集鯉科魚類活體樣品，采樣水溫范圍11～20℃，每個漁場每年只采集一份樣品，每份樣品采集數≥150尾（假定某一魚類養殖群體≥100 000尾，2%感染率），依照GB/T15805.5-2008檢測方法[6]進行檢測。

1.2 病原監測

按照GB/T 15805.5-2008規范，將樣品組織懸液接種到鯉上皮瘤細胞（EPC）中培養，觀察細胞是否出現細胞病變效應（cytopathic effect,CPE）；用套式RT-PCR方法擴增SVCV的糖蛋白（G）基因片段，依照標準綜合判定是否存在SVCV感染。引物序列為：SVCV-R2：5’-AGATGGTATGGACCCCAA TACATHACNCAY-3’；SVCV-R4：5’-CTGGGGTTT CCNCCTCAAAGYTGY-3’；SVCV-F1:5’-TCTTGGA GCCAA ATAGCTCARRTC-3’。其中F1和R2用于擴增714bp片段，而F1和R4則從中再擴增606bp的片段。

1.3 序列分析

陽性樣品的PCR產物經基因測序后用DNAS-tar對測序結果進行核苷酸序列同源性分析，從GenBank中選取與陽性序列相似的參考毒株，用MEGA7.0軟件采用鄰位相連法（Neighbor-joining）構建進化樹。

2 結果與分析

2.1 檢測結果

2005—2017 年的春秋季在江西11個地市的69個縣（市、區）隨機采集、檢測了576份樣品（表1）。其中錦鯉樣品64份，鯉樣品113份，鯽Carassius auratus樣品177份，草魚Ctenopharynogodon idellus樣品202份，草金魚Carassius auratus樣品2份，鰱Hypophthal michthys molitrix樣品13份，鳙Aristichthysnobilis樣品3份，鳊Parabramis pekinensis樣品1份，刺鲃Spinibarbus caldwelli樣品1份。共監測到SVCV陽性樣品23份（表2），總的陽性檢出率為3.99%，其中2009以前的5年僅2007年有2份陽性樣品檢出，2010年起陽性樣品檢出增多，其中2012—2016年連續5年均有陽性檢出。

表1 2005～2017年江西省漁場SVCV監測情況Tab.1 SVCV surveillance in Jiangxi Province,China,from 2005 to 2017

2.2 流行特征

2.2.1 種類分布

本研究采樣的（品）種類覆蓋度較高，包含鯉科的錦鯉、鯉、草魚、鯽、草金魚、鰱、鳙、鳊和刺鲃，其中從錦鯉、鯉、草魚、鯽中檢出陽性樣品數分別是4、2、3和14個，占各（品）種類樣品數的6.25%、1.77%、1.48%和 7.91%，草金魚、鰱、鳙、鳊、刺鲃樣品中未檢出陽性樣品。鯽的陽性檢出率最高，其次是錦鯉，鯉和草魚陽性檢出率相對較低。統計分析與χ2檢驗表明，鯽的SVCV的攜帶率與鯉（P＜0.05）、草魚（P＜0.01）具有統計學意義，與錦鯉的SVCV的攜帶率差異不具有統計學意義（P＞0.05）。

2.2.2 季節分布

2005—2017 年在江西省春季采集樣品312份，水溫范圍11～20℃，檢出陽性15份，陽性檢出率4.81%；秋季采集樣品264份，水溫范圍11～20℃，檢出陽性8份，陽性檢出率3.03%。春、秋季的SVCV的陽性檢出率差異不具有統計學意義（P＞0.05），即春秋季節SVCV的陽性檢出率無顯著差異（表2）。

表2 江西省漁場2005—2017年SVCV陽性樣品信息Tab.2 Information regarding SVCV isolates in Jiangxi Province,China,from 2005 to 2017

2.2.3 遺傳進化分析

根據SVCV G基因序列的遺傳進化，SVCV分離株可分為4個基因亞型：Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc和Ⅰd[7,8]。用MEGA7.0將獲得的部分江西分離株的G基因部分序列和SVCV各基因型序列構建的遺傳進化樹表明，江西分離株與中國株772、461、A1、BJ0505-02、SVCV-265；亞洲株 D148、英國株 H264、G108；美國株 North Carolina Isolate of2002、500549、316715；加拿大株HHOcarp06等在同一分支上，親緣關系較近，聚為一類，同屬于Ⅰa基因亞型；與其他基因型分離株在不同的分支上，親緣關系較遠（圖1）。江西分離株的同源性分析顯示：獲得的江西分離株同源性非常高，達到95.5%，部分江西分離株之間同源性達到了100%，SVCV江西分離株間的親緣關系較近，本地區存在SVCV的近距離傳播

圖1 江西省SVCV分離株與其他地區的SVCV分離株部分G基因序列的遺傳進化樹Fig.1 Phylogenetic trees based on partial glycoprotein gene sequences of SVCV isolates from Jiangxi Province and other SVCV species in Genbank

2.2.4 區域分布

本研究采樣區域較廣，覆蓋了全省11個地市的69個縣（市、區）。2009年以前江西省僅在南昌縣發現SVCV，2010年起發現SVCV分布范圍逐步擴大，截止目前江西省僅新余市、撫州市未發現SVCV分布，其余9個地市均發現SVCV，陽性漁場主要集中在贛中的南昌縣、新建縣、上高縣；贛西的安福縣、吉安縣、上栗縣；贛東的廣豐區、貴溪市；贛北的彭澤縣、廬山市；贛南的信豐縣、石城縣。江西省SVCV陽性樣本分布區域較為分散，陽性漁場在地理上呈零星分布，分布范圍較廣。

3 討論

鯉春病毒血癥（Spring Viremia of Carp,SVC）是鯉科魚類的一種急性出血性并高度傳染的流行病，通常在春季水溫10～20℃時流行，引發幼魚和成魚大量死亡。100多年來SVC在歐洲各國（包括俄羅斯）流行，給歐洲的鯉養殖業造成了巨大的經濟損失[2,9,10]。本研究2005—2017年持續進行SVCV感染流行病學研究發現：在錦鯉、鯉、草魚、鯽中均檢出SVCV，鯉科魚類帶毒較為廣泛，陽性檢出率從高至低依次為：鯽7.91%、錦鯉 6.25%、鯉1.77%、草魚1.48%，其中鯽和錦鯉的陽性檢出率相對較高。Eveline等[11]用浸泡和注射方式將SVCV美國株（AY527273/North Carolina Isolate of 2002）感染錦鯉、黃鱸Diploprion bifasciatum、大馬哈魚Oncorhynchus keta等6種不同科的魚類，結果表明SVCV對錦鯉高度易感染。統計分析與χ2檢驗表明：江西省采集的樣品中鯽的SVCV的攜帶率與鯉（P＜0.05）、草魚（P＜0.01）具有統計學意義，與錦鯉的SVCV的攜帶率差異不具有統計學意義（P＞0.05），即鯽的SVCV的攜帶率顯著高于鯉、草魚，與錦鯉相當。說明在本地區除錦鯉外，鯽也是一種SVCV高度易感種，發生該疫病的風險也較高。在江西省春、秋兩季均能檢測到陽性樣品，春、秋季節與陽性檢出率間無相關性，11～20℃的水溫范圍內有陽性樣品檢出。

系統進化樹顯示，江西分離株與中國株（SVCV-265、772、461、G067、A1、BJ0505-2）、亞洲株（D148）、英國株（H264,G108）、美國株（North Carolina Isolate of 2002、316715、500549）、 加 拿 大 株（HHOcarp06）等在同一分支上，親緣關系較近，聚為一類，屬于Ⅰa基因亞型，這與Zhang等[12]構建的進化樹中亞洲分離株主要屬于Ⅰa基因亞型的結論一致。聚為一類可認為來源相近，表明江西分離株與已發表的中國分離株、美國株來源相近。2005—2017年江西省所有檢測出SVCV的陽性漁場經流行病學現場調查均未發生SVC。Xiao等[13]將SVCV中國株（SVCV-265）人工感染錦鯉，試驗亦未觀察到錦鯉有明顯的臨床癥狀和死亡現象，但同屬于Ⅰa基因亞型的美國株（North Carolina Isolate of2002）曾導致2002年美國的北卡羅來鈉州暴發SVC[14,15]，表明不同區域的環境因素影響Ⅰa型SVCV的致病性。因此，Ⅰa型SVCV感染鯉科魚類并引起發病的因素還有待進一步的研究，Ⅰa型SVCV陽性的鯉科魚類養殖場依然存在發生SVC的風險。

2009年以前江西省僅在南昌縣發現SVCV，2010年起陸續在全省其他漁區發現，SVCV存在省內近距離傳播，分布點近些年也有所擴散，表明感染區域范圍有逐漸擴大的趨勢。SVCV主要是水平傳播（帶毒魚、被污染的水、網具等）[16]。江西省主要有贛江、撫河、信江、饒河、修河等五大水系，水流均最終匯入鄱陽湖及周邊湖泊。本研究主要監測江西省內漁場的養殖鯉科魚類情況，尚未監測野生魚類。從江西水系分布來看，全省主要水系通過鄱陽湖密切相連，一旦SVCV傳染到河流內的野生魚類，通過帶毒魚和病毒污染的水體傳播，可能會加劇該病疫情在江西更大范圍傳播的風險。因此，為了降低SVC病原的傳播和擴散風險，需要擴大疫情監測范圍（包括野生魚類），加強生物安保意識的宣傳，提高漁民在養殖環節中對染疫對象的生物無害化處理意識，筑牢生物安全屏障。