地拉羅司有關物質分析方法研究

魏 娜，孟文娟，何 雷，王珍珍

(江蘇豪森藥業集團有限公司，江蘇 連云港 222000)

過多的鐵沉積在人體組織器官，會導致細胞損傷和器官功能障礙，其發病原因可分為原發和繼發兩種。原發性鐵過載由遺傳因素異常導致，見于原發性血色病。臨床上以繼發性鐵過載多見，主要是由于長期反復輸血等各種原因導致無效紅細胞生成及肝病引起鐵代謝障礙等造成[2]。地拉羅司是由瑞士諾華制藥公司(Novartis Pharma Schweiz AG)研究開發的鐵螯合劑產品，它是一種三齒狀鐵螯合劑，可與三價鐵離子以2∶1比例形成復合物，從糞便排泄，從而降低人體中鐵的含量[3]。該品種目前暫未收載于2015版中國藥典、美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)及英國藥典(BP)中，本文對主流合成路線下可能產生的雜質進行分析，對地拉羅司的有關物質方法進行了開發優化，采用確定的分析方法進行方法驗證。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，Agilent；SE602F電子天平，奧豪斯；XS105DU電子分析天平，梅特勒-托利多；S220酸度計，梅特勒-托利多；乙二胺四乙酸二鈉(分析純)；磷酸(分析純)；乙腈(色譜純)；純化水。

2 雜質分析

目前主流的地拉羅司合成方法以水楊酸為原料，經與二氯亞砜氯化、水楊酰胺脫水環合、4-羧基苯肼開環重排得到地拉羅司[4]。地拉羅司中可能存在的工藝雜質主要有起始原料、中間體。起始原料有水楊酸、水楊酰胺、4-肼基苯甲酸(4-肼基苯甲酸為潛在基因毒性物質，需用靈敏度更高的方法進行控制)，中間體為2-(2-羥基苯基)-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮。取地拉羅司適量，分別在酸(1mol/L鹽酸)、堿(1mol/L氫氧化鈉)、氧化(30%H2O2)、熱解(90℃水浴)、高溫(105℃)和光照(4500lx)各條件下進行破壞，采用確定的方法進行檢測，結果表明本品在酸、堿、氧化、高溫、熱解、光照條件下均較穩定，無明顯的降解雜質。

3 檢測方法開發

在二極管陣列檢測器上對地拉羅司及雜質進行掃描，發現成品及主要雜質的特征吸收為250nm。本品為鐵離子螯合劑，會與檢測系統中可能存在的鐵離子螯合，對樣品的檢測結果產生影響。體系中鐵離子的來源主要有流動相、色譜儀管道和色譜柱，為了消除微量鐵離子，在流動相中加入乙二胺四乙酸二鈉，利用乙二胺四乙酸二鈉與金屬離子的絡合作用消除對樣品檢測產生的干擾。

采用十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑色譜柱，檢測波長250nm，流動相體系為乙二胺四乙酸緩沖液-水-乙腈，對流動相的pH值和色譜柱柱溫進行篩選，結果表明流動相的pH值為2.0，柱溫60℃時各雜質的分離是最為理想的。對梯度進行調整，最終確定的色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速為每分鐘1.0mL；檢測波長為250nm；柱溫為60℃。流動相A為0.1mg/mL乙二胺四乙酸緩沖液(pH值=2.0)-水-乙腈(100∶800∶100)，流動相B為0.1mg/mL乙二胺四乙酸緩沖液(pH值=2.0)-乙腈(100∶900)。按表1進行梯度洗脫。

表1 洗脫進行梯度

4 結果與討論

(1)在確定的色譜條件下，對各已知雜質進行檢測，考察方法的專屬性，各雜質與主峰的分離度均符合規定。

(2)地拉羅司及各雜質在0.20～2.0μg/mL的范圍內線性關系良好，相關系數r均大于0.999。

(3)以各雜質限度(0.1%樣品測定濃度)為基準100%，分別配制成含雜質10%、50%、100%和200%的溶液，平均回收率在91.2%～101.3%之間，該方法檢測雜質的準確度良好。

(4)地拉羅司及各雜質的檢測限≤0.01%(與檢測濃度比值)，定量限≤0.02%(與檢測濃度比值)，該方法檢測雜質的靈敏度良好。

(5)微調乙二胺四乙酸緩沖液pH值、柱溫和起始比例，各雜質與主峰的分離度均符合規定，該方法的耐用性良好。

(6)由不同分析人員在不同儀器設備上，不同時間進行檢測，結果并無差異，表明該方法重現性良好。