新城疫病毒株F48E9對(duì)CT26小鼠結(jié)腸癌的溶瘤治療作用

鐘建平，李 睿，王國(guó)松，洪俊平，付 饒，陳毅歆,

根據(jù)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的《2017中國(guó)癌癥報(bào)告》顯示：與2012年相比，我國(guó)2013年癌癥新發(fā)人數(shù)繼續(xù)上升，累計(jì)病例數(shù)從385萬(wàn)增加到398萬(wàn)，增幅3%，占當(dāng)年世界新發(fā)病例的近25%。其中，結(jié)腸癌增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯，在男性腫瘤中其發(fā)病率排第5位，在女性腫瘤中排第3位，綜合死亡率排第5位，位于肺癌、胃癌、肝癌、食管癌之后。目前在臨床上結(jié)腸癌以手術(shù)切除治療為主，放療化療以及免疫治療為輔[1]。手術(shù)治療之后，結(jié)腸癌比較容易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，是結(jié)腸癌引起患者死亡的主要原因[2]。

免疫治療是最有前景的腫瘤治療手段之一，曾入選《科學(xué)》雜志“2013 十大科學(xué)突破”榜首[3]。基于病毒的溶瘤治療是免疫治療的重要途徑之一，包括人類(lèi)單純皰疹病毒(HSV)、新城疫病毒(NDV)、腺病毒(Adenovirus)、柯薩奇病毒(Coxsackie virus)、麻疹病毒(measles virus，MV)、呼吸道腸道病毒(reovirus)、水皰性口炎病毒(VSV)等在內(nèi)的病毒都已被證明具有溶瘤作用[4-5]，可通過(guò)直接感染裂解腫瘤細(xì)胞、激活機(jī)體免疫系統(tǒng)等多種途徑發(fā)揮腫瘤的抑制或清除作用，部分病毒株已在臨床治療中顯示出良好的治療效果，其中1株改造過(guò)的HSV溶瘤病毒已經(jīng)在美國(guó)正式上市[6-8]。

NDV是一種單鏈負(fù)義RNA病毒，屬于副粘病毒科，主要感染禽類(lèi)，偶見(jiàn)患者感染事件，引起結(jié)膜炎[9]和溫和的流感癥狀等[10]。從20世紀(jì)60年代至今，已有73-T、MTH-68、PV701、HUJ、La Sota等多個(gè)NDV減毒株或弱毒株開(kāi)展了一期和二期藥物臨床試驗(yàn)[6, 11-13]，但都沒(méi)有進(jìn)入三期臨床試驗(yàn)階段，提示現(xiàn)有的NDV弱毒株或減毒株的治療效果可能不夠好，因此，有必要開(kāi)發(fā)療效更好的NDV溶瘤病毒株。胡立華[14]等比較了NDV強(qiáng)毒株F48E9和NDV弱毒株LaSota對(duì)大腸癌細(xì)胞LS1747的體外殺傷效果，提示F48E9可能具備溶瘤治療潛能，但該研究未在動(dòng)物水平上評(píng)估F48E9溶瘤抑制效果和治療安全性。因此，本研究擬以CT26小鼠結(jié)腸癌為模型，深入研究NDV強(qiáng)毒株F48E9對(duì)CT26腫瘤細(xì)胞和CT26小鼠皮下移植瘤的體內(nèi)外抑制作用，并通過(guò)靜脈注射小鼠評(píng)價(jià)F48E9的體內(nèi)治療安全性，從而確定NDV強(qiáng)毒株F48E9是否可作為候選病毒株進(jìn)行后續(xù)的反向遺傳學(xué)改造，為最終建立高效安全的NDV溶瘤病毒株奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1病毒、細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新城疫病毒株F48E9為中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)王曉佳教授饋贈(zèng)；結(jié)腸癌CT26細(xì)胞購(gòu)自ATCC(#ATCC CRL-2638)；BALB/c小鼠(6-8周齡)購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(#003)。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑與耗材 細(xì)胞活力檢測(cè)CCK-8試劑盒購(gòu)自碧云天公司(#C0040)；細(xì)胞增殖多克隆抗體Ki-67購(gòu)自NOVUS公司(# NB110-89717)；即用型免疫組化試劑盒UltraSenitive TM SP購(gòu)自福州邁新公司(#KIT9720)，內(nèi)含內(nèi)源性氧化物阻斷試劑、正常動(dòng)物免疫血清(羊)、生物素標(biāo)記的第二抗體及鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶；DAB顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新公司(#DAB-0031)；蘇木精染色液購(gòu)自SIGMA-ALDRICH公司(# HHS16)；醇溶伊紅染色液購(gòu)自SIGMA-ALDRICH公司(#HT110116)。

1.3 方 法

1.3.1F48E9的培養(yǎng)、滴定 培養(yǎng)Vero細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期并且狀態(tài)良好時(shí)，消化細(xì)胞，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)，并將3×106個(gè)Vero細(xì)胞鋪在10 cm細(xì)胞培養(yǎng)板中，放置在37 ℃，5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)72 h等到細(xì)胞完全覆蓋細(xì)胞板時(shí)取其中一板進(jìn)行消化計(jì)數(shù)并記錄。使用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基稀釋F48E9病毒液，再按照MOI=0.1(病毒數(shù)/細(xì)胞數(shù)，MOI)感染Vero細(xì)胞，放置在溫箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程中每15 min搖晃1次，孵育75 min使病毒充分吸附在細(xì)胞上，之后棄去殘余的病毒液并加入10 mL 含2%血清的維持液，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h后收取細(xì)胞，反復(fù)凍融裂解細(xì)胞3次，然后使用3 000 r/min離心細(xì)胞裂解物15 min，除去細(xì)胞碎片，分裝上清液至病毒凍存管中并進(jìn)行空斑形成實(shí)驗(yàn)滴定病毒的滴度，空斑實(shí)驗(yàn)方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[15]，保存在-80 ℃超低溫冰箱中。

對(duì)生產(chǎn)的病毒進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證明F48E9感染細(xì)胞的活性。消化Vero細(xì)胞，然后鋪板至24孔板中，每孔2×105個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，覆蓋80%～90%培養(yǎng)孔時(shí)，進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)。一抗為本實(shí)驗(yàn)制備的F48E9株NP蛋白小鼠單克隆抗體4E7，二抗為T(mén)RITC標(biāo)記的羊抗鼠熒光二抗，DAPI染細(xì)胞核[16]。使用熒光顯微鏡進(jìn)行拍照并分析。

1.3.2F48E9對(duì)CT26細(xì)胞的體外感染抑制實(shí)驗(yàn) 胰酶消化CT26細(xì)胞，按每孔0.1 mL濃度為2×105個(gè)細(xì)胞鋪至96孔板中；稀釋F48E9病毒，分別按MOI=10、1、0.1、0.01感染鋪板12h后的CT26細(xì)胞，每個(gè)病毒濃度梯度設(shè)置3孔重復(fù)；在感染72 h后用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力的變化，實(shí)驗(yàn)操作方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.3.3F48E9對(duì)CT26細(xì)胞小鼠皮下移植腫瘤的體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn) 培養(yǎng)CT26細(xì)胞，消化制備成濃度為5×107個(gè)/ mL的細(xì)胞懸液，接種于16只6周齡BALB/c雌鼠右側(cè)背部皮下，每只小鼠接種0.1 mL細(xì)胞，接種數(shù)量是5×106個(gè)細(xì)胞；接種后持續(xù)監(jiān)測(cè)皮下腫瘤的生長(zhǎng)狀態(tài)并測(cè)量腫瘤的大小，在接種約十天后挑選10只腫瘤大小均一且體積達(dá)到80～100 mm3的小鼠進(jìn)行溶瘤治療，隨機(jī)分成兩組，每組5只；治療實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)瘤內(nèi)注射0.1 mL濃度為2×107pfu的F48E9，未治療對(duì)照組小鼠經(jīng)瘤內(nèi)注射0.1 mL PBS緩沖液，每隔一天注射1針，共注射5針。每天使用數(shù)字游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的尺徑和觀察小鼠的生存情況，腫瘤體積計(jì)算公式為 V=ab2/2 (a為長(zhǎng)徑，b為短徑)，當(dāng)小鼠皮下腫瘤任一邊長(zhǎng)的直徑大于18 mm時(shí)出于動(dòng)物倫理考慮判定為死亡，并實(shí)施安樂(lè)死[17]。

1.3.4F48E9溶瘤治療CT26皮下瘤的免疫組化分析 按照上述方法構(gòu)建CT26細(xì)胞皮下移植瘤，選取8只腫瘤體積為80～100 mm3的小鼠隨機(jī)分成兩組，每組4只；實(shí)驗(yàn)組為瘤內(nèi)注射0.1 mL濃度為 2×107pfu的F48E9毒株，對(duì)照組為瘤內(nèi)注射0.1 mL PBS緩沖液，每2 d注射1針病毒液，共注射3針；第3針注射2 d后對(duì)全部8只小鼠實(shí)施安樂(lè)死，取出腫瘤組織進(jìn)行組織化學(xué)染色[18]。組織脫蠟復(fù)水后，山羊血清封閉1 h；一抗為商品化的兔多抗Ki-67抗體和PBS對(duì)照，4度孵育過(guò)夜，PBS洗3次；生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗常溫孵育10 min，PBS洗3次；過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素抗生物素蛋白三抗常溫孵育10 min，PBS洗3次；DAB顯色液顯色30 s，去離子水終止顯色反應(yīng)。使用奧林巴斯正置熒光顯微鏡(BX51)和cellSens Standard軟件進(jìn)行拍照并分析組織化學(xué)染色結(jié)果。

1.3.5F48E9的小鼠體內(nèi)安全性分析 取20只6周齡BALB/c雌鼠隨機(jī)分成2組，每組10只，稱(chēng)量其體重；隨后進(jìn)行小鼠尾靜脈攻毒，實(shí)驗(yàn)組的每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射1 mL 濃度為2×107pfu的F48E9病毒，對(duì)照組為1 mL PBS緩沖液，每2 d進(jìn)行1次尾靜脈注射，共3針；第3針注射2 d后從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中各取4只小鼠實(shí)施安樂(lè)死，取出主要器官進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，其余小鼠每4 d稱(chēng)量1次體重并觀察小鼠的活動(dòng)狀態(tài)。取浸泡后的小鼠主要器官進(jìn)行包埋脫蠟復(fù)水，蘇木素染色液染色，脾臟1 min，腎臟2 min，肝臟8 min，肺組織10 min。染色結(jié)束后，去離子水清洗三遍。鹽酸酒精分化4 s，迅速用去離子水終止分化，去離子水清洗三遍，去離子水返藍(lán)45 min。伊紅染色1 min，去離子水終止染色。使用奧林巴斯正置熒光顯微鏡(BX51)和cellSens Standard軟件進(jìn)行拍照并分析組織化學(xué)染色結(jié)果。

1.3.6統(tǒng)計(jì)與分析 對(duì)于兩組數(shù)據(jù)之間的比較，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；對(duì)于兩組以上的數(shù)據(jù)采用方差分析進(jìn)行顯著性評(píng)估。當(dāng)P<0.05時(shí)，表示結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1F48E9株的培養(yǎng)和滴定 用Vero細(xì)胞株培養(yǎng)擴(kuò)增F48E9，收獲的病毒液分裝保存于-80 ℃超低溫冰箱中，經(jīng)空斑形成試驗(yàn)法滴定，滴度為2×107pfu/mL。F48E9感染Vero細(xì)胞后可以形成肉眼可見(jiàn)的明顯病毒空斑(圖1A)，免疫熒光試驗(yàn)顯示用F48E9的NP特異性單抗能在感染F48E9的細(xì)胞中檢測(cè)到熒光信號(hào)(圖1B)，表明病毒株F48E9在Vero細(xì)胞中得到特異性擴(kuò)增。

2.2F48E9對(duì)CT26結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用 F48E9株感染CT26細(xì)胞72 h后，使用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力水平。結(jié)果顯示，當(dāng)MOI=10、1、0.1、0.01時(shí)，CT26細(xì)胞的活力分別為44.6%、53.8%、84.9%、96.2%，說(shuō)明新城疫病毒F48E9株能夠有效抑制CT26細(xì)胞的生長(zhǎng)，其抑制效果與病毒的感染劑量成正相關(guān)，即感染病毒的MOI越高，對(duì)CT26細(xì)胞活力的抑制越明顯(圖2)。

2.3F48E9對(duì)CT26細(xì)胞小鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用 在免疫功能正常的BALB/c小鼠皮下接種CT26細(xì)胞，等腫瘤生長(zhǎng)至體積為80～100 mm3時(shí)，實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)瘤內(nèi)注射F48E9病毒液，對(duì)照組小鼠注射PBS緩沖液，持續(xù)監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)和小鼠生存情況。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠的皮下腫瘤始終處于抑制狀態(tài)，其腫瘤體積遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于PBS對(duì)照組(圖3A，B)；同時(shí)，病毒實(shí)驗(yàn)組小鼠的中位生存期為38 d，平均總生存期為38.4 d，PBS對(duì)照組的中位生存期為14 d，平均總生存期為15.2 d。上述結(jié)果表明，新城疫病毒F48E9能顯著抑制CT26結(jié)腸癌細(xì)胞小鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)，顯著延長(zhǎng)小鼠生存期(圖3C)。

圖1 新城疫病毒株F48E9的培養(yǎng)和滴定空斑實(shí)驗(yàn)(A)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)(B)Fig.1 Culture and titration of Newcastle disease virus F48E9 strain Plaque assay (A) and immunofluorescence assay (B)

(****P<0.000 1，*P<0.05，no.P>0.05)圖2 新城疫病毒株F48E9對(duì)CT26結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用Fig.2 Inhibitory effects of Newcastle disease virus F48E9 strain on the growth of CT26 cells

2.4F48E9可抑制CT26荷瘤小鼠內(nèi)腫瘤細(xì)胞的增殖 為進(jìn)一步確定F48E9是否通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖來(lái)抑制小鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)，取CT26荷瘤BALB/c小鼠進(jìn)行瘤內(nèi)注射實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)組瘤內(nèi)注射3針F48E9病毒液，然后對(duì)小鼠實(shí)施安樂(lè)死，取出腫瘤組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，觀察細(xì)胞增殖標(biāo)記物Ki-67蛋白的表達(dá)情況，對(duì)照組注射PBS緩沖液。Ki-67蛋白是一種核定位蛋白，只表達(dá)于細(xì)胞分裂期，Ki-67的過(guò)表達(dá)與細(xì)胞快速增殖密切相關(guān)。免疫組化分析結(jié)果顯示，注射F48E9的小鼠皮下腫瘤細(xì)胞呈Ki-67陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)明顯少于注射PBS的對(duì)照組小鼠(圖4)，提示新城疫病毒株F48E9可能通過(guò)抑制小鼠腫瘤細(xì)胞的增殖來(lái)抑制小鼠皮下腫瘤的生長(zhǎng)。

2.5新城疫病毒F48E9的安全性評(píng)估 為評(píng)估新城疫病毒F48E9的治療安全性，取F48E9對(duì)健康BALB/c小鼠進(jìn)行尾靜脈注射(n=10)。注射3針病毒后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各取4只小鼠進(jìn)行安樂(lè)死處理，然后取主要臟器進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，觀察注射F48E9病毒是否會(huì)引起小鼠器官損傷，對(duì)其余每組各6只小鼠持續(xù)監(jiān)測(cè)其體重并觀察動(dòng)物活動(dòng)狀態(tài)。結(jié)果顯示，接種F48E9病毒的小鼠活動(dòng)正常，其飲食、毛色等沒(méi)有出現(xiàn)異常情況；體重監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明，病毒接種組與PBS接種組的小鼠體重未見(jiàn)明顯差別，都沒(méi)有明顯的下降或波動(dòng)(圖5.A)，存活率都是100%(圖5.B)；蘇木素-伊紅染色表明，病毒接種組和PBS接種組的染色細(xì)胞未見(jiàn)明顯差異，組織細(xì)胞都呈正常形態(tài)(圖5.C)。上述結(jié)果表明新城疫病毒強(qiáng)毒株F48E9對(duì)BALB/c小鼠具有良好的安全性。

3 討 論

本文研究新城疫病毒強(qiáng)毒株F48E9對(duì)小鼠結(jié)腸癌CT26腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)外生長(zhǎng)抑制作用并評(píng)價(jià)其在小鼠體內(nèi)的安全性。結(jié)果顯示強(qiáng)毒株F48E9在體外能顯著抑制CT26細(xì)胞的生長(zhǎng)，在小鼠體內(nèi)能通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)；而且F48E9對(duì)BALB/c小鼠的治療具有良好的安全性，尾靜脈注射病毒未對(duì)小鼠造成明顯的副作用。

新城疫病毒株F48E9作為國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株，國(guó)內(nèi)對(duì)F48E9的研究主要集中于禽類(lèi)疫苗以及F48E9 的生物學(xué)特性等，罕見(jiàn)其用于溶瘤治療的研究報(bào)道。胡立華[14]等比較了強(qiáng)毒株F48E9和弱毒株LaSota對(duì)大腸癌細(xì)胞LS1747的體外殺傷效果，但是沒(méi)有進(jìn)行體內(nèi)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)，本研究將F48E9應(yīng)用于CT26細(xì)胞BALB/c小鼠移植瘤模型的治療研究，對(duì)F48E9的腫瘤治療潛能有更全面的認(rèn)識(shí)。國(guó)外也有利用NDV治療CT26小鼠抑制瘤的研究報(bào)道，García-Sastre[17]等把由弱毒株NDV-B1株改造F蛋白裂解位點(diǎn)而得到的rNDV-F3aa用于接種在BALB/c小鼠CT26腫瘤的治療，小鼠中位生存期由PBS對(duì)照組的13 d延長(zhǎng)到實(shí)驗(yàn)組的23 d。本研究使用的F48E9溶瘤株可以將小鼠中位生存期由14 d延長(zhǎng)至38 d，顯示出更好的溶瘤治療效果。為進(jìn)一步全面認(rèn)識(shí)新城疫病毒株F48E9的溶瘤治療潛能，還需進(jìn)行更多的后續(xù)研究，如應(yīng)用更多種類(lèi)的腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行體內(nèi)外治療潛能評(píng)價(jià)，應(yīng)用人源結(jié)腸癌裸鼠模型進(jìn)行腫瘤治療評(píng)價(jià)，評(píng)估F48E9與PD-1、CTLA-4與CD47等腫瘤抗體聯(lián)用的治療效果[19-20]。

小鼠腫瘤體積的增長(zhǎng)值(A)及其平均值(B)，荷瘤小鼠生存率，P<0.01(C)，治療17 d后的腫瘤大小圖像(D)。PBS組為對(duì)照組。圖3 新城疫病毒株F48E9對(duì)CT26結(jié)腸癌細(xì)胞的小鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用Fig.3 Inhibitory effects of Newcastle disease virus strain F48E9 on the transplanted tumors in BALB/c mice

PBS對(duì)照組Ki-67蛋白呈陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)明顯高于F48E9治療組。標(biāo)尺=20 μm。圖4 新城疫病毒株F48E9抑制CT26腫瘤細(xì)胞的增殖Fig.4 F48E9 strain can inhibit the proliferation of CT26 tumor cells from transplanted mice

病毒處理組和PBS對(duì)照組的小鼠體重沒(méi)有明顯的差異，都沒(méi)有下降或者波動(dòng)的現(xiàn)象(A)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的小鼠存活率均為100%(B)，蘇木素-伊紅染色表明實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的主要器官都沒(méi)有損傷(C)。標(biāo)尺=50 μm。圖5 新城疫病毒株F48E9的治療安全性評(píng)價(jià)Fig.5 Safety evaluation of Newcastle disease virus strain F48E9 in BALB/c mice

在溶瘤治療研究中，給藥治療起始節(jié)點(diǎn)的早與晚對(duì)腫瘤治療效果影響十分明顯。本研究中選取的是接種約10 d，腫瘤體積較大(80～100 mm3)的小鼠進(jìn)行治療，而其他NDV溶瘤研究中選取的腫瘤體積較小，多為50 mm3以?xún)?nèi)[17,19]。盡管如此，本研究中F48E9對(duì)大腫瘤依然表現(xiàn)出很好治療作用，說(shuō)明NDV強(qiáng)毒株F48E9具有高效的溶瘤治療作用，對(duì)中晚期大腫瘤也具備較好的治療潛能。另外，由于小鼠個(gè)體的差異，對(duì)同一批次的小鼠接種相同數(shù)目的腫瘤細(xì)胞，腫瘤的生長(zhǎng)速度不盡相同[21]。本研究采取的策略是挑選腫瘤形狀規(guī)則大小均一的荷瘤小鼠，再隨機(jī)分組，有效地避免了腫瘤治療點(diǎn)腫瘤大小差異而帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)偏差。

關(guān)于NDV的溶瘤治療機(jī)制研究，我們以細(xì)胞周期蛋白Ki-67作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物[22]，通過(guò)組織化學(xué)染色分析了F48E9病毒處理組腫瘤組織中Ki-67蛋白的表達(dá)情況，證明Ki-67蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯少于PBS對(duì)照組，提示F48E9抑制細(xì)胞增殖可能是其發(fā)揮抗腫瘤的機(jī)制之一。有研究還報(bào)道了其他新城疫病毒株的溶瘤治療機(jī)制，如Adam Vigil[23]等通過(guò)比較新城疫溶瘤毒株對(duì)接種于裸鼠和BALB/c小鼠CT26腫瘤的治療效果，證明新城疫毒株對(duì)CT26腫瘤的治療依賴(lài)于T淋巴細(xì)胞，又如Hong Sui[24]等使用新城疫毒株NDV-D90治療接種于裸鼠的人源胃癌細(xì)胞，證明NDV-D90可能通過(guò)下調(diào)VGEF-A和MMP-2來(lái)抑制腫瘤血管的生成，進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)。因此，后續(xù)工作還需進(jìn)一步系統(tǒng)地研究F48E9的溶瘤治療機(jī)制。

新城疫病毒弱毒株作為一種安全的溶瘤制劑或者腫瘤疫苗載體，已得到廣泛的認(rèn)可，而對(duì)于新城疫病毒強(qiáng)度株是否適合應(yīng)用于腫瘤治療依然存在爭(zhēng)議，考慮的主要是強(qiáng)毒株的安全性。本研究通過(guò)小鼠尾靜脈攻毒實(shí)驗(yàn)，證明NDV強(qiáng)毒株F48E9對(duì)BALB/c小鼠沒(méi)有明顯的毒副作用，其體內(nèi)治療具有良好的安全性。盡管新城疫強(qiáng)毒株在實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)表現(xiàn)出了良好的安全性，但是依然存在潛在的擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，需要在后續(xù)的研究中構(gòu)建F48E9株的反向遺傳系統(tǒng)進(jìn)行改造，保留其良好的溶瘤特性的同時(shí)降低潛在的風(fēng)險(xiǎn)。

總之，研究初步顯示新城疫病毒強(qiáng)毒株F48E9對(duì)結(jié)腸癌CT26腫瘤具有較好的治療作用且安全性良好，展示出較好的溶瘤治療潛能，為充分認(rèn)識(shí)新城疫病毒強(qiáng)毒株的溶瘤治療性能提供有用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為后續(xù)的反向遺傳改造奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

利益沖突：無(wú)

本文引用格式：鐘建平, 李睿, 王國(guó)松, 等. 新城疫病毒株F48E9對(duì)CT26小鼠結(jié)腸癌的溶瘤治療作用[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào), 2019,35(4):292-298,319. DOI: 10.3969/j.issn.1002-2692.2019.00.026