英花傷寧口服液抗炎抗菌作用研究

張洪濤 ，賴岳曉 ，黎巧萍 ，田素英 ，3 ，劉佩沂 ，曾永成 ，李 詩(shī)

（1.廣東省中山市黃圃人民醫(yī)院，廣東 中山 528429； 2.廣東藥科大學(xué)，廣東 廣州 510006； 3.廣東省實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，廣東 中山 528458）

英花傷寧口服液為中山市黃圃人民醫(yī)院名老中醫(yī)臨床驗(yàn)方，由山銀花、丹參、黃連、徐長(zhǎng)卿等15味中藥組方，具有化瘀、消腫、涼血、止痛等功效，臨床用于治療骨折、關(guān)節(jié)脫臼、扭挫傷腫脹引起的疼痛，療效確切。為更好地開(kāi)發(fā)應(yīng)用傳統(tǒng)名優(yōu)驗(yàn)方，本研究中通過(guò)抗炎和抗菌試驗(yàn)探討該制劑的消腫、止痛等作用機(jī)制。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

動(dòng)物：SPF 級(jí) KM 小鼠 100 只，雄性，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu)于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK＜粵＞2014-1002，飼養(yǎng)于廣東藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室屏障環(huán)境飼養(yǎng)間，動(dòng)物使用許可證號(hào)為SCXK＜粵＞2012-0125，飼養(yǎng)期間自由飲水?dāng)z食，室溫控制在20℃左右。

菌株：金黃色葡萄球菌（ATCC25923）、銅綠假單胞菌（ATCC27845）、大腸桿菌（ATCC25922）、痢疾桿菌 （ATCC27853）、變 形 桿菌 （ATCC27854）、傷 寒 桿菌（ATCC25963），由廣東藥科大學(xué)中山校區(qū)實(shí)驗(yàn)中心提供。

試藥：英花傷寧口服液（中山市黃圃人民醫(yī)院，批號(hào)為20170801，規(guī)格為每支 90 mL）；阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號(hào)為J20170078，規(guī)格為每片100 mg）；普魯卡因青霉素注射液（山東吉星動(dòng)物藥業(yè)有限公司，批號(hào)為 20170801，規(guī)格為每支 80萬(wàn)U）；注射用硫酸鏈霉素（山東聚德藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20170801）；營(yíng)養(yǎng)瓊脂、肉湯培養(yǎng)液均購(gòu)自天津市福星化學(xué)試劑廠。

1.2 方法

1.2.1 抗炎試驗(yàn)

小鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)：將50只小鼠分為模型組（A組，等體積0.9%氯化鈉溶液）、黃連提取物組（B組）和英花傷寧口服液高、中、低劑量組（C1組，C2組，C3組，37.6，18.8，9.4 g ／kg），每組 10 只。按成人用量（每60 kg體質(zhì)量 270 mL）根據(jù)體質(zhì)量換算法計(jì)算小鼠給藥量，灌胃體積為 每10 g體質(zhì)量0.2 mL。給予小鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液（每10 g體質(zhì)量0.03 mL），待其進(jìn)入麻醉狀態(tài)后，在每只小鼠左側(cè)腋下涂抹碘酒消毒，再用醫(yī)用酒精脫碘，皮下部位用手術(shù)剪剪開(kāi)1個(gè)小口，用眼科鑷子將1個(gè)精密稱定的滅菌棉球（青霉素和鏈霉素混合液浸泡，烘干）從切口處植入皮下，隨即縫合皮膚，以建立肉芽腫模型。建模成功后各組小鼠灌胃給藥，每天1次，連續(xù)8 d。末次給藥2 h后，脫頸椎處死小鼠，打開(kāi)原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，置烘箱中60℃烘干，稱定質(zhì)量，減去原質(zhì)量，即得肉芽腫的凈質(zhì)量[1-2]。

醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管炎試驗(yàn)：分組與給藥同上。連續(xù)給藥7 d，末次給藥30 min后，給予小鼠尾部靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)0.9%氯化鈉溶液（每10 g體質(zhì)量 0.1 mL），隨即腹腔注射 0.6% 冰醋酸 0.9% 氯化鈉溶液（每 10 g體質(zhì)量 0.1 mL），20 min后脫臼處死，輕揉小鼠腹部，在小鼠下腹部剪開(kāi)1個(gè)小口，用注射器吸取6 mL 0.9%氯化鈉溶液，分?jǐn)?shù)次注射入小鼠腹腔中洗滌，收集洗滌液4 mL，加0.9%氯化鈉溶液稀釋至10 mL，3 000 r／min離心15 min，取上清液，于590 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[1-2]。

1.2.2 抑菌試驗(yàn)

抑菌圈測(cè)定：分為空白對(duì)照組（A組，滅菌水）、黃連提取物（B組）和英花傷寧口服液高、中、低劑量組（C1組，C2組，C3組）。將各菌種置培養(yǎng)基試管中。在培養(yǎng)箱內(nèi)、于 37℃下培養(yǎng) 24 h，含菌量為 5～10 cfu／mL。吸取100 μL菌液均勻涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，取直徑6 mm的無(wú)菌圓形紙片，分別吸取各組藥液（每片20 μL），均勻分布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板表面。于37℃下培養(yǎng)24 h后測(cè)量抑菌圈直徑。

最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）測(cè)定：采用連續(xù)倍比稀釋法[3]。取試管9支，設(shè)置第1～7支藥液質(zhì)量濃度分別為每 1 mL 相當(dāng) 0.235，0.118，0.058，0.029，0.014，0.007，0.004 g 生藥。第 8 支加入 1 mL 苯甲酸滅菌溶液（0.1 g苯甲酸溶于1 000 mL蒸餾水），搖勻，作陽(yáng)性對(duì)照。第9支不加試劑，作空白對(duì)照。將貯藏菌各取少許分別接種于平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h，活化菌種。挑取單菌落接種與液體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24 h，用滅菌0.9%氯化鈉溶液稀釋至濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷峁堋岫认嗤螅♂? 000倍；各取0.1 mL分別加入各稀釋管中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察各稀釋管的變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)量資料以 X±s表示，行 F檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗炎試驗(yàn)

與A組比較，B組和C1，C2組小鼠肉芽質(zhì)量顯著減小，腹腔液體中吸光度顯著減小（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

2.2 抑菌試驗(yàn)

低、中、高質(zhì)量濃度的英花傷寧口服液對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的抑菌作用明顯；尤其是高劑量對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌作用強(qiáng)于80%乙醇黃連提取液。結(jié)果見(jiàn)表2。

英花傷寧口服液對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌作用最強(qiáng)，MIC 為 0.014 g／mL(生藥)；對(duì)傷寒桿菌、銅綠假單胞菌次之，MIC 為 0.058 g／mL(生藥)；對(duì)大腸桿菌作用最差，MIC 為 0.118 g／mL(生藥)。結(jié)果見(jiàn)表 3。

表1 各組小鼠肉芽質(zhì)量與吸光度比較（X±s，n＝10）

表2 各組抑菌結(jié)果比較（抑菌圈直徑，mm）

3 討論

軟組織損傷屬中醫(yī)學(xué)“傷筋”范疇，究其病機(jī)，均屬各種原因所致局部氣滯血瘀、脈絡(luò)不和。《圣濟(jì)總錄·折傷門》云：“若因傷折內(nèi)動(dòng)經(jīng)絡(luò)，血行之道不得宜通。瘀積不散，為腫為痛。”[4]中醫(yī)治療多以活血化瘀為主，效果理想，且避免了長(zhǎng)期服用傳統(tǒng)非甾體類抗炎藥導(dǎo)致多種不良反應(yīng)的產(chǎn)生[5-6]。

英花傷寧口服液方中，山銀花具有抗炎、抗菌、調(diào)節(jié)血糖等多種藥理作用[7]；丹參作為臨床最常用活血化瘀類中藥，主要功能為改善微循環(huán)、抗炎，其抗炎機(jī)制眾多，既與直接抗菌作用有關(guān)，又與其調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，從而提高機(jī)體抗菌能力有關(guān)[8]；黃連的抗菌譜較廣，主要成分小檗堿、黃連堿和巴馬汀的抗炎活性較好[9]；徐長(zhǎng)卿具有鎮(zhèn)痛、抗炎的作用[10]，臨床用于治療各種痛癥，對(duì)多種炎性模型均有抑制作用，其所含丹皮酚能對(duì)抗炎性介質(zhì)[11]。方中的其他成分也有一定抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛作用，故全方有消腫止痛、活血化瘀功效。

表3 英花傷寧口服液 MIC和 MBC測(cè)定結(jié)果

本研究結(jié)果顯示，37.6 g／kg 和 18.8 g／kg 劑量的英花傷寧口服液能明顯抑制棉球肉芽炎性腫脹及冰醋酸所致炎性過(guò)程中毛細(xì)血管通透性，表明對(duì)慢、急性炎性動(dòng)物模型有抑制作用。對(duì)于一些常見(jiàn)細(xì)菌，該口服液均有不同程度的抑制作用，其中以金黃色葡萄球菌作用較強(qiáng)，這可能與組方中的山銀花、黃柏和蒲公英等的抗菌譜有關(guān)[12-14]。

綜上所述，英花傷寧口服液具有一定的抗炎、抗菌作用，但對(duì)于其起效濃度、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：

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