ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌中的表達及臨床病理意義分析

王娟 黃炳臣 吳雪銘 蘇群英 林潔 黃小英 龍喜帶

【摘要】?目的?探討雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、原癌基因人類表皮生長因子受體-2（Her-2）、血管內皮生長因子（VEGF）、p53基因（p53）和增殖細胞核抗原（Ki67）在乳腺癌中的表達及臨床病理意義分析。方法?收集乳腺癌根治術標本213例，通過免疫組織化學法檢測ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌組織中的表達，探討這些免疫組化指標與臨床病理特征之間的關系。結果?（1）ER、PR和Ki67與組織學分級及臨床分期有關（P<0.05）。（2）Her-2與組織學分級及組織學分類有關（P<0.05）。（3）p53與組織學分級及是否存在淋巴結轉移有關（P<0.05）。（4）VEGF與腫瘤組織學分級、臨床分期及是否存在淋巴結轉移有關（P<0.05）。進一步Pearson相關分析顯示，ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負相關（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2、p53、Ki67和VEGF與乳腺癌組織分化程度呈正相關（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）。

結論?通過檢測ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67多項免疫組化指標的表達情況，可為臨床有效判斷乳腺癌患者的惡性程度及轉移情況提供參考依據。

【關鍵詞】?乳腺癌;免疫組化;病理分析

中圖分類號：R737.9?文獻標志碼：A?DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2019.03.002

【Abstract】?Objective?To investigate the analysis on expressions and clinicopathological significance of estrogen receptor（ER），progesterone receptor（PR），human epidermal growth factor receptor-2（Her-2），vascular endothelial growth factor（VEGF），p53 gene（p53） and Ki67 antigen（Ki67）.Methods?A total of 213 specimens of radical mastectomy were collected.And then，immunohistochemistry was used to detect the expressions of ER，PR，Her-2，VEGF，p53 and Ki67 in breast cancer，and relationship between these immunohistochemical parameters and clinicopathological features was explored.Results?（1）ER，PR and Ki67 were associated with histological grade and clinical stage（P<0.05）.（2） Her-2 were related to histological grade and histological classification（P<0.05）.（3） p53 was significantly associated with histological grade and lymph node metastasis（P<0.05）.（4） VEGF was associated with tumor histological grade，clinical stage and lymph node metastasis（P<0.05）.Further Pearson correlation analysis showed that ER and PR were negatively correlated with the differentiation degree of breast cancer（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2，p53，Ki67 and VEGF were positively correlated with the differentiation of breast cancer（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）.

Conclusion?By detecting the expressions of multiple immunohistochemical indexes including ER，PR，Her-2，VEGF，p53 and Ki67，it can provide a reference basis for effectively judging the malignant degree and metastasis of breast cancer patients.

【Key words】?breast cancer;immunohistochemistry;pathological analysis

乳腺癌作為一種激素依賴性和異質性腫瘤，是女性最常見的癌癥，其發病率逐年上升且呈年輕化的趨勢[1～3]。盡管相關研究取得了大量實質性的研究成果，有望改善乳腺癌的化療、放療以及手術治療的療效，然而乳腺癌細胞仍然會擴散和轉移到機體的其他部位，這對于研究人員而言或許是一大挑戰。相關研究表明乳腺癌的發病機制是多基因、多因素和多階段演變的過程[4]。目前，對于雌激素受體（Estrogen receptor，ER）、孕激素受體（Progesterone receptor，PR）、原癌基因人類表皮生長因子受體-2（Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、p53基因（p53 gene，p53）和增殖細胞核抗原（Ki67 antigen，Ki67）等腫瘤標志物在乳腺癌中的研究受到學者的關注。本研究通過探討ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌中的表達及臨床病理意義，為臨床有效判斷乳腺癌患者的惡性程度及轉移情況提供參考依據。

1?資料與方法

1.1?研究對象

入選標準如下：經病理診斷確診為乳腺癌的患者、術前無放療與化療者、具有完整的臨床病歷資料、具有可供研究的合適組織樣本、患者本人同意參加本次研究。排除標準為：未經病理組織診斷確認者、術前有放化療史者、資料不完整者、無可用于研究分析的合適樣本者、不同意參加者。根據以上標準，共收集符合要求的213例乳腺癌病例，收集所有研究對象的石蠟組織標本用于檢測乳腺癌中ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67的表達，且均具有完整的臨床病歷資料;組織學分級根據改良Bloom-Richardson半定量組織學分級判定。213例乳腺癌患者中，乳腺浸潤性導管癌203例、乳腺浸潤性小葉癌9例、乳腺髓樣癌1例，有淋巴結轉移109例、無淋巴結轉移104例。

1.2?研究方法

采用組織病理切片：用10%中性福爾馬林對標本進行固定、常規脫水、石蠟包埋、切片厚度為4 μm，HE染色，鏡下觀察。IHC法：實驗組所用一抗分別為ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67;對照組使用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對照。抗體和試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司，所有操作步驟均按照說明書進行。

1.3?免疫組織化學結果判斷

免疫組化指標陽性結果判斷標準：ER、PR、p53及Ki67定位為癌細胞核，陽性表達即細胞核有淡黃、棕黃色或者棕褐色顆粒，在隨意5個高倍鏡下觀察陽性細胞的比例[5]：陽性細胞比例不足10%為陰性，超過10%為陽性;Her-2定位于細胞膜，陽性表達時其細胞膜有棕黃色顆粒;VEGF染色的癌細胞胞漿呈棕褐色。

1.4?統計學方法

所有數據均采用統計軟件SPSS 23.0進行統計分析，免疫組化指標表達的差異比較采用卡方檢驗;采用Pearson進行相關性分析，檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2?結果

2.1?乳腺癌組織免疫組化指標陽性率比較

ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌組織免疫組化陽性率分別為61.97%（132/213）、55.87%（119/213）、58.69%（125/213）、53.52%（114/213）、46.01%（98/213）、73.71%（157/213），各免疫組化指標陽性率相比，差異有統計學意義（χ2=37.749，v=5，P<0.001）。見表1;免疫組化陽性表達定位情況見圖1。

2.2?乳腺癌組織中ER、PR及Her-2表達與臨床病理特征關系分析

ER、PR與臨床分期及組織學分級有關（P<0.05），與患者的年齡、腫瘤的大小、組織學類型及是否存在淋巴結轉移均無相關性（P>0.05）;Her-2與組織學分級及組織學類型有關（P<0.05），與患者的年齡、臨床分期、腫瘤的大小及是否存在淋巴結轉移均無相關性（P>0.05）。見表2。

2.3?乳腺癌組織中VEGF、p53和Ki67表達與臨床病理特征關系分析

Ki67與組織學分級和臨床分期有關（P<0.05），與其他無相關性（P>0.05）;p53與組織學分級及是否存在淋巴結轉移有關（P<0.05），與其他無相關性（P>0.05）;VEGF與腫瘤組織學分級、臨床分期及是否存在淋巴結轉移有關（P<0.05），與其他無相關性（P>0.05）。見表3。

2.4?ER、PR、Her-2、p53、Ki67和VEGF表達與組織分化程度相關性分析

通過Pearson分析，免疫組化指標與組織分化程度的相關性分析結果顯示：ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負相關（r=-0.221，r=-0.258，P<0.05）;Her-2、p53、Ki67和VEGF與乳腺癌組織分化程度呈正相關（r=0.231，r=0.288，r=0.063，r=0.217，P<0.05）。見表4。

3?討論

近年來，乳腺癌的發病率逐年上升，有關乳腺癌發生過程中的關鍵節點是什么、哪些分子發揮著重要的作用以及有關乳腺癌的免疫逃逸療法尚未得到闡明。因此，如何早期診斷乳腺癌、有效評價治療效果、準確判斷預后和早期發現復發病例等已成為臨床關注的熱點問題[6]。

3.1?ER、PR與乳腺癌

乳腺癌是依賴激素生長的腫瘤，其生長與雌、孕激素的異常有著密切關系。據報道，70%的乳腺癌患者ER呈陽性。Xue等[7]認為降低患者自身雌激素水平或阻斷ER介導的細胞信號被認為是乳腺癌治療的有效方法。本研究發現，ER、PR在乳腺癌組織中的陽性表達率分別為61.97%（132/213）、55.87%（119/213），與腫瘤大小無顯著關系，此結果與余輝等人[8]的研究結果基本一致。此外，本研究發現ER、PR與組織學分級及臨床分期有關，表明乳腺癌患者的惡性程度與ER、PR在癌組織中的陽性表達率呈負相關，臨床病理分期Ⅰ～Ⅱ期ER、PR的陽性表達率較高，與腫瘤大小和淋巴結轉移無相關，與于喜法等[9]的研究結果相一致。目前，有文獻表明ER表達陽性者5年生存率較陰性者高，且ER陰性患者腫瘤復發率和遠端轉移率均較陽性患者高。此外有文獻報道ER和PR均為陰性者，腫瘤侵襲性較強、惡性程度高，遠端轉移概率大且預后較差，故ER和PR表達是判斷乳腺癌患者長期預后的重要指標[10]。

3.2?VEGF與乳腺癌

在腫瘤生長過程中，新生毛細血管具有為腫瘤提供營養和協助癌細胞轉移等功能。VEGF是腫瘤毛細血管形成的關鍵因子之一，參與新血管生成。因此，如何抑制腫瘤的新生毛細血管形成是目前腫瘤新的研究方向[11]。王偉等人[12]通過免疫組化法檢測50例乳腺癌患者根治手術切除的癌組織標本和癌旁標本中的VEGF表達情況，結果表明VEGF在乳腺癌中陽性表達顯著高于癌旁組織，其表達強度與組織學分級、淋巴結轉移相關，本研究結果與其基本一致。另外研究發現，VEGF與乳腺癌組織的發生、浸潤、轉移密切相關[13]，表明VEGF亦是臨床判斷乳腺癌轉移的重要指標之一[14]。綜上文獻所述，VEGF在乳腺癌發展過程中起著重要作用，與腫瘤的惡性程度、浸潤和轉移有著密切關系。

3.3?Her-2、p53與乳腺癌

隨著學者對Her-2研究的深入，發現其與機體多種惡性腫瘤有著密切的關系，尤其是與乳腺癌的發生、發展有關[15]。研究發現Her-2被認為是判斷乳腺癌患者預后和分子靶向治療的關鍵標志物[16]，Her-2過表達時乳腺癌預后較差[17]。有文獻發現Her-2陽性表達的腫瘤多同步伴隨p53基因突變，在腫瘤耐藥性方面具有協同效應，共同影響患者的病情、預后及化療效果[18]。由于當前對p53和Her-2相互協同作用的認識依然有限，尚需進一步深入探討。本研究結果顯示Her-2與組織學分級及組織學類型有關（P<0.05），p53與組織學分級及是否存在淋巴結轉移有相關性（P<0.05），組織學分級越高，兩者在乳腺癌患者癌變組織中的陽性表達率越高，猜測Her-2、p53是重要的乳腺癌生物學行為及預后評估指標。

3.4?Ki67與乳腺癌

學者將Ki67的表達強度分為低度、中度和高度，以此指導臨床治療[19]。Tobin等人[20]發現Ki67與乳腺癌的發生、發展有關。Denkert等[21]發現組織學分級越高、有淋巴結轉移的乳腺癌患者，Ki67陽性表達率越高，其癌細胞增殖活性越高、預后越差，推測Ki67參與了乳腺癌的發生與發展。本研究發現Ki67陽性表達與組織學分級和臨床分期有關（P<0.05），組織學分級越高、臨床分期越高的乳腺癌患者，其Ki67陽性表達率越高。

綜上所述，通過Pearson分析，ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負相關，Her-2、p53、Ki67和VEGF與乳腺癌組織分化程度呈正相關。因此，通過檢測ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67多項免疫組化指標的表達情況，可為臨床有效判斷乳腺癌患者的惡性程度及轉移情況提供參考依據。

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（收稿日期：2018-12-26?修回日期：2019-02-26）

（編輯：潘明志）