蜜型和漿型意大利蜜蜂蜂王漿10-HDA含量對比分析

但紅莉 鄧先麗 王林玲

摘要：實驗目的：對比普通蜂型所產(chǎn)蜂王漿和產(chǎn)漿蜂型所產(chǎn)蜂王漿中10-HDA的含量;實驗方法：用HPLC外標法，以乙醇為溶劑，選用甲醇和0.1%甲酸（55：45）作為流動相對10-HDA進行測定;實驗結果：蜜型意大利蜜蜂蜂王漿中10-HDA含量為5.0%，漿型意大利蜜蜂蜂王漿中10-HDA含量為1.2%。結果表明漿型意大利蜜蜂蜂王漿的產(chǎn)量高，但是其10-HDA的含量卻低于蜜型意大利蜜蜂所產(chǎn)蜂王漿。

關鍵詞：蜂王漿;10-HAD;HPLC

蜂王漿是青年工蜂食用花粉后咽下腺分泌的一種乳白色或淡黃色的漿狀物質，是在蜂巢中飼養(yǎng)幼蟲的工蜂分泌的用來飼喂蜂王和幼蟲的一種高級營養(yǎng)食物，是蜂王的終生食物，對蜂王的生長發(fā)育以及生育功能都有極其重要的作用。蜂王漿又稱為蜂皇漿或蜂乳，[1]其顏色大多呈乳白色或淺黃色。其極具營養(yǎng)價值和免疫功能，蜂王漿是一類組分相當復雜的蜂產(chǎn)品，隨著對蜂王漿組分的大量研究[2，3]，我們知道隨著蜜蜂品種、年齡、季節(jié)、花粉植物的不同，其化學成分也有所不同。同時蜂王漿對人體亦能體現(xiàn)非常強大的營養(yǎng)保健功和醫(yī)療作用能。大量研究學者提出了蜂王漿對機體有作用。[4，5]使人們對蜂王漿的生物學作用、醫(yī)療價值有了初步的了解。在蜂王漿所含的20多種游離脂肪酸中，已鑒定出來的有琥珀酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、亞油酸和花生酸等，其中以反式10-羥基-2-癸烯酸（E）10-hydroxy-2-decelenicacid（簡稱10-HDA）最為重要。德國科學家D.J.朗格于1921年首次在工蜂上顎腺中發(fā)現(xiàn)10-HAD。[7]A.Butenandt和H.Rembold于1957年利用紅外光譜的方法確定了王漿酸的結構為10-HDA，[8]這是人類第一次知道10-HDA的具體結構。mgmL由于目前只在蜂王漿中發(fā)現(xiàn)其存在，是蜂王漿中獨有的化學物質故又稱之為王漿酸。因此王漿酸一般作為蜂王漿的標志物。[9]10-羥基-2-癸烯酸是蜂王漿中特有的不飽和脂肪酸，它是蜂王漿的標志性物質。王文風[10]等實驗表明10-HDA對常見細菌如大腸桿菌，金黃色葡萄球菌都有較好的抑制作用。具有抗疲勞、抗輻射、治療心腦血管疾病、調(diào)節(jié)免疫、改善記憶、抑制和殺傷癌細胞、消炎抗菌殺病毒等功效。戴靜芝等[6]通過實驗研究表明10-HDA對抑制癌細胞的生長有明顯作用，還能增強吞噬細胞的吞噬功能。意大利蜂是西方蜜蜂的一個品種，簡稱意蜂。漿蜂是我國從意蜂中分化培育的產(chǎn)漿量比原品種高2到3倍的新品種。產(chǎn)蜜型意蜂的單框產(chǎn)量是50～70g，產(chǎn)漿型意蜂的單框產(chǎn)漿量在90～120g。

1材料與方法

1.1樣品處理

蜂王漿解凍至室溫，并用玻璃棒攪拌均勻，在精密天平上準確稱取0.5g，加10mL95%乙醇溶解，在超聲波清洗器中常溫超聲20min，定容至50mL，在3000rmin離心5min，取上清液經(jīng)0.22μm濾膜過濾后進樣分析。

1.2HPLC色譜分析

樣品經(jīng)濾膜過濾，取1mL裝入樣品瓶中，放入HPLC儀中進行測定。以出峰時間定性，以峰面積定量（外標法）。

色譜柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm，江蘇漢邦科技有限公司）;流動相為v（甲醇）：v（0.1%甲酸）=55：45;檢測波長210nm;柱溫為室溫;流速0.5mLmin;進樣量10μL。

2結果與討論

2.1外標法標準曲線

在上述色譜條件下，將配制好的標準工作液進樣分析。以色譜峰面積為縱坐標10-HDA質量濃度為橫坐標繪制標準曲線如圖2，得到線性回歸方程為：y=5E-06x-0.0165，R2=0.9993，由此可知，10-HDA在質量濃度為50～400mgL范圍內(nèi)呈良好線性關系。

2.2蜜型和漿型蜂王漿10-HADHPLC圖譜的比較分析

蜜型和漿型蜂王漿經(jīng)處理后，上樣，以甲醇為流水相進行HPLC分析，10-HAD出峰時間在7min左右。蜜型意蜂所產(chǎn)蜂王漿HPLC圖譜峰面積為1.02*104mAU*s換算為濃度即是0.12mgmL;漿型意蜂所產(chǎn)蜂王漿HPLC圖譜峰面積為2.70*104mAU*s換算為濃度即為0.50mgmL。通過計算我們得到了兩種蜂王漿中10-HDA的含量如下：普通型的為5.0%，漿型的為1.2%。

3結論

蜂王漿是一種組成成分非常復雜的營養(yǎng)物質，其成分也因蜂蜜品種，年齡，花粉植物，季節(jié)的不同有差異。本次實驗采用高效液相色譜法對兩種不同的蜂王漿進行了10-HDA含量進行了對比。從實驗結果我們可以看出蜜型意大利蜜蜂所產(chǎn)蜂王漿中的10-HDA的含量比較高，達到了5.0%。相比起來，漿型意大利蜜蜂所產(chǎn)蜂王漿中的10-HDA的含量較低，只有1.2%。產(chǎn)漿型蜂種產(chǎn)漿量大于普通蜂種，但其10-HDA的含量卻不如普通蜂種產(chǎn)的蜂王漿高。

參考文獻：

[1]劉忡文，主編.蜂王漿[M].北京：農(nóng)業(yè)出版杜，1983.

[2]Rembold，H.Biologicallyactivesubstancesinroyaljelly[J]VitamHorm，1965，23：359-82.

[3]TakahashiK，KKiuchi，MEndo，eta1.Activefractionsofroyaljelly[J].CRSeancesSocBiolFil，1963，157：428-30.

[4]莊炎.蜂王漿有何主要生理功能[J].中國養(yǎng)蜂，1998（4）：30.

[5]彭展芬，潘建國.試論蜂王漿中的功能因子[J].養(yǎng)蜂科技，1998（4）：7-8.

[6]劉放，黃衛(wèi)平，戴慧芳.蜂王漿及制劑中10-羥基-2-癸烯酸測定方法的進展[J].中國養(yǎng)蜂，1999（5）：19-21.

[7]蔡柳，林親錄.蜂王漿中10-HDA的研究現(xiàn)狀及前景展望[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2007（5）：23-25.

[8]劉曉華，孫文基.王漿酸的研究進展概況[J].中同藥品標準，2004，5（1）：9-10.

[9]王文風，梅英杰，徐玲，王騰飛，王瑞明.10-HDA抗菌實驗的初步研究[J].食品研究與開發(fā)，2007（10）：36-38.

[10]戴靜芝，嚴慧芳，陳幼鴻.蜂皇酸及10-羥基-2-癸烯酸藥理活性試驗[J].醫(yī)藥工業(yè)，1985，16（5）：27-29.