沙棘多糖清除自由基及抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用研究

任 薇,包曉瑋,張志芳,韓 蕾,曾蘭君,張亞濤

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830052)

沙棘(HippophaerhamnoidesL)又名醋柳、酸刺子[1]。成熟果實(shí)呈橙黃色或棕紅色,皺縮,果肉油潤(rùn),質(zhì)柔軟[2]。沙棘化學(xué)成分主要有多糖[3]、蛋白質(zhì)和氨基酸[4-5]及微量元素等[6],在醫(yī)藥方面,沙棘具有延緩衰老、止咳、活血散瘀、緩解心絞痛,防治冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的作用[7-8],具有廣闊的開(kāi)發(fā)利用前景。

機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化,會(huì)引起諸多疾病(如腫瘤、血管硬化及延緩衰老等)嚴(yán)重危害了身體健康,因而被人們所重視。日常生活中,抗脂質(zhì)過(guò)氧化最簡(jiǎn)便易行的是食用抗氧化劑,食用抗氧化劑應(yīng)具備安全無(wú)毒、低濃度、高效、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)[9]。廖國(guó)會(huì)[10]利用體外抗氧化活性法證明松乳菇多糖對(duì)DPPH自由基、OH自由基和超氧陰離子自由基都具有一定的清除能力,其IC50值分別為1.55、1.23、8.31 mg/mL,還原能力弱于VC;趙杰[11]試驗(yàn)表明火棘多糖具有體外清除自由基能力和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用;段小群[12]試驗(yàn)表明青錢(qián)柳多糖具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用;羅敏[13]通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)外試驗(yàn)證明米胚多糖具有一定的抗氧化性。現(xiàn)階段對(duì)沙棘多糖的研究多集中在提取純化,抗氧化活性方面研究較少。因我國(guó)是沙棘屬植物種植面積最大,種屬最多的國(guó)家[14],所以對(duì)沙棘多糖抗氧化活性研究對(duì)沙棘以后的開(kāi)發(fā)利用存在一定的意義。

本試驗(yàn)采用體外抗氧化活性法測(cè)定沙棘多糖對(duì)DPPH自由基、羥自由基、超氧陰離子自由基的清除能力及總還原能力。通過(guò)建立4種肝勻漿體外模型來(lái)模擬人體內(nèi)環(huán)境,以VC為陽(yáng)性對(duì)照與沙棘多糖組進(jìn)行對(duì)比。觀察過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)主要降解產(chǎn)物MDA含量的變化,反映出脂質(zhì)過(guò)氧化的程度,來(lái)評(píng)價(jià)沙棘多糖對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用。以體外模型來(lái)模擬體內(nèi)環(huán)境,既能觀察到被測(cè)物質(zhì)在生物體內(nèi)的反映情況,又可以了解該物質(zhì)在體內(nèi)詳細(xì)的反應(yīng)機(jī)理[15],為沙棘資源的綜合開(kāi)發(fā)及利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

沙棘 產(chǎn)地新疆阿勒泰;1.1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 美國(guó)sigma公司;三羥甲基氨基甲烷(Tris) 美國(guó)Amresco公司;抗壞血酸(VC)、硫代巴比妥酸(TBA) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;昆明種小鼠 20只,雌雄對(duì)半,體重(20±2) g,購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(新)20160003;其他化學(xué)試劑 均為分析純。

TG16B高速離心機(jī) 凱特試驗(yàn)儀器有限公司;XH-B渦旋混合器 無(wú)錫沃信儀器制造有限公司;超聲波藥品處理器 濟(jì)寧金百特電子有限責(zé)任公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 沙棘多糖的提取 沙棘預(yù)處理:將沙棘干果置于40 ℃烘箱12 h,每1 h取出稱重一次,待重量恒重時(shí)粉粹,過(guò)40目篩。按照1∶8 (w/v)料液比加入石油醚浸泡1 h后,70 ℃水浴回流1.5 h,抽濾,留濾渣,濾渣以1∶6 (w/v)料液比加入石油醚繼續(xù)70 ℃加熱回流1 h,抽濾,留濾渣,加入80%乙醇至將沙棘完全浸沒(méi),70 ℃水浴回流2 h從而脫去單糖,抽濾,濾渣烘干待用[16]。

準(zhǔn)確稱取預(yù)處理后的沙棘5 g,放入錐形瓶,按料液比1∶20 (w/v)加入蒸餾水,超聲波藥品處理器70 ℃,中頻(30 kHz)超聲輔助提取22 min,抽濾后加入25%體積的Sevage試劑(V氯仿∶V正丁醇=4∶1)。在渦旋混合器以2000 r/min混合20 min。混合后,室溫下離心20 min,轉(zhuǎn)速為4000 r/min,取上層液重復(fù)脫蛋白5次[17],直至離心后無(wú)白色膠狀層出現(xiàn)。上層液利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀70 ℃下濃縮至15 mL,加入3倍上清液體積的無(wú)水乙醇,在4 ℃下靜置12 h。抽濾,取沉淀經(jīng)無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚依次順序洗滌[18],洗滌后,抽濾,留沉淀40 ℃烘箱干燥至晶體狀,即得沙棘粗多糖。

1.2.2 肝勻漿的制備 小鼠禁食12 h后處死,取肝臟,置4 ℃生理鹽水中反復(fù)漂洗,去除血液,剔除脂肪,用濾紙吸干表面水分。稱重后剪碎,冰浴條件下用勻漿器充分研磨,加入生理鹽水配成5%的肝勻漿,冷凍離心機(jī)4 ℃、3000 r/min離心10 min,取上清液,4 ℃冷藏備用[12]。

1.2.3 沙棘多糖體外抗氧化活性測(cè)定

1.2.3.1 沙棘多糖對(duì)羥自由基清除率的測(cè)定 參考廖國(guó)會(huì)[10]方法稍做修改。分別取1 mL濃度為0.1、0.5、1、1.5、2.0 mg/mL的沙棘多糖溶液于試管中,各管分別加入800 μL的硫酸亞鐵(6 mmol/L)和800 μL水楊酸(6 mmol/L),搖勻后各管加入0.1% H2O250 μL混勻,37 ℃水浴30 min,以蒸餾水為空白對(duì)照,以VC為陽(yáng)性對(duì)照,510 nm下測(cè)定各反應(yīng)溶液的吸光度值并按公式(1)計(jì)算清除率。試驗(yàn)重復(fù)三次。

清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100

式(1)

式中,A0:1 mL H2O+800 μL FeSO4+50 μL H2O2;A1:1 mL沙棘多糖溶液+800 μL FeSO4+50 μL H2O2;A2:1 mL沙棘多糖溶液+800 μL FeSO4+50 μL H2O。

1.2.3.2 沙棘多糖對(duì)超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定 參照Wup[19]的方法。吸取4.0 mL 0.05 mol/L Tris-HCl緩沖(pH=8.2)放入試管中,25 ℃水浴20 min,分別加入1 mL 1、2、4、6、8 mg/mL的沙棘多糖溶液和80 mmol/L鄰苯三酚20 μL充分混勻。混勻后25 ℃水浴反應(yīng)5 min,反應(yīng)后加入200 μL 10 mol/L鹽酸溶液來(lái)終止反應(yīng),VC為陽(yáng)性對(duì)照。325 nm處測(cè)定吸光度,按公式(2)計(jì)算其清除率。試驗(yàn)重復(fù)三次。

清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3]×100

式(2)

式中,A1:4 mL Tris-HCl+20 μL鄰苯三酚+1 mL沙棘多糖溶液;A2:4 mLTris-HCl+20 μL蒸餾水+1 mL沙棘多糖溶液;A3:4 mL Tris-HCl+20 μL鄰苯三酚+1 mL蒸餾水。

1.2.3.3 沙棘多糖對(duì)DPPH自由基清除率的測(cè)定 參照李珊珊[20]方法稍作改進(jìn)。在10 mL比色管中分別加入1 mL 1、2、3、4、5 mg/mL的沙棘多糖溶液,再分別加入 0.2 mmol/L DPPH乙醇溶液2 mL,無(wú)水乙醇定容至刻度。搖勻,室溫避光反應(yīng)30 min,以無(wú)水乙醇為空白對(duì)照,VC為陽(yáng)性對(duì)照,517 nm處測(cè)定吸光度,按公式(3)計(jì)算其清除率。試驗(yàn)重復(fù)三次。

清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A×100

式(3)

式中,A1:待測(cè)樣+DPPH乙醇溶液;A2:待測(cè)樣+無(wú)水乙醇;A0:無(wú)水乙醇+DPPH乙醇溶液。

1.2.3.4 沙棘多糖還原能力的測(cè)定 參照Lee[21]方法,分別向試管中加入1 mL 0.1、0.5、1、1.5、2.0 mg/mL的沙棘多糖溶液,2.0 mL的PBS(0.2 mol/L,pH6.6)和2.0 mL 1%鐵氰化鉀,混勻后,50 ℃水浴反應(yīng)20 min,反應(yīng)后加入10%三氟乙酸2 mL,3000 r/min,離心10 min。取離心后上層液100 μL,加4400 μL蒸餾水與1%六水氯化鐵400 μL,搖勻,反應(yīng)10 min。700 nm處測(cè)定吸光度值。以蒸餾水為空白對(duì)照,VC為陽(yáng)性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.4 沙棘多糖對(duì)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用

1.2.4.1 沙棘多糖對(duì)小鼠肝勻漿自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化的影響 試驗(yàn)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性組、沙棘多糖組。各試管先加1.5 mL 5%的肝勻漿,空白對(duì)照組加蒸餾水0.1 mL,陽(yáng)性組加0.1 mL 2 mg/mL的VC,沙棘多糖組分別加入0.1 mL濃度為0.1、0.5、1、2、4、8 mg/mL的多糖溶液,37 ℃水浴振蕩90 min,冷卻,再向各管中分別加入1 mL 20% 三氯醋酸。混勻,沸水浴振蕩15 min,冷卻混合液體后離心10 min,轉(zhuǎn)速3000 r/min。取上清加0.67%三氯醋酸1 mL,混勻后沸水浴振蕩10 min,冷卻后于532 nm處測(cè)吸光度值。并計(jì)算其抑制率。試驗(yàn)重復(fù)5次,抑制率按公式(4)計(jì)算[22]。

抑制率(%)=(A對(duì)照-A試驗(yàn))/A對(duì)照×100

式(4)

1.2.4.2 沙棘多糖對(duì)CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的影響 參照郭英[23]方法,試驗(yàn)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性組、沙棘多糖組。首先于各試管中加入5%的肝勻漿1.5 mL,其中空白組加入蒸餾水0.1 mL,陽(yáng)性組中加2 mg/mL的VC0.1 mL,沙棘多糖組分別加入0.1 mL 0.1、0.5、1、2、4、8 mg/mL的多糖溶液,37 ℃水浴振蕩反應(yīng)15 min,再向各管中加入CCl420 μL,37 ℃水浴30 min后,分別在各管加入1 mL 20% 三氯醋酸,混勻后沸水浴振蕩15 min,冷卻混合液體3000 r/min離心10 min,取上清加0.67%三氯醋酸1 mL,混勻后沸水浴振蕩10 min,冷卻后于532 nm處測(cè)吸光度值。并計(jì)算其抑制率。試驗(yàn)重復(fù)5次,抑制率按公式(4)計(jì)算。

1.2.4.3 沙棘多糖對(duì)H2O2體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的影響 參照武文潔[24]方法,試驗(yàn)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性組、沙棘多糖組。首先于各試管中加入5%的肝勻漿1.5 mL,其中空白組加入蒸餾水0.1 mL,陽(yáng)性組中加2 mg/mL的VC0.1 mL,沙棘多糖組分別加入0.1 mL 0.1、0.5、1、2、4、8 mg/mL的多糖溶液,37 ℃水浴振蕩反應(yīng)30 min,再向各管中加入0.1 mL 30% H2O2,繼續(xù)37 ℃振蕩溫育30 min后,分別在各管加入1 mL 20% 三氯醋酸,混勻后沸水浴振蕩15 min,冷卻混合液體3000 r/min離心10 min,取上清加0.67%三氯醋酸1 mL,混勻后沸水浴振蕩10 min,冷卻后于532 nm處測(cè)吸光度值。并計(jì)算其抑制率。試驗(yàn)重復(fù)5次,抑制率按公式(4)計(jì)算。

1.2.4.4 沙棘多糖對(duì)Fe2+-VC體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的影響 參照劉剛[25],試驗(yàn)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性組、沙棘多糖組。首先于各試管中加入5%的肝勻漿1.5 mL,其中空白組加入蒸餾水0.1 mL,陽(yáng)性組中加2 mg/mL的VC0.1 mL,沙棘多糖組分別加入0.1 mL 0.1、0.5、1、2、4、8 mg/mL的多糖溶液,向各管同時(shí)加入2 mg/mL VC和FeSO4·7H2O 各0.14 mL,37 ℃水浴振蕩反應(yīng)60 min后,分別在各管加入1 mL 20% 三氯醋酸,混勻后沸水浴振蕩15 min,冷卻混合液體3000 r/min離心10 min,取上清加0.67%三氯醋酸1 mL,混勻后沸水浴振蕩10 min,冷卻后于532 nm處測(cè)吸光度值。并計(jì)算其抑制率。試驗(yàn)重復(fù)5次,抑制率按公式(4)計(jì)算。

1.3 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析,按照統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用t檢驗(yàn)法剖析各組之間的差異,p<0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn),采用SigmaPlot 12.5和Excel進(jìn)行作圖分析,從而得出結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙棘多糖體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

2.1.1 沙棘多糖對(duì)羥自由基的清除作用 由圖1可得,沙棘多糖濃度逐漸增大時(shí),對(duì)羥自由基清除率隨之增強(qiáng),其在濃度0.1～2 mg/mL內(nèi)對(duì)羥自由基的清除能力均低于VC,經(jīng)計(jì)算沙棘多糖IC50值為0.97 mg/mL。有研究表明松乳菇多糖[10]與西番蓮果皮多糖[26]對(duì)羥自由基清除率IC50值分別為1.147和61.06 mg/mL,而沙棘多糖對(duì)羥自由基清除能力相比松乳菇多糖較弱,強(qiáng)于西番蓮果皮多糖;桑葉茯磚茶多糖濃度在1.75 mg/mL時(shí),對(duì)羥自由基的清除率為74.08%[27];菊苣多糖濃度在2.4 mg/mL時(shí),對(duì)羥自由基的清除率為40.93%[28],本試驗(yàn)沙棘多糖在濃度2 mg/mL時(shí)，沙棘多糖對(duì)羥自由基清除率為67.34%,沙棘多糖對(duì)羥自由基清除能力相比桑葉茯磚茶多糖較弱,強(qiáng)于菊苣多糖。

圖1 沙棘多糖對(duì)羥自由基的清除率

圖2 沙棘多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除率

2.1.3 沙棘多糖對(duì)DPPH自由基清除率的測(cè)定 由圖3可知,沙棘多糖濃度逐漸增大時(shí),對(duì)DPPH自由基清除率隨之增強(qiáng),其濃度在1～3與4～5 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除能力增長(zhǎng)較快,在3～4 mg/mL對(duì)DPPH自由基的清除能力增長(zhǎng)緩慢。沙棘多糖濃度在1～5 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除效果較低于VC,而濃度在5 mg/mL時(shí),沙棘多糖與VC對(duì)DPPH自由基清除率分別為93.69%和95.28%,清除率相近,廖國(guó)會(huì)[10]研究得出松乳菇多糖對(duì)DPPH自由基的清除IC50值為0.855 mg/mL;李霞[26]研究得出西番蓮果皮多糖對(duì)DPPH自由基的清除IC50值為0.374 mg/mL。付愛(ài)葉[28]研究得出菊苣多糖濃度在2.4 mg/mL時(shí),對(duì)DPPH自由基的清除率為58.17%;敢小雙[30]研究得出竹蓀多糖濃度在25 mg/mL時(shí)對(duì) DPPH自由基的清除率為70.55%。本試驗(yàn)中沙棘多糖的IC50值為1.55 mg/mL,其濃度在2 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率為63.84%,當(dāng)濃度在3 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率為82.94%,對(duì)DPPH自由基的清除能力強(qiáng)于濃度為25 mg/mL的竹蓀多糖。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)反映出沙棘多糖對(duì)DPPH自由基的清除效果相比于松乳菇多糖、西番蓮果皮多糖稍弱,強(qiáng)于菊苣多糖和竹蓀多糖。

圖3 沙棘多糖對(duì)DPPH自由基清除率

2.1.4 沙棘多糖還原能力的測(cè)定 由圖4可知,隨著沙棘多糖濃度的增大,還原能力逐漸增強(qiáng),其濃度在0～0.5 mg/mL時(shí)還原能力與同濃度VC無(wú)明顯差異。沙棘多糖與VC的濃度在1～1.5 mg/mL時(shí),沙棘多糖還原能力增長(zhǎng)速率大于VC還原能力增長(zhǎng)速率。沙棘多糖濃度在1.3～2 mg/mL時(shí)還原能力大于同等濃度的VC。付愛(ài)葉[28]研究得出菊苣多糖濃度在2.4 mg/mL時(shí),在700 nm處測(cè)吸光度值為0.453,何念武[31]研究得出黃瓜多糖濃度在4 mg/mL時(shí),在700 nm處測(cè)吸光度值為0.35,本試驗(yàn)沙棘多糖濃度在2 mg/mL時(shí),吸光度值為0.805。通過(guò)以上數(shù)據(jù)可分析出沙棘多糖還原能力高于黃瓜多糖與菊苣多糖。多糖還原力機(jī)理主要為樣品中的還原酮通過(guò)電子給予能力,阻止自由基鏈形成,從而發(fā)揮抗氧化活性作用[23]。

圖4 沙棘多糖還原能力

2.2 沙棘多糖對(duì)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用

2.2.1 沙棘多糖對(duì)小鼠肝勻漿自發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化的影響 由表1可知,沙棘各多糖組與VC組在532 nm處吸光度值均低于對(duì)照組,表明自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化模型建立成功。脂質(zhì)過(guò)氧化主要終產(chǎn)物為丙二醛(MDA),MDA在532 nm處有最大吸收波長(zhǎng)。吸光度值的大小能夠直接反映出肝細(xì)胞架構(gòu)受到自由基攻擊的程度。抗氧化劑進(jìn)入機(jī)體內(nèi)后可對(duì)抗自由基,抑制MDA的產(chǎn)生,從而達(dá)到抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。沙棘多糖濃度在0.1～8 mg/mL時(shí),抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用逐漸增強(qiáng),存在一定的量效關(guān)系(Y=0.06x+0.3582,R2=0.9015,x為沙棘多糖濃度,Y為抑制率)。沙棘多糖濃度在2 mg/mL時(shí)抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用稍弱于同濃度VC;其濃度在4 mg/mL時(shí)與2 mg/mL VC抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用相近;在4～8 mg/mL抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用高于2 mg/mL VC。經(jīng)計(jì)算沙棘多糖抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化的IC50為1.10 mg/mL。李永飛[32]研究得出云南松松針多糖濃度在0.1 mg/mL和0.6 mg/mL時(shí)抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用抑制率分別為14.7%和31.01%。段小群[12]研究得出青錢(qián)柳多糖濃度在0.1和0.6 mg/mL時(shí)抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用抑制率分別為13.27%和25.55%。本試驗(yàn)沙棘多糖濃度在0.1 mg/mL和0.5 mg/mL時(shí)抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用抑制率分別為29.51%和35.10%。結(jié)果表明沙棘多糖抑制率高于云南松松針多糖和青錢(qián)柳多糖,抗自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用強(qiáng)于云南松松針多糖和青錢(qián)柳多糖。

表1 沙棘多糖對(duì)小鼠肝勻漿 自發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用Table 1 Suppression of spontaneous lipid peroxidation of liver homogenate in mice

2.2.2 沙棘多糖對(duì)CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的影響 由表2可知,在小鼠肝勻漿中加入CCl4誘導(dǎo)劑后,通過(guò)保溫誘導(dǎo)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化,沙棘各多糖組與VC組在532 nm處吸光度值均低于對(duì)照組,表明CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化模型建立成功。沙棘多糖隨著濃度的增大,抑制能力增強(qiáng),在532 nm處的吸光值呈降低趨勢(shì),表明MDA含量降低,脂質(zhì)過(guò)氧化程度降低,且存在一定的量效關(guān)系(Y=0.0698x+0.3888,R2=0.9744,x為沙棘多糖濃度,Y為抑制率),經(jīng)計(jì)算沙棘多糖抑制CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化IC50值為1.59 mg/mL。沙棘多糖在2 mg/mL時(shí)與同濃度的VC抑制CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化作用相比無(wú)明顯差異,其濃度在4～8 mg/mL抑制CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化作用高于2 mg/mL VC。

表2 沙棘多糖對(duì)CCl4體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿 脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用Table 2 Effect of seabuckthorn polysaccharides on the lipid peroxidation of liver homogenate in mice induced by CCl4in

2.2.3 沙棘多糖對(duì)H2O2體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的作用 由表3可知,在小鼠肝勻漿中加入H2O2,通過(guò)保溫誘導(dǎo)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化,沙棘各多糖組與VC組在532 nm處吸光度值均低于對(duì)照組,表明H2O2體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化模型建立成功。沙棘多糖濃度在2 mg/mL時(shí)抑制H2O2體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化的能力高于同濃度VC。隨著沙棘多糖濃度的增大,抑制能力增強(qiáng),且存在一定的量效關(guān)系(Y=0.0438x+0.0999,R2=0.9808,x為沙棘多糖濃度,Y為抑制率),經(jīng)計(jì)算其IC50值為9.13 mg/mL。

表3 沙棘多糖對(duì)H2O2體外誘導(dǎo)小鼠肝勻漿 脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用Table 3 Inhibitory effect of hippophae rhamnoides polysaccharides on lipid peroxidation of liver homogenate in mice induced by H2O2in

2.2.4 沙棘多糖對(duì)Fe2+-VC體外誘導(dǎo)小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化的作用 由表4可知,在小鼠肝勻漿中加入Fe2+-VC,通過(guò)保溫誘導(dǎo)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化,沙棘各多糖組與VC組在532 nm處吸光度值均低于對(duì)照組,表明Fe2+-VC體外誘導(dǎo)小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化模型建立成功。沙棘多糖濃度在0.1～8 mg/mL時(shí),對(duì)Fe2+-VC體外誘導(dǎo)小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用均低于2 mg/mL的VC。隨著沙棘多糖濃度的增大,抑制能力逐漸增強(qiáng),且存在一定的量效關(guān)系(Y=0.0503x+0.3479,R2=0.9294,x為沙棘多糖濃度,Y為抑制率),經(jīng)計(jì)算其IC50值為1.39 mg/mL。段小群[12]研究得出青錢(qián)柳多糖濃度在0.1和4 mg/mL時(shí)抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用抑制率分別為23.63%和34.84%,本試驗(yàn)沙棘多糖濃度在0.1和4 mg/mL時(shí)抑制自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化作用抑制率分別為30.29%和57.60%。說(shuō)明沙棘多糖抑制Fe2+-VC體外誘導(dǎo)小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化作用強(qiáng)于青錢(qián)柳多糖。

表4 沙棘多糖對(duì)Fe2+-VC 體外誘導(dǎo)小鼠肝臟 脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用Table 4 Inhibitory effect of seabuckthorn polysaccharide on hepatic lipid peroxidation induced

3 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明在一定濃度范圍內(nèi),沙棘多糖對(duì)DPPH自由基、OH自由基和超氧陰離子自由基都具有一定的清除能力,其IC50值分別為1.55、1.23、8.31 mg/mL,沙棘多糖對(duì)DPPH自由基、OH自由基清除能力比較強(qiáng),對(duì)超氧陰離子自由基清除能力較弱。當(dāng)沙棘多糖在濃度為2 mg/mL時(shí),還原能力稍高于同濃度VC。表明沙棘多糖具有良好的抗氧化活性。通過(guò)建立4種肝勻漿體外模型來(lái)模擬人體內(nèi)環(huán)境,以VC為陽(yáng)性對(duì)照與沙棘多糖組進(jìn)行對(duì)比,沙棘多糖與VC均能抑制小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化物的生成,沙棘多糖對(duì)小鼠肝勻漿自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化及 CCl4、H2O2、Fe2+-VC所誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化均具有抑制作用,其IC50值分別為1.10、1.59、9.13、1.39 mg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明沙棘多糖擁有抗脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。本試驗(yàn)結(jié)果為沙棘多糖生物活性成分在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為抗氧化劑提供理論依據(jù)。