當歸補血湯對D-半乳糖誘導衰老大鼠空間記憶能力的影響

唐璐 王榮 宗成

【摘 要】? 目的：根據精-血-髓相關理論，觀察當歸補血湯對衰老大鼠空間記憶能力的影響。方法：清潔級SD大鼠，雄性，50只，隨機分為正常組、模型組、當歸補血湯低劑量組（2g/kg）、當歸補血湯中劑量組（4g/kg）、當歸補血湯高劑量組（8g/kg）。除正常組外，其余各組連續9周腹腔注射D-半乳糖120mg/kg/d（正常組給予等量生理鹽水）; 造模前用Morris水迷宮法檢測各組大鼠空間學習與記憶能力，造模后第3周、6周、9周檢測其空間記憶能力。于第9周測試后，稱體重，處死，取大鼠腦組織，稱腦濕重，計算腦指數。結果：定位航行結果顯示，造模前，訓練第1天至第5天各組大鼠逃避潛伏期無統計學差異（P>0.05）;造模后，與正常組比較，模型組大鼠在第6周與第9周逃避潛伏期顯著延長（P<0.05），當歸補血湯低、中、高劑量組均可在一定程度上降低衰老大鼠逃避潛伏期，與正常組比較無統計學差異（P>0.05）;第9周當歸補血湯高劑量組逃避潛伏期顯著低于模型組（P<0.05）。腦指數結果顯示，模型組大鼠體重與腦指數顯著低于正常組（P<0.05），當歸補血湯高劑量組可顯著提高衰老大鼠體重與腦指數（P<0.05）。結論：當歸補血湯可改善衰老大鼠模型空間記憶能力，提高大鼠腦指數。

【關鍵詞】 歸補血湯;衰老;空間記憶力

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）4-0015-03

目前我國已逐步邁進老齡化社會時期。據中國國家統計局數據，中國60歲及以上人口將由2016年的2.3億余逐步增加至2050年的4.8億余，屆時，約占40%的亞洲老年人口，25%的全球老年人口。衰老的一個主要特征就是學習記憶功能下降，分為器質性健忘和功能性健忘兩類。生理性健忘多與年齡相關，臨床上尤以40～60歲的人最為多見，且近年來隨著社會壓力的增加呈年輕化趨勢;器質性健忘多由腦神經血管性疾病造成，以老年癡呆為代表，在整個人群中發病率達4%～5%[1]。

中醫認為，機體記憶力和腦髓功能關系密切，“小兒善忘，腦未滿也;老人健忘，腦漸空也”，“著腦為元神之府，靈機記性在腦”（《醫林改錯》）。而腦髓的生成與其功能的正常運行需要“精與血”的濡養。《靈樞經脈》云：“人始生，先成精，精成而腦髓生。” 《景岳全書·血證》云：“血即精之屬也，但精藏于腎，所蘊不多，而血富于沖，所至皆是”。血液在腎中與腎精相合，為腎所藏之（陰）精，機體血盛則精旺，血虛則精枯。“腎，主骨，生髓”出自《素問·陰陽應象大論》。腎所藏之精可以生髓，而腦為髓之海，若腎（陰）精虧損不能生髓，則髓海漸失所養，進而引發記憶衰退、思維遲鈍等。因此，基于精、血、髓之間的聯系，一是血能直接充養腦髓，二是血能生精，精能化髓，血具有補養腦與髓的雙重作用。中醫認為氣血是腦部執行各種生理機能的物質基礎，腦部疾病主要病機之一便是“氣血虧虛”，因此，“補氣生血”是治療腦部疾患的基本方法。Morris 水迷宮（Morris water maze， MWM）廣泛用于大鼠空間學習和記憶能力的評價等實驗研究[2-3]。本研究擬采用Morris水迷宮法觀察補氣生血法代表方劑——當歸補血湯對衰老大鼠模型的記憶能力的影響。

1 材料和方法

1.1 動物及分組 清潔級雄性SD大鼠，（200±20）g，購自長沙市天勤生物技術有限公司（許可證號：SCXK（湘）2014-0011，合格證編號：43006700013547）。篩選出50只達到學習標準的大鼠，隨機分為5組，分別為：正常組、模型組、當歸補血湯低劑量組（2g/kg）、當歸補血湯中劑量組（4g/kg）、當歸補血湯高劑量組（8g/kg）。

1.2 藥品 D-半乳糖（批號：210E052，北京索萊寶科技有限公司）。當歸補血湯藥材出自《內外傷辨惑論》，由黃芪、當歸按5∶[KG-*3/5]1比例組成。組方藥材購自貴陽中醫學院一附院，黃芪500g：當歸100g，加純水浸泡30min，煎煮30min，過濾，濾渣加純水適量，繼續煎煮30min，合并濾液，將其濃縮為300mL母液（濃度為2g/mL），備用。

1.3 儀器 DNS-2型動物神經精神行為測定：Morris水迷宮由不銹鋼水池（圓柱狀）、可移動平臺和圖像自動采集、處理系統等組成。MH30002C精密電子天平（上海茂宏電子科技有限公司）。

1.4 定位航行試驗 Morris水迷宮主要用于實驗動物對空間位置感和方向感的學習記憶能力測試[4]。定位航行實驗中“逃避潛伏期”是評價動物的學習與記憶能力評價的主要指標 [5]。本實驗在實驗前期，采用每天第1次訓練的成績作為評價指標以反應大鼠對前一天訓練結果的記憶[6]，連續訓練5d，篩選出50只“逃避潛伏期”無顯著性差異的大鼠進行分組。除正常組外的其他各組大鼠，分別給予D-半乳糖120mg/kg/d，腹腔注射9周，正常組給予等量生理鹽水，同時每天分別灌胃給予當歸補血湯低、中、高劑量組大鼠當歸補血湯2g/kg、4g/kg、8g/kg，模型組與正常組給予等量生理鹽水。分別于第3周、第6周、第9周注射D-半乳糖24h后再次進行逃避潛伏期測試并記錄。

1.5 腦指數的測定 大鼠稱重后，斷頭，解剖頭部，取腦，稱取新鮮完整的大鼠腦組織濕重，計算腦指數。腦指數=腦濕重/體重（mg/g）。

1.6 統計學分析 實驗數據以（x±s）表示，應用SPSS19.0統計軟件中單因素方差分析進行統計分析，P<0.05表示具有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠造模前逃避潛伏期情況 造模前，大鼠“逃避潛伏期”在第1～3天無明顯變化（P>0.05）;訓練第4天，各組大鼠基本可在90s內尋找到平臺，組間差異無統計學意義（P>0.05）;訓練第5天各組逃避潛伏期顯著縮短，組間差異無統計學意義（P>0.05）。以上表明各組大鼠空間學習及記憶能力無明顯差異，符合本次實驗入選標準及隨機分組原則。見表1。

2.2 對D-半乳糖誘導的衰老大鼠逃避潛伏期的影響 應用D半乳糖造成衰老大鼠模型第3、6、9周結果顯示，第3周模型組大鼠逃避潛伏期呈上升趨勢，與正常組比較，差異無統計學意義（P>0.05）;與正常組比較，第6周、第9周模型組大鼠逃避潛伏期顯著增高 （P<0.05），當歸補血湯低、中、高劑量組均可在一定程度上降低衰老大鼠逃避潛伏期，與正常組比較差異無統計學意義（P>0.05）;第9周當歸補血湯高劑量組逃避潛伏期顯著低于模型組（P<0.05）。這表明腹腔注射D半乳糖6周時大鼠空間記憶能力顯著下降，已形成衰老大鼠模型，灌胃給予當歸補血湯可在不同程度上改善衰老大鼠空間記憶能力，且呈劑量依賴性，以第9周當歸補血湯高劑量組效果最為顯著。見表2。

2.3 對D-半乳糖誘導衰老大鼠腦指數的影響 應用D半乳糖造成衰老大鼠模型第9周結果顯示，模型組大鼠體重與腦指數顯著低于正常組（P<0.05），當歸補血湯高劑量組可顯著提高衰老大鼠體重與腦指數（P<0.05）。表明大鼠應用D半乳糖9周可明顯損傷大鼠腦組織，形成衰老大鼠模型，當歸補血湯可在一定程度上對抗此進程，尤以高劑量組較為顯著。見表3。

3 討論

氣能生血，氣盛則血旺，氣虛則血少。血液是精神意識活動的重要物質基礎。《靈樞·營衛生會》指出：“血者，神氣也。”血氣充盈，則精力旺，記憶力強。當歸補血湯出自李皋《內外傷辨惑論》，為補氣生血法代表方劑，主治“血虛發熱證”，但同時也廣泛用于各類疾病氣虛、血虛或氣血兩虛證的治療。《醫方考》稱其“曰補血湯者”，是“有形之血生于無形之氣故也”。現代研究表明，該方可有效改善患者血液微環境，提高機體造血細胞的造血功能，促進骨髓基質細胞以及巨核細胞的生長，防止巨核細胞凋亡[7]。當歸補血湯含藥血清實驗研究發現，其具有促骨髓有核細胞DNA合成、促骨髓粒系及紅系造血祖細胞增殖、分化的能力[8]、增強免疫功能亦是其功效之一[9]。當歸補血湯亦可通過抑制自由基生成及細胞凋亡，以保護大腦皮質神經元[10-11]。同時，補氣中藥具改善癡呆小鼠學習記憶功能的作用[12]。

近年來，D-半乳糖所致雄性SD大鼠衰老模型因其敏感性較高而被廣為應用，且SD 大鼠神經系統與人類相似，因此一般首選雄性SD大鼠作為動物來源[13]。此外，D-半乳糖可以造成類似自然衰老實驗鼠齒狀回區的神經元細胞損傷[14]，且D-半乳糖通過腹腔注射，吸收力較強，操作較為方便，安全性較佳，大鼠存活率高[15]。因此，本實驗給予SD雄性大鼠連續9周腹腔注射D-半乳糖120mg/kg/d，形成衰老模型，觀察當歸補血湯對衰老大鼠空間記憶力的影響。結果表明，造模前各組大鼠每天定位航行實驗訓練的逃避潛伏期無顯著差異，表明各組大鼠空間學習及記憶能力相當。造模第3周，模型組大鼠逃避潛伏期呈上升趨勢，但與正常組比較差異無統計學意義（P>0.05）;第6周與第9周模型組大鼠逃避潛伏期顯著高于正常組 （P<0.05），當歸補血湯低、中、高劑量組均可在一定程度上降低衰老大鼠逃避潛伏期，與正常組比較差異無統計學意義（P>0.05）;第9周當歸補血湯高劑量組逃避潛伏期顯著低于模型組（P<0.05），且當歸補血湯高劑量組衰老大鼠體重與腦指數顯著提高 （P<0.05）。

綜上所述，給藥雄性大鼠腹腔注射D-半乳糖6～9周可形成較為顯著的空間記憶力減退的衰老大鼠模型，當歸補血湯可改善模型大鼠空間記憶能力，以高劑量較為顯著。總之，當歸補血湯可作為益氣補血、生髓養腦之品，改善因衰老而造成的記憶力減退。

參考文獻

[1]呂傳真，周良輔.實用神經病學[M].4版.上海：上海科學技術出版社，2014：339-347.

[2]Vasconcellos AP， Zugno AI， Dos Santos AH. Na+，K+-ATP ase activity is reduced in hippocampus of rats submitted to an experimental model of depression： effect of chronic lithium treatment and possible involvement in learning deficits[J].Neurobiol Learn Mem，2005，84（2）：102-110.

[3]Choeiri C， Hewitt K， Durkin J. Longitudinal evaluation of memory performance and peripheral neuropathy in the Ins2C96YA kitamice[J].Behav Brain Res，2005，157（1）：31-38.

[4]Ting W， Guo J， Yang L， et al. Saponins from Panax japonicus， attenuate D-Galactose-induced cognitive impairment through its anti-oxidative and anti-apoptotic effects in rats[J].J Pharm Pharmacol， 2015， 67： 1284-1296.

[5]陳羅西，郭玲玲，李亮.Morris 圓形水迷宮的應用及其相關檢測指標分析[J].遼寧中醫藥大學學報，2008，10（8）：55.

[6]羅小泉，駱利平，陳海芳，等.Morris 水迷宮檢測大鼠記憶力方法的探討[J].時珍國醫國藥，2010，21（10）：2667-2669.

[7]汪群紅，胡敏，項雪燕，等.當歸補血湯抑瘤作用的實驗研究[J].中華中醫藥學刊，2014，21（4）：41-43.

[8]黃麗萍，陳耀輝，吳素芬，等.當歸補血湯含藥血清對血虛小鼠骨髓造血功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：18-20.

[9]Liu Y， Zhang H G， Li X H. A Chinese herbal decoction， Danggui Buxue Tang， improves chronic fatigue syndrome induced by food restriction and forced swimming in rat[J].Phytother Res，2011，25（12）：1825-1832.

[10]高曉蘭，王強，陳彥文，等.當歸補血湯及其加味方對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用研究[J].時珍國醫國藥，2013，24（12）：2885-2887.

[11]陸瑩，羅亞非，范瑞娟.當歸補血湯對大鼠局灶性腦缺血再灌注血-腦屏障和大腦皮質神經元的影響[J].神經解剖學雜志，2013，29（ 3） ：301-305.

[12]Lee KY， Sung SH， Kim SH， et al. Cognitive-enhancing activety of loganin isolated from Cornus officinalis in scopolamine-induced amnesic mice [J]. Arch Pharm Res，2009，32（5）：677-683.

[13]Wu KF， Hu Y. Establishment and evaluation of D-Galactose induced aging animal model[J].Chin J Mult Organ Dis Elderly，2012（11）：74-78.

[14]Lu J， Wu D M， Hu B， et al. NGF-Dependent activation of TrkA pathway： a mechanism for the neuroprotective effect of troxerutin in D-Galactose-treated mice[J].Brain Pathol，2010（20）：952-965.

[15]Huang S. Study of D-Galactose Induced Aging Model in Mice： Effects of Doses and Routes of Administration[D].Nanning： Guangxi Medical University，2014.

（收稿日期：2018-12-14 編輯：程鵬飛）