超高效液相色譜檢測白酒中紐甜含量的方法確認和應用

白麗真，劉 偉，劉洪銀

（北京順鑫農業(yè)股份有限公司牛欄山酒廠，北京101301）

紐甜，是一種新型的功能性非營養(yǎng)型甜味劑，甜度極高，易溶于水，是阿斯巴甜的衍生物。因其在安全性、穩(wěn)定性、經(jīng)濟性等各方面突出的表現(xiàn)，被廣泛使用[1-4]。2002年美國FDA審核通過允許紐甜作為食品添加物應用在所有食品及飲料。歐盟于2010年正式批準其應用，其指定代碼為E961。中華人民共和國衛(wèi)生部2003年第4號公告也正式批準紐甜為新的食品添加劑品種，適用各類食品生產[5]。但是國標強制性標準GB 2760—2014《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中規(guī)定，白酒中不得添加甜味劑[6]。

GB 5009.247—2016《食品安全國家標準食品中紐甜的測定》[7]中規(guī)定食品中紐甜的測定方法為高效液相色譜法，樣品需經(jīng)混合提取液提取，固相萃取柱凈化后，方可進樣，過程較復雜，影響因素很多。本實驗在國標方法的基礎上，簡化前處理過程，無需過萃取柱，去酒精后定容直接進樣，操作簡單，進樣時間短，經(jīng)超高效液相色譜檢測，結果準確，靈敏度高，檢出限低，經(jīng)濟有效，該方法可用于對白酒中紐甜含量的測定。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：均為市售的不同香型白酒樣品，共4個。

試劑及耗材：乙腈（LC/MS級，F(xiàn)isher）；實驗用水為Milli-Q超純水；紐甜（含量98%，北京百靈威科技有限公司）；磷酸（分析純，北京化工廠）；1-辛烷磺酸鈉鹽（HPLC級，Alfa aeser）。

儀器設備：超高效液相色譜儀(ACQUITY UPLC?，美國Waters公司)，配二極管陣列檢測器；Milli-Q Reference超純水發(fā)生器(美國Millipore公司)；電熱板（廣州格丹納儀器有限公司）；0.22 μm有機濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司）；萬分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

1.2 實驗方法

離子對試劑緩沖液：稱取2.00 g辛烷磺酸鈉用水溶解，加入1.0 mL磷酸，用超純水定容至1000 mL，過膜。

1000 mg/L紐甜儲備液：準確稱取0.1 g紐甜至100 mL容量瓶，用超純水溶解并定容到100 mL，置于4℃冰箱中保存待用。根據(jù)使用需要用超純水逐級稀釋成適當濃度的標準工作液。

樣品前處理：準確量取10 mL酒樣于50 mL玻璃燒杯，置于電熱板上，120℃蒸發(fā)去酒精處理90 min，將剩余的樣品用超純水定容至10 mL，過0.22 μm有機濾膜，待上機分析。

1.3 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)；柱溫：30 ℃；樣品室溫度：20 ℃；進樣體積：2 μL；流動相：A相為乙腈，B相為離子對試劑緩沖液；流速：0.4 mL/min；檢測波長：218 nm；梯度洗脫程序見表1。

表1 紐甜的梯度洗脫程序

2 結果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

國標中前處理的方法比較繁瑣，耗用的試劑材料比較多，且耗時較長，因此本研究中尋求一種簡單快捷的前處理方法。由于白酒樣品中含有乙醇，直接進樣容易造成溶劑效應，因此本實驗先揮發(fā)掉乙醇，再用超純水定容至原體積。圖1是直接進樣和揮發(fā)酒精后進樣兩種方法的比較。

圖1 兩種前處理方式比較示意圖

從圖1可以看出，酒樣加入2 mg/L的標準品后直接進樣后得到的色譜圖，非目標峰比較多，且峰面積較大，尤其是在靠近目標峰時有一個較大的峰，保留時間稍有偏移，就會造成目標峰識別錯誤，從而引起假陽性的錯誤。或者造成目標物含量變化，定量結果不準確，一般情況下是含量增加。圖1中揮發(fā)進樣譜圖是將10 mL樣品加標對應濃度后再在120℃電熱板上將樣品蒸發(fā)至剩余約1 mL，然后定容至10 mL后在相同條件下進樣分析得到的色譜圖。相對于直接進樣來說，揮發(fā)酒精后色譜圖比較干凈，目標峰前后的干擾峰較少，從而提高了目標峰識別的正確率，保證了定量的穩(wěn)定性。

通過兩種前處理方式得到的色譜圖的比較，最后選擇揮發(fā)酒精后再進樣的前處理方式。去酒精處理后進樣色譜圖見圖2。

2.2 液相條件的優(yōu)化

本實驗用國標方法中的流動相，將流動相梯度洗脫程序進行轉換和調整，找到了適合超高效液相色譜儀的梯度洗脫程序，見表1，進樣時間為4 min。

2.3 線性范圍和檢出限

用1000mg/L的紐甜儲備液分別稀釋至0.1mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L和5 mg/L，進樣，做標準曲線，如圖3，標線曲線R2為0.9999。以信噪比（S/N）為3確定檢出限（LOD），紐甜的檢出限為0.03 mg/L。

2.4 精密度和回收率

本實驗對4個市售的不同香型白酒樣品進行前處理進樣檢測，結果均為未檢出。選取某市售酒樣（編號Y1）作為加標回收的樣品。選取標準曲線濃度范圍內高濃度2 mg/L和低濃度0.5 mg/L做加標回收（標準曲線濃度范圍0.1～5 mg/L）。結果見表2。由表2可看出，樣品高濃度和低濃度的回收率均在95%～105%之間，符合回收率的測定要求，RSD值小于2%。

2.5 與國標方法比較（表3）

如表3所示，本文的方法與GB 5009.247—2016《食品安全國家標準食品中紐甜的測定》標準中規(guī)定食品中紐甜的測定方法相比，本文建立的方法有前處理簡單，進樣時間短，大大減少了有機溶劑的消耗，經(jīng)濟節(jié)約，方法準確，靈敏度高，檢出限低等優(yōu)點。

圖2 紐甜的色譜圖（5 mg/L）

圖3 紐甜標準曲線圖

表2 樣品回收率數(shù)據(jù)

表3 兩種方法比較

3 結論

本試驗在GB 5009.247—2016《食品安全國家標準食品中紐甜的測定》的基礎上，簡化了紐甜檢測的前處理方法，優(yōu)化了液相條件，將其用于對白酒中紐甜含量的檢測。該方法簡單快速，進樣時間為4 min，經(jīng)濟節(jié)約，與國標方法相比，該方法靈敏度高，準確性好，檢出限低，同時，該方法的回收率和精密度均可滿足國標要求，為白酒生產企業(yè)對白酒中紐甜含量的監(jiān)督提供了有力的技術支持。