趨化因子蛋白對肺癌早期診斷及預(yù)后預(yù)測的價值分析

楚文麗 程旭東 蔡 琳

肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，多在40歲以上發(fā)病，在男性中的發(fā)病率多于女性[1]。非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)為肺癌的主要類型，在臨床上主要表現(xiàn)為發(fā)展迅速、起病隱匿，多數(shù)患者確診時已屬晚期，導(dǎo)致預(yù)后生存期短[2-3]。如果NSCLC在發(fā)生早期時就能診斷出，并將病灶完全切除，可顯著提高患者的5年生存率。分子生物學(xué)研究顯示NSCLC的發(fā)生與發(fā)展是一個多基因、多步驟參與的遺傳性疾病[4-5]。趨化因子是由白細(xì)胞分泌的可溶性小分子蛋白，其與機(jī)體的炎性反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。趨化因子26(CCL26)又稱巨噬細(xì)胞炎性蛋白，屬于CCL趨化因子家族中的一員，能夠介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖等[6-8]。本文具體探討了CCL26蛋白對肺癌早期診斷及預(yù)后預(yù)測的價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究時間為2012年1月到2013年6月，采用回顧性總結(jié)研究方法，選擇在我院經(jīng)病理學(xué)診斷為NSCLC的患者78例，納入標(biāo)準(zhǔn)：患者知情同意本研究；NSCLC患者術(shù)前未經(jīng)放療、化療治療；臨床與檢測資料完整；醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床與檢測資料不完整者；妊娠與哺乳期婦女；嚴(yán)重心、腎功能不全患者，伴有出血性疾病、出血傾向患者。78例中男性50例，女性28例；平均年齡(55.25±11.11)歲；平均體重指數(shù)(22.19±2.93)kg/m2；平均病程(5.22±1.48)年；腫塊大?。骸? cm 40例，<3 cm 38例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移20例；組織學(xué)類型：腺癌38例，鱗癌40例；臨床分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期30例，Ⅲ期18例；分化類型：高分化40例，中分化20例，低分化18例。

1.2 免疫組化分析

取所有患者的癌組織及相應(yīng)的癌旁正常黏膜組織(距離癌組織5 cm以上)。采用卵白素-生物素-辣根過氧化氫酶復(fù)合物(ABC)法進(jìn)行免疫組化分析，小牛凍干血清蛋白(BSA)購自美國Sigma公司，DAB底物試劑盒購自上海生工公司，兔抗人趨化因子CCL26多克隆抗體(ab115653)購自美國Sigma公司。所有組織標(biāo)本嚴(yán)格按照試劑盒的說明書步驟操作。

1.3 觀察指標(biāo)

CCL26陽性細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃棕色染色顆粒，在顯微鏡 (×400)下計數(shù)5個隨機(jī)視野，著色強(qiáng)度為無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞比例≤5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。最后兩部分相乘得總分，總分0～1分為陰性，≥2分為陽性。所有患者隨訪5年，觀察并記錄預(yù)后5年的生存情況。

1.4 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 CCL26表達(dá)對比

CCL26在癌組織與癌旁組織的陽性表達(dá)率分別為51.3%(40/78)和12.8%(10/78)，對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=26.4491，P<0.05)。

2.2 CCL26與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在癌組織中，CCL26的陽性表達(dá)率與臨床分期、分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都有顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表1。

表1 CCL26與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3 CCL26與NSCLC預(yù)后5年生存率的關(guān)系

Kaplan-Meier生存率分析顯示CCL26陽性表達(dá)患者5年生存率為30.0%(12/40)，顯著低于CCL26陰性表達(dá)患者55.3%(21/38)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.090，P=0.024)。

2.4 影響因素分析

以NSCLC患者預(yù)后作為因變量，把調(diào)查的內(nèi)容與各項檢測數(shù)據(jù)作為自變量，多元線性逐步回歸分析顯示CCL26陽性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移為影響NSCLC患者預(yù)后的主要影響因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響NSCLC患者預(yù)后的主要影響因素分析(n=78)

3 討論

NSCLC是臨床上常見的惡性腫瘤之一，其死亡人數(shù)超過了乳腺癌、前列腺癌的總和，當(dāng)前在我國發(fā)病率和死亡率均呈明顯上升趨勢[9]。該病的發(fā)病年齡高峰在60～79歲之間，男女之比為2.13∶1。早期用于NSCLC診斷的方法多為胸部X線等影像學(xué)方法，雖然檢出的敏感性高，但是特異性差，很難降低NSCLC的死亡率。病理學(xué)檢查對于患者的創(chuàng)傷比較大，早期篩查效果不太適應(yīng)[10]。

趨化因子是一種能夠結(jié)合到靶細(xì)胞上的特異性G-蛋白-耦聯(lián)受體的化學(xué)誘導(dǎo)因子[11]，其中CCL26基因位于染色體7q11.2，其受體為CCR3。本研究顯示，癌組織中CCL26的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織(P<0.05)。有研究顯示CCL26能夠介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖、炎性細(xì)胞的趨化等，可能在腫瘤發(fā)病中發(fā)揮重要作用[12]。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，特異性的分子標(biāo)志物為NSCLC早期診斷提供了新的可能，特別是NSCLC從沒有侵襲性到具有侵襲性的這段時間比較長，而這段時間正好為NSCLC進(jìn)行早期分子診斷提供了窗口期[13]。多種趨化因子都具有促進(jìn)腫瘤增殖的作用，趨化因子可通過幫助逃避機(jī)體的免疫監(jiān)測，誘導(dǎo)血管的發(fā)生，在腫瘤進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用[14]。阻斷CCR5能夠促進(jìn)表達(dá)野生型p53基因的乳腺癌細(xì)胞的增殖[15]。本研究顯示在癌組織中，CCL26的陽性表達(dá)率與臨床分期、分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都有顯著相關(guān)性(P<0.05)，也說明趨化因子CCL26在NSCLC的轉(zhuǎn)移與病情進(jìn)展中發(fā)揮著重要的作用。

由于診斷手段的限制，NSCLC患者在確診時病情大都已發(fā)展到中晚期，術(shù)后 5 年生存率一直徘徊在15%左右[16]。相關(guān)研究表明腫瘤生長排放大量趨化因子進(jìn)入血液，阻斷人體內(nèi)正常的免疫反應(yīng)，可能使白細(xì)胞發(fā)生“脫敏”反應(yīng)，減弱機(jī)體對腫瘤侵襲的免疫保護(hù)作用，從而影響患者的預(yù)后[17-20]。本研究Kaplan-Meier生存率分析顯示CCL26陽性表達(dá)的NSCLC患者5年生存率為30.0%，低于CCL26陰性表達(dá)患者的55.3%，對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；多元線性逐步回歸分析顯示CCL26陽性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移為影響NSCLC患者預(yù)后的主要影響因素(P<0.05)。提示CCL26陽性表達(dá)的NSCLC更加容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致患者死亡。不過本研究也存在一定的缺陷，比如樣本數(shù)目不夠，將在下一步研究中擴(kuò)大樣本量，以提高結(jié)果的科學(xué)性，同時通過高通量的手段篩選出更有價值的分子標(biāo)志物。

總之，NSCLC組織中CCL26陽性表達(dá)率高，其陽性表達(dá)率和癌組織的臨床分期、分化程度、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，且能影響患者的5年生存率，可作為NSCLC患者臨床預(yù)后預(yù)測指標(biāo)之一。