切片預染在蘇木素質量監測的應用體會

涂艷娟 曾冬鈺

蘇木素一伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）染色技術、冰凍的切片是臨床上常用的診斷方法，能實現腫瘤的診斷、鑒別，有助于指導臨床診療[1-2]。因此，切片質量的好壞，能直接的關系到可否及時、準確對其腫瘤能夠做出鑒別及其診斷，能夠指導對其手術治療的方法[3-4]。按目前狀態，對冰凍的染色切片所存在的結構組織被破壞、裂隙冰晶比較多、其核分裂現像、染色差對比等的缺點，HE的染色屬于最根本組織學病理的染色，其染細胞核的蘇木素屬于HE的過程染色中的主要，蘇木素的染色成功與否，對細胞核著色深淺有及其重要的作用[5-6]。其染液方法的配制有不同種類，最普遍的屬于Harris的蘇木素和Gill的蘇木素，其染色原理相同。因此，現采用隨機對照研究，探討切片預染在蘇木素質量監測效果，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

2015年4月—2017年12月相對正常的宮頸管組織及腸粘膜組織、德國LeicaST5020+CV5030全自動染色封片一體機、切片機、烤片機。

1.2 試劑

改良的Gill蘇木素、0.25%醇溶性伊紅、二甲苯、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇及無水酒精、1%鹽酸酒精、中性樹膠、Harris蘇木素液。

1.3 方法

1.3.1 將染色機常用染色程序及所需試劑輸入染色機，并加入相應的試劑，待用。

1.3.2 上述兩種組織，切片后撈在同一張載玻片上，在60℃～65℃的烤片機上烤20～30 min，這樣的組織切片準備20張，每天染色機開機后放一張進行試染。

1.3.3 具體染色步驟如下。（1）二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、每次5 min。（2）水化：無水酒精Ⅰ、Ⅱ，每次1 min、95%乙醇1 min、80%乙醇1 min、70%乙醇1 min、流水沖洗1 min。（3）染色：改良的Gill蘇木素、Harris的蘇木素液分別10 min、水洗2 min、1%鹽酸酒精分化1 s、自來水返藍10 min、伊紅2 s。（4）脫水透明：70%乙醇1 min、85乙醇1 min、95乙醇1 min、無水酒精Ⅰ、Ⅱ，每次1 min、二甲苯Ⅰ、Ⅱ、每次1 min。（5）中性樹膠封固[7]。

2 結果

經過長期觀察發現隨著染色天數的增加，在不改變染色時間的前提下，染色機內的蘇木素從更換后到連續使用15天左右，期間大概染色5 000張切片，蘇木素染色力下降，鏡下觀察預染的組織切片其細胞漿內出現蘇木素色素沉著，且隨著蘇木素的繼續使用、胞漿內的色素越來越多，甚至難以分辨細胞之間的界限，看不清核的輪廓，染色結果如圖1和圖2。

圖1 新蘇木素染色結果

圖2 使用15天后的蘇木素

3 討論

蘇木素染色的好壞決定著細胞核的著色深淺，也決定了一張切片的質量。染色前我們可以通過以下幾個方面對蘇木素的質量進行初步的判斷[8]。（1）擴散程度：取一滴蘇木素液滴入一杯自來水中：沉在水底不散開呈紅色為未成熟；在水中慢慢散開呈絮狀，顏色由紫紅色漸變為藍色為成熟；很快散開呈深藍色為過熟。（2）氧化膜：蘇木素在使用過程中隨時間的推移會在液體表面出現一層氧化膜，可以用紙張刮除繼續使用，但是氧化膜出現的時間間隔會越來越短，意味著蘇木素越來越成熟[9]。（3）pH：顏色隨pH值變化：酸性—紅色，中性—紫色。堿性—藍色。細胞核的等電點pH為3.3～3.6，當染液的pH＞細胞核的等電點，細胞核帶負電，易與帶正電的堿性染料蘇木素結合。

對于高血壓較長癥狀的老年的患者，其全身動脈的系統病變，尤其小動脈的改變，及其顯著，其舒張壓極難進行降低，降壓藥劑量太大，其血壓的下降太多，對組織的血液灌注及其不利，胰激的酶肽釋放屬于水解酶蛋白，廣泛在哺乳類的組織動物中出現，其中含量最高屬于胰腺[10]。在其體內，對其激肽原中所釋放出的激肽的作用，可以擴張平滑肌血管、毛細血管，改善血液循環，它還能將纖溶酶原轉變為纖溶酶，能進一步的把不溶性纖維的水解蛋白轉成可溶性的小肽，對血栓進行溶解。

Harris蘇木素液屬于全氧化的蘇木素，其蘇木素的用量太大，被經過氧化后，轉成有染色能力的蘇木紅比較多，在進行染色后，應對其進行乙醇鹽酸的分化，從而退掉不應著色和過染的部分，是退行性的染色。GiU蘇木素屬于半氧化的蘇木素，對其蘇木素的用量比較小，被進行氧化所形成的蘇木紅比較少，由此在比較短的時間里，不會出現過染色情況，也就不會有乙醇鹽酸的分化。Harris蘇木素及其Gill蘇木素進行配制的過程中，運用的媒染劑普遍屬于硫酸鋁和鋁鉀硫酸，在其中有主要作用的都屬于鋁離子。太多的媒染劑對讓其溶液呈現膠狀，并很快失效，不會對染色的能力進行增強，不會延長染色劑使用的時間。Gill蘇木素其配制的過程中所運用的氧化劑屬于碘酸鈉，其蘇木素所運用的氧化劑屬于氧化汞。其蘇木素只有將其轉變成蘇木紅后，才會對其發揮出染料作用，在此過程里氧化屬于關鍵部分，氧化的不充分對其染色的能力極差，過度的氧化會讓染液的表面呈現出氧化膜，會引起切片的污染。Harris蘇木素運用加溫的氧化，雖然能夠加速其形成蘇木紅，但極易有金屬樣氧化膜的出現，會浮在容器壁上及其液面上[11]。碘酸鈉的氧化劑屬于水溶性的氧化劑，在同蘇木索的氧化中所出現均勻的反應，其氧化的還原作用屬于持續性的增強，沒有形成氧化膜，由此對于切片的污染同樣也減少了，其費用相比運用氧化汞的成本低，沒有毒性，還能對環境的污染進行減少。Harris的蘇木素屬于漸退性的染液的一種，在進行配制后的運用，所出現的著色力較強。GiU蘇木素在最佳的染色力中，屬于染色的中期，在對其掌握的染色時間會有所不同[12]。

全自動染色封片機以其操作量大、穩定性好、效率高等優點已被越來越多的病理科接受并使用，逐漸替代手工操作，但是一旦染色液出現問題，經常導致的也是成批的切片需要重新制片，我們在使用染色機前除了按上述方法對染色液的質量進行初步的判斷外，還可以通過織預染的方式來進一步保障染色質量，特制的組織切片選取相對正常的腸粘膜及宮頸管組織，前者含杯狀細胞分泌粘蛋白MUC2，后者含宮頸管腺體分泌粘蛋白MUC5AC，這兩種粘蛋白都屬于凝膠型粘蛋白，容易吸附雜質。后續長時間的染色觀察發現當預染切片胞漿內出現蘇木素色素沉著時，當天機染的其他組織染色質量也較差。因此我們便可以把出現色素沉著作為發現蘇木素質量問題的依據，及時更換蘇木素以確保后續工作的正常進行。預染不僅意味著對試劑是否有效的檢測，同時也對染色機的程序是否正常運行進行了測試。每天將預染出來的切片交由醫生鏡下觀察，確認無染色質量問題后即可進行日常工作的染色，通過組織切片的預染，我科的HE染色質量進一步得以提高。

綜上所述，通過組織切片預染能夠對蘇木素的質量起著有效的監測作用，保障HE染色質量。