不同方法誘導小鼠胚胎成纖維細胞直接轉化為神經干細胞效率的比較

紀瓊瓊， 李明華， 王培軍

(同濟大學附屬同濟醫院醫學影像科，上海 200065)

神經干細胞(neural stem cells, NSCs)因具有自我更新和多向分化潛能而備受關注，以NSCs為基礎的細胞替代治療成為近年來的研究熱點。很多研究證明NSCs移植治療可以改善多種神經退行性疾病、外傷導致的神經細胞受損等疾病的癥狀[1-2]。研究者們通過使胚胎干細胞(embryonic stem cells, ESCs)體外分化獲取NSCs[3]、體細胞經誘導轉化為誘導型多能干細胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)[4]等方法完善細胞替代治療。但上述兩種方法均存在自身難以克服的弊端： 前者的獲取無法通過倫理認證；后者存在明顯的致瘤風險。2012年，Han等[5]成功將體細胞轉化為誘導型NSCs(induced neural stem cells, iNSCs)，iNSCs具有和NSCs相似的自我增殖能力和多向分化潛能，組織來源豐富，無致瘤性，無倫理限制，成為神經系統疾病細胞替代治療的理想細胞。

很多研究表明轉錄因子Sox2是誘導轉化過程中的關鍵誘導因子。RING等[6]通過單誘導因子Sox2成功將小鼠胚胎成纖維細胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)轉化為iNSCs，并證明其他因子的添加并未提高轉化的效率。2016年，Han等[7]采用丙戊酸(VPA)、Bix01294、RG108、PD0325901、CHIP99021、A83-01及維生素C(VC)等7種小分子物質成功將MEFs轉化為iNSCs。目前的轉化方法尚存在轉化效率低的問題，無法滿足iNSCs的基礎研究和臨床應用需求，本實驗采用單獨利用誘導因子Sox2，單獨利用小分子物質，Sox2和小分子物質共同作用3種方法將MEFs轉化誘導為iNSCs，比較3組的轉化效率旨在探索小分子物質的添加是否可以提高單因子Sox2的誘導效率。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

孕14d C57小鼠購于上海南方模式生物有限公司；胎牛血清、DMEM高糖培養基、L-谷氨酰胺、N2添加物、B27添加物、含EDPA的胰酶、牛血清白蛋白(BSA)購于美國Gibco公司；……