紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定恩諾沙星可溶性粉的不確定度評(píng)估

袁曉春

（錦州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，遼寧 錦州 121000）

測(cè)量不確定度是與測(cè)量結(jié)果關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù)，用于表征合理賦予被測(cè)量值的分散性。測(cè)量不確定度越大，表示測(cè)量能力越差，反之，表示測(cè)量能力越強(qiáng)。不過(guò)，不管測(cè)量不確定度多小，測(cè)量不確定度范圍必須包括真值（一般用約定真值代替），否則表示測(cè)量過(guò)程已經(jīng)失效。隨著實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和資質(zhì)認(rèn)定對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力要求的逐漸提高，測(cè)量不確定度已成為一個(gè)完整的定量分析結(jié)果的重要組成部分[1]。本文以紫外分光光度法測(cè)定恩諾沙星可溶性粉為例，按照2017 年版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)卷檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)量，依據(jù)《JJF1059.1-2012 測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，并參考相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)測(cè)量過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度分量進(jìn)行分析和評(píng)估，從而評(píng)定其不確定度[2-8]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1800紫外分光光度計(jì)（日本島津）；AG285電子天平（梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司）；250 mL、100 mL 容量瓶（天玻牌A 級(jí)）；5 mL 移液管（天玻牌A級(jí)）。

1.2 試劑

恩諾沙星對(duì)照品（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、批號(hào)：H0081505）；恩諾沙星可溶性粉（10%、100 g規(guī)格，某獸藥廠提供）；氫氧化鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司、分析純）。

2 試驗(yàn)方法

取本品適量（約相當(dāng)于恩諾沙星25 mg），精密稱(chēng)定，置250 mL容量瓶中，加0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液10 mL，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置100 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按照紫外-可見(jiàn)分光光度法（中國(guó)獸藥典附錄0401），用1 cm比色池，在271 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取恩諾沙星對(duì)照品，同法測(cè)定。

按照2017 年版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)卷檢測(cè)恩諾沙星可溶性粉含量方法，計(jì)算公式見(jiàn)式1。

式中：A供為供試品吸光度；A對(duì)為對(duì)照品吸光度；W對(duì)為試樣質(zhì)量（g）；W供為對(duì)照品質(zhì)量（g）；對(duì)照品濃度為99.6%；供試品標(biāo)示量為10%；對(duì)照品稀釋倍數(shù)為10 000；供試品稀釋倍數(shù)為10 000。

3 不確定度傳播

3.1 分析不確定度來(lái)源

本試驗(yàn)中，不確定度來(lái)源于稱(chēng)量、定容、量取和樣品比色測(cè)定引入的不確定度。

3.2 量化不確定度分量

3.2.1 稱(chēng)量的不確定度

對(duì)照品質(zhì)量稱(chēng)定的不確定度Ums來(lái)源包括天平的示值不確定度UmS1、天平重復(fù)性不確定度UmS2及其天平偏載誤差UmS3。

十萬(wàn)分之一天平的示值不確定度UmS1，根據(jù)天平附帶資料，天平稱(chēng)量允許誤差為±0.04 mg。US1=0.04/=0.023 1 mg。

由天平重復(fù)性帶入的不確定度UmS2，根據(jù)天平附帶資料，天平稱(chēng)量重復(fù)性0.04 mg。US2=0.04/=0.023 1 mg。

天平偏載誤差帶入的不確定度UmS3，根據(jù)天平附帶資料，天平偏載誤差0.05 mg。US2=0.05/=0.028 9 mg。

由于恩諾沙星對(duì)照品稱(chēng)量25.1 mg，則對(duì)照品稱(chēng)量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Us。

樣品質(zhì)量稱(chēng)定的不確定度UmY來(lái)源包括天平的示值不確定度UmY1、天平重復(fù)性不確定度UmY2及其天平偏載誤差UmY3。

萬(wàn)分之一天平的示值不確定度UmY1，根據(jù)天平附帶資料，天平稱(chēng)量允許誤差為±0.2 mg。UY1=0.2/=0.115 5 mg。

由天平重復(fù)性帶入的不確定度UmY2，根據(jù)天平附帶資料，天平稱(chēng)量重復(fù)性0.1 mg。UY2=0.1mg/=0.057 7 mg。

天平偏載誤差帶入的不確定度UmY3，根據(jù)天平附帶資料，天平偏載誤差0.3 mg。0.173 2 mg。

由于樣品稱(chēng)量平均重量250.1 mg，則樣品稱(chēng)量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度UY。

3.2.2 對(duì)照品的定容與稀釋的不確定度

250 mL 容量瓶A 級(jí)容量允許誤差為0.15 mL，；容量瓶和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。250 mL容量在20 ℃下校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為21.5 ℃，水的膨脹體積系數(shù)為2.1×10-4，按矩形分布計(jì)算，為2.1×10-4×（21.5-20）×250/3= 0.045 5 mL，250 mL容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

100 mL 容量瓶A 級(jí)容量允許誤差為0.10 mL，；容量瓶和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。100 mL 容量在20 ℃下校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為21.5 ℃，水膨脹體積系數(shù)為2.1×10-4，按矩形分布計(jì)算，UV4/3=2.1×10-4×（21.5-20）×100=0.018 2 mL，100 mL 容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

5 mL 移液管容量允許誤差為0.015 mL，UV3=0.015/=0.008 7 mL；移液管和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。5 mL 容量在20 ℃下校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為21.5℃，水的膨脹體積系數(shù)為2.1×10-4，按矩形分布計(jì)算，UV4=2.1×10-4×

3.2.3 樣品的定容與稀釋的不確定度

計(jì)算同3.2.2，UV樣=0.189%

3.2.4 儀器比色的不確定度

影響比色的主要因素是分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性。儀器的影響采用B 類(lèi)評(píng)定。檢定證書(shū)給出的UV-1800 分光光度計(jì)的透射比準(zhǔn)確度為0.5%，按均勻分布UT。

3.2.5 重復(fù)測(cè)定

重復(fù)測(cè)定引入的不確定度UR采用A類(lèi)評(píng)定，重復(fù)6次測(cè)量，結(jié)果如表1所示。用貝塞爾公式計(jì)算單次測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)偏差S(x)，n=6按照貝塞爾法算出。

4 合成不確定度與擴(kuò)展不確定度

取k=2，U=2U合=0.92%。

報(bào)告按2017 年版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)卷檢測(cè)恩諾沙星可溶性粉含量，其結(jié)果為：C=108.24%±0.92%=107.32%～109.16%，k=2。

表1 樣品重復(fù)測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)

表2 紫外分光光度法測(cè)定恩諾沙星可溶性粉的不確定度分量

5 討 論

本文分析了紫外分光光度法測(cè)定恩諾沙星可溶性粉的測(cè)定過(guò)程中不確定度的各個(gè)分量的來(lái)源，由分析結(jié)果可知，儀器比色，溶解與定容、對(duì)照品的稱(chēng)量和重復(fù)性測(cè)定對(duì)不確定度有較大貢獻(xiàn)，而樣品的稱(chēng)量對(duì)不確定度貢獻(xiàn)較小。由此可見(jiàn)，日常應(yīng)注意儀器的維護(hù)和保養(yǎng)，在測(cè)量過(guò)程中應(yīng)選擇精密度高的儀器，使用經(jīng)校正合格的容量?jī)x器進(jìn)行稀釋?zhuān)匾獣r(shí)可適當(dāng)增加測(cè)定次數(shù)，進(jìn)一步降低引入的不確定度。

在評(píng)估不確定度中有很多因素需要考慮，要抓住主要分量，避免漏項(xiàng)。以本試驗(yàn)為例，在進(jìn)行測(cè)量不確定度評(píng)估前首先要對(duì)測(cè)量過(guò)程進(jìn)行分析，然后對(duì)不確定度分量逐一進(jìn)行評(píng)估。不確定度評(píng)估過(guò)程中避免重復(fù)評(píng)估。如當(dāng)評(píng)估了測(cè)量的重復(fù)性分量，就不必在評(píng)估如稱(chēng)量、體積、儀器的重復(fù)性分量了。一些非輸入量不應(yīng)將其作為分量進(jìn)行評(píng)估，其對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響已經(jīng)反映在測(cè)量重復(fù)性中。