橡膠樹枯萎病病原菌室內(nèi)毒力測(cè)定

彭 昀，肖宇明，劉衍超，李增平，王 萌，梁曉宇，張 宇

(海南大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，?？?570228)

橡膠樹(Heveabrasiliensis)生產(chǎn)的乳膠是我國重要的戰(zhàn)略資源，隨著橡膠樹種植年代增加及周邊生態(tài)環(huán)境變化，一些新的病蟲害逐漸顯現(xiàn)出來[1]。2017年在對(duì)海南省瓊中加釵農(nóng)場(chǎng)橡膠樹的病情調(diào)查中發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)引起了橡膠樹枯萎病。該病導(dǎo)致橡膠幼樹頂梢自上而下回枯變褐，呈現(xiàn)“半邊死”癥狀?？菟乐l莖干木質(zhì)部髓心變褐，木質(zhì)部橫切面有零散分布的藍(lán)變癥狀。有的幼樹基部莖干一側(cè)的樹皮爆裂溢膠，溢膠凝固變黑，削去表皮，韌皮部組織變黃褐色至黑褐色，木質(zhì)組織有變黑褐色的縱向條紋。為預(yù)防這種橡膠樹新病害的潛在威脅，筆者對(duì)橡膠樹枯萎病進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選，采用生長速率法測(cè)定了4種常用殺菌劑對(duì)該病原菌進(jìn)行毒力測(cè)定[2]，并選擇2種防效顯著的藥劑進(jìn)行復(fù)配研究[3]，旨在為該病害防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料供試菌種:供試尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)分離于海南省瓊中加釵農(nóng)場(chǎng)熱研7-33-97橡膠樹幼樹枝條。供試藥劑:97.3 %咪鮮胺(prochloraz)原藥購自江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司；97 %異菌脲(iprodione)原藥購自江蘇快達(dá)農(nóng)化股份有限公司；96 %百菌清(chlorothalonil)原藥購自山東青島奧迪斯生物科技有限公司；96%吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)購自海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司；97.2 %多菌靈(carbendazim)原藥購自江蘇省太倉市農(nóng)藥廠；99 %水楊羥肟酸(SHAM)購自上海麥克林生化科技有限公司。將各原藥配成10 000 mg·L-1的母液，4 ℃保存。 供試培養(yǎng)基:PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，瓊脂粉15 g，蒸餾水1 000 mL，滅菌備用。

1.2 方法

1.2.1 含藥平板的制備分別取各藥劑母液加入到定量的PDA培養(yǎng)基中搖晃混勻，使培養(yǎng)基含咪鮮胺的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1，含百菌清的濃度為 0，1，2，4，8，16 mg·L-1，含吡唑嘧菌酯的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1(為降低旁路呼吸途徑對(duì)藥劑的影響, 供試培養(yǎng)基中加入終濃度為100 mg·L-1的水楊羥肟酸[4])，含多菌靈的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1。將含藥培養(yǎng)基倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿 20 mL，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.2.2 處理方式取制作好的含藥平板，空白對(duì)照為不加藥劑的PDA平板。使用5 mm打孔器在PDA培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)2 d的病原菌菌落邊緣取菌碟，分別接于處理培養(yǎng)基平板的中心位置上[5]，每個(gè)處理做3個(gè)重復(fù)，放置于28 ℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，于對(duì)照組菌落生長6～7 cm時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑并記錄[6]。

1.2.3 藥劑復(fù)配選取2種藥效作用較好的藥劑進(jìn)行復(fù)配，以EC50濃度按照不同比例配比，配比為1∶1，1∶3，1∶5，3∶1，5∶1。再在不同比例配比下設(shè)置5個(gè)濃度梯度，濃度稀釋按照逐級(jí)稀釋法稀釋濃度，實(shí)驗(yàn)按照1.2.2和1.2.3中所述方法進(jìn)行。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理使用EXCEL2016，DPS7.05數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出各藥劑的毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)。

復(fù)配增效系數(shù)(SR)[7]計(jì)算方法如下：

式中：a，b分別代表2種農(nóng)藥的含量比例。根據(jù)增效系數(shù)(SR)作出2種藥的聯(lián)合作用評(píng)價(jià)：當(dāng)SR>1.5 時(shí)，藥劑混用時(shí)毒力大于各單劑單用時(shí)毒力的總和，表現(xiàn)為增效作用；當(dāng)SR在 0.5～1.5 時(shí)，表現(xiàn)為相加作用；當(dāng)SR<0.5時(shí)，藥劑混用毒力低于各單劑的毒力總和，表現(xiàn)為拮抗作用[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種殺菌劑對(duì)橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果4種殺菌劑對(duì)橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表1。由表1可見，4種常見殺菌劑對(duì)尖孢鐮刀菌絲的生長抑制效果為：咪鮮胺> 多菌靈>吡唑醚菌酯>百菌清。結(jié)果表明，麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機(jī)雜環(huán)類(苯并咪唑類)殺菌劑的多菌靈對(duì)尖孢鐮刀菌具有較高的抑制活性，故選擇咪鮮胺和多菌靈作為單劑進(jìn)行下一階段的復(fù)配實(shí)驗(yàn)。

表1 供試4種殺菌劑對(duì)尖孢鐮刀菌的抑制作用Tab.1 Toxicity of 4 fungicides on mycelium growth of Fusarium oxysporum

2.2 復(fù)配殺菌劑對(duì)橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果復(fù)配殺菌劑對(duì)橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表2，由表2可見，咪鮮胺和多菌靈1∶1，1∶3，1∶5，3∶1及5∶1復(fù)配條件下EC50值分別為0.96，0.71，0.17，0.87，1.01 mg·L-1，1∶5的復(fù)配效果最佳，5∶1的復(fù)配效果最差。

表2 復(fù)配藥劑對(duì)菌絲的生長抑制結(jié)果Tab.2 Toxicity of fungicide mixture on mycelium growth of Fusarium oxysporum

咪鮮胺和多菌靈的復(fù)配增效系數(shù)見表3，由表3可見，咪鮮胺和多菌靈1∶1，1∶3，3∶1及5:1復(fù)配條件下增效系數(shù)分別為 0.92，1.37，0.92，0.77，均在0.5～1.5之間，2者藥效作用為相加作用，無拮抗作用。咪鮮胺和多菌靈配比在1∶5時(shí)，SR值為6.01，表現(xiàn)為增效作用。

表3 咪鮮胺和多菌靈的復(fù)配增效系數(shù)Tab.3 The SR values of fungicide mixtures of carbendazim and prochloraz on mycelium growth of Fusarium oxysporum

3 討 論

本研究對(duì)4種常見殺菌劑對(duì)橡膠樹尖孢鐮刀菌絲的生長抑制進(jìn)行了測(cè)定，除百菌清外，咪鮮胺、多菌靈、吡唑醚菌酯抑制菌絲效果顯著。其中麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機(jī)雜環(huán)類(苯并咪唑)殺菌劑的多菌靈對(duì)橡膠樹尖孢鐮刀菌的抑菌效果尤為突出，故選擇咪鮮胺和多菌靈進(jìn)行復(fù)配實(shí)驗(yàn)，通過5種不同比例復(fù)配得出的抑菌效果來看，其中咪鮮胺：多菌靈為1∶5的復(fù)配效果最佳，表現(xiàn)為增效作用，并且EC50達(dá)到了0.17 mg·L-1，效果優(yōu)于任何一種單劑。

綜上所述，橡膠樹枯萎病可由常用藥劑進(jìn)行防治，鑒于咪鮮胺與多菌靈的復(fù)配效果尤為突出，推薦在病害發(fā)生時(shí)采用，避免單一藥劑的過度使用所導(dǎo)致病菌抗藥性的增強(qiáng)。