基于ISSR標(biāo)記的大花三色堇遺傳多樣性分析

段 磊，王 霞，王夢圓，宋亞男

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林 132101）

大花三色堇（Viola × wittrockiana.Gams.）又名貓臉花、蝴蝶花，其品種豐富、花色艷麗、抗凍性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，深受人們喜歡，并被譽(yù)為“花壇皇后”。大花三色堇在歐洲、美國和日本非常盛行，這些國家自19世紀(jì)便開始了大花三色堇的品種選育工作，現(xiàn)已取得了顯著的成效，培育出了多種新奇的優(yōu)良品種[1]。而我國針對大花三色堇品種選育方面的研究尚處于起步階段，栽種的多為進(jìn)口F1代種子，這些種子不僅成本高，而且對我國生境的適應(yīng)能力差，因此，隨著市場需求量的增加，選育適應(yīng)中國生境、植株健壯、抗性強(qiáng)、具有中國知識產(chǎn)權(quán)的優(yōu)良品種已是當(dāng)務(wù)之急。

種質(zhì)資源遺傳多樣性研究是進(jìn)行新品種選育的重要內(nèi)容。目前，我國針對大花三色堇遺傳多樣性方面的研究較少，僅有2例DNA分子標(biāo)記方面研究的報(bào)道[1，2]，尚無利用簡單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增（inter-simple sequence repeat，簡稱ISSR）技術(shù)研究大花三色堇種質(zhì)資源分類方面的報(bào)道。本試驗(yàn)利用ISSR技術(shù)分析24份大花三色堇材料的遺傳多樣性分析，為大花三色堇優(yōu)良種質(zhì)資源的收集、分類和良種繁育奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及處理

24份供試材料分別購自甘肅酒泉金秋園藝種業(yè)有限公司、美國泛美種子公司、英國弗倫諾瓦公司和北京花仙子農(nóng)業(yè)有限公司（見表1）。

將種子消毒后接種于不添加任何激素的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌培養(yǎng)，至三葉期取其葉片，于-20℃冷凍保存，備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 基因組DNA的提取

參照王健[2]的方法，采用改良的SDS法提取大花三色堇葉片基因組DNA，然后分別利用核酸分析儀和1%瓊脂糖凝膠電泳檢測基因組DNA的純度和濃度，稀釋DNA濃度至50 ng/μl，-20 ℃貯存?zhèn)溆谩！?br>