雞滑液囊支原體機體內(nèi)藥敏試驗

王會峰 周守長 賀凱麗 李明珠 王雪敏

（華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司，河北邯鄲 057153）

本病一年四季均可發(fā)生，但以春夏季、潮濕季節(jié)或衛(wèi)生條件、飼養(yǎng)管理不善時多見。本病主要發(fā)生于肉雞和蛋雞，常發(fā)生于4～12周齡，成年雞多為慢性或隱性感染。在某一區(qū)域發(fā)生時往往會有一定的品種特異性，發(fā)病率為5～15%，死亡率約為1～10%。本病接觸感染潛伏期為11～21d，長者可達80d，經(jīng)卵感染的潛伏期較短。MS可通過種蛋進行垂直傳播，種禽場在引種時可引入病原，商品代由于種禽場感染而引進病原；但雞群MS的發(fā)生更多是由于接種被MS污染的疫苗而感染或由于飼養(yǎng)管理不當雞群感染大腸桿菌、新城疫、雞傳染性支氣管炎等病原菌而繼發(fā)感染[4]。

國內(nèi)對MS的疫苗研究相比國外晚且研究進程慢，之前對MS病只能通過藥物預防及治療，長期使用藥物MS出現(xiàn)明顯的耐藥性且禽產(chǎn)品中有藥物殘留，因此探索新的MS防控措施勢在必行。目前國內(nèi)使用藥物結合生物安全防控MS。泰樂菌素、紅霉素、恩諾沙星敏感，滑液囊支原體對紅霉素有抵抗力[5]。敏感物防治.支原凈、氟苯尼考、恩諾沙星、鏈霉素、四環(huán)素類等[6]建議先做藥敏試驗，從中選擇出對該病敏感的藥物[7]。當雞群中存在其他病原菌與支原體混合時，建議聯(lián)合應用抗菌藥物進行治療。

防控雞滑液囊支體病，凈化種雞群對養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展意義重大[8]。治療支原體藥物有限并且易產(chǎn)生耐藥性；支原體本身分離培養(yǎng)困難，支原體分離培養(yǎng)周期又長，再加上種雞場使用藥物更加難以分離，體外藥敏試驗開展困難；有時體外藥敏實驗結果并不能很好的反映體內(nèi)使用情況，鑒于以上問題本試驗通過體內(nèi)藥敏試驗篩選出種雞場MS最佳用藥方案。

1 試驗材料

1.1 試驗藥品

強力霉素、泰樂菌素、替米考星、泰妙菌素（支原凈）、沃尼妙林、金霉素、中藥。

1.2 試驗雞

從MS某陽性種雞場，經(jīng)過檢測選擇300只陽性淘汰母雞試驗場單獨飼養(yǎng)。

1.3 主要試劑

康維DNA提取試劑盒

生工合成vlhA-F 5’-CCA GGA GGT GGT ACA GTT GAC-3’

vlhA-R 5’-TTA ATG CTT CTT TAA CTGAAT CTG A-3’

vlhA-probe FAM：5’-CTG CTA AAA CAG AAG CTA AAA CCG CTA T-3’

全式金 AQ401 MIX

1.4 主要儀器

ABI7500 熒光定量PCR儀；

杭州奧盛MK-10金屬浴；

上海湘儀TGL-16臺式高速冷凍離心機。

1.5 qPCR檢測

1.5.1 根據(jù)試驗 體系設定

試劑 用量（μl）mix 10 F引物 0.4 R引物 0.4探針 0.4超純水 6.5 DNA樣品 2

1.5.2 根據(jù)試驗 程序設定

階段 溫度（℃） 時間（S）Hold stage 94 30 PCR stage 94 5（40個循環(huán)） 60 34

1.5.3 實驗結果判定

圖1

圖2

樣品有平滑曲線出現(xiàn)判定為陽性（CT值一般在15～37）如圖1所示，樣品無平滑曲線出現(xiàn)判定陰性如圖2所示。實驗應設置陰陽性對照，陰陽性對照成立則實驗結果成立。

2 試驗分組

從MS陽性廠區(qū)，經(jīng)過檢測選擇300只陽性淘汰母雞，分10組，每組30只，6只為一個重復，每組5個重復。

3 飼喂藥物

雞群到達實驗場后前7d全部飼喂空白飼料，從第8天開始按照表1的方案進行用藥。

表1 各試驗組藥物使用方案

4 病原監(jiān)測

用藥后每10d采一次腭裂棉拭子，到用藥后30d為最后一次采樣。即，采腭裂棉拭子時間點為：開始用藥后第10d，開始用藥后第20d，開始用藥后第30d。

以上采集樣品用熒光PCR（探針）檢測MS病原。

5 試驗結果

表2 用藥后MS qPCR陽性率

圖3 用藥后用藥組三次MS qPCR平均陽性率

6 試驗結論

根據(jù)用藥后MS qPCR陽性率三次檢測，試驗五組沃尼妙林、六組金霉素、八組強力霉素、支原凈一組強力霉素用藥方案效果良好，三組替米考星九組強力霉素、支原凈、二組泰樂菌素效果差，該種雞場可以使用五組沃尼妙林、六組金霉素、八組強力霉素、支原凈一組強力霉素試驗組用藥方案進行輪換用藥。