環狀RNA分子circ_0007766通過上調細胞周期相關蛋白Cyclin D1/CyclinE1/CDK4的表達促進肺腺癌細胞增殖

張帥 夏文佳 董高超 徐維章 李明 許林

近年來肺腺癌發病率逐步升高[1]，靶向藥物成為腫瘤精準醫學的先鋒，諸如表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor, EGFR）、間變性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase,ALK）基因突變患者取得了較好的臨床效果，但突變人群陽性率偏低，患者總體5年生存率仍徘徊在20%，表明肺腺癌發生發展的生物學行為及分子調控機制極其復雜。隨著ENCODE計劃的不斷深入，極大地豐富了人們對于遺傳信息網絡的理解，讓研究者們能更高效地了解細胞間相互調控的分子機制。circRNA作為非編碼RNA家族中新興成員之一，已經被證明在腫瘤的發生、發展中起著重要作用[2,3]。

本研究前期通過芯片檢測發現肺腺癌組織和癌旁組織中circ_0007766表達呈顯著差異[4]，并在多個肺腺癌細胞株中進行體外驗證，對circ_0007766在肺腺癌細胞的增殖、周期和凋亡等生物學功能進行體外水平研究和初步機制探索。

1 材料和方法

1.1 細胞和試劑 肺腺癌A549、SPCA-1、H1975及H1299細胞系均購于中國科學院上海生物化學以及細胞生物學研究所，人正常支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞購自于美國Sciencell公司。RPMI-1640和DMEM培養基購自美國Hyclone公司、胎牛血清購自美國Gibco公司；Trizol、siRNA和PARISTMKit核漿分離試劑盒購自美國Invitrogen公司；CCK-8細胞增殖試劑盒和細胞周期試劑盒均購自南京凱基公司；Annexin V-FITC凋亡試劑盒購自上海貝博公司；SYBR Premix Ex Taq qPCR試劑盒購自中國大連Takara公司；CDK4、cyclin D1、cyclin E、p21和β-actin抗體均購自英國Abcam公司。

1.2 細胞培養 肺腺癌細胞均采用RPMI-1640培養基傳代，具體配方為：RPMI-1640加入10%胎牛血清，100 U/mL青霉素以及100 mg/L鏈霉素。人正常支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞采用DMEM培養基傳代，具體配方：DMEM培養液中加入10%胎牛血清，100 U/mL青霉素以及100 mg/L鏈霉素。……