三種側耳提取物抗氧化活性及對小鼠免疫功能的影響

王曉巖 劉芳芳 包海鷹

（1長春科技學院，吉林長春130600；2吉林農業大學食藥用菌教育部工程研究中心，吉林長春130118）

糙皮側耳（Pleurotus ostreatus）又稱平菇，阿魏側耳（Pleurotus nebrodensis）又稱白靈菇，金頂側耳（Pleurotus citrinipileatus Sing）又稱榆黃蘑，三種真菌均隸屬于擔子菌門（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），傘菌目（Agaricales），側耳科（Pleurotaceae），側耳屬（Pleurotus）[1-4]。側耳屬真菌具有藥理活性，對人體具有養身保健作用，是一類良好的具有極大藥用潛質和食用價值的食用菌[5-6]，側耳屬真菌具有豐富的營養物質，包括多糖、蛋白質、氨基酸、脂肪酸等，這些生物活性成分具有提高機體免疫力、延緩衰老、抗疲勞、抗腫瘤、調節血糖、調節血脂、化學預防[7-9]等重要作用。筆者以三種側耳子實體為材料研究其不同溶劑提取物的抗氧化活性，并測定了其水提物對小鼠血清中細胞因子表達水平，以評價其免疫功能。

1 材料與方法

1.1 供試材料

糙皮側耳子實體、阿魏側耳子實體及金頂側耳子實體均由吉林農業大學名優參茸中心提供。

試驗動物：健康昆明小鼠110只，雌性，體重（22±2）g，年齡6～8周，由長春生物制品有限公司提供，許可證號：SCXK-（吉）2017-0075。

1.2 主要試劑與儀器

苦味酸購自安美實驗器材有限公司；胸腺肽腸溶片購自西安迪賽生物藥業有限責任公司；總抗氧化能力檢測試劑盒（ABTS法）及小白細胞介素2（IL-2）酶聯免疫試劑盒購自碧云天生物技術研究所；酶標儀（TECAN公司Nano Quant infinite 200PRO）。

1.3 成分提取[10]

取干燥的糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳子實體各300 g，粉碎后用1 L石油醚40℃、二氯甲烷50℃、乙酸乙酯55℃、甲醇60℃回流提取3次，減壓回收各有機溶劑，得石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇浸膏。

1.4 抗氧化試驗

將1.3中得到的提取物分別用80%的乙醇配成濃度為0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL的溶液，參照文獻[11]的方法測定其DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基清除能力，根據文獻[12]的方法測定ABTS自由基清除能力。分別以相同濃度的BHT（抗氧劑264）和Trolox（托倫試劑）為對照。

1.5 三種側耳屬水提物對小鼠血清中IL-2、IFN-γ（干擾素）、SOD（超氧化物歧化酶）和GSH-Px（谷胱甘肽過氧化物酶）的影響[13]

水提物制備：將粉碎的糙皮側耳、阿魏側耳及金頂側耳子實體各150 g，加入1 L蒸餾水，65℃提取2 h，重復3次，合并濾液，減壓濃縮，冷凍干燥得水提物。小鼠分組及給藥：將110只小鼠分組，每組10只。將糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳水提物分別設高（12.5 mg/kg）、中（6.25 mg/kg）、低（3.125 mg/kg）3個劑量濃度（中劑量組根據人給藥量的體表面積與小鼠等效計量換算得到[14]）。

小鼠血清中的 IL-2、IFN-γ、SOD和GSH-Px水平的影響：小鼠取血前一晚禁食不禁水，待眼球取血后，將離心備用的血清按照試劑盒說明書檢測待測指標，顯色終止后450 nm處測量OD值，繪制線性標準曲線，計算各項指標實際濃度并分析。

圖1 糙皮側耳提取物清除DPPH自由基能力

圖2 阿魏側耳提取物清除DPPH自由基能力

圖3 金頂側耳提取物清除DPPH自由基能力

圖4 糙皮側耳提取物清除ABTS自由基能力

2 結果與分析

2.1 三種側耳屬提取物的抗氧化能力

2.1.1 各提取物對DPPH自由基清除作用

由圖1、圖2、圖3可知，糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳不同溶劑的提取物均有一定清除DPPH自由基能力。其中，在金頂側耳中，乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基能力最高，也是三種側耳屬所有試驗組中清除DPPH自由基能力最高的；甲醇提取物次之，二氯甲烷提取物較弱，石油醚提取物最弱。糙皮側耳與阿魏側耳的乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基能力也是各側耳屬中最高，石油醚層提取物在各側耳屬中最弱；糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳乙酸乙酯提取物在質量濃度為1.0 mg/mL時，DPPH自由基清除率分別達78.58%、81.79%和91.45%。金頂側耳的乙酸乙酯提取物IC50為0.172 mg/mL，清除效果明顯高于其他溶劑提取物，并且高于陽性對照；阿魏側耳乙酸乙酯提取物IC50為0.186 mg/mL，清除效果較明顯，效果弱于金頂側耳及陽性對照，但高于糙皮側耳（糙皮側耳乙酸乙酯提取物IC50為0.206 mg/mL）。

2.1.2 對ABTS自由基清除作用

由圖4、圖5、圖6可知，糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳相同提取物在相同濃度下對ABTS的清除能力相近，其中乙酸乙酯提取物的清除能力最強，糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳乙酸乙酯提取物在質量濃度為1.0 mg/mL時，ABTS自由基清除率分別為55.72%、56.37%和65.24%，糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳乙酸乙酯提取物IC50分別為0.636 mg/mL、0.581 mg/mL和0.472 mg/mL，其余溶劑提取物對ABTS清除率很弱，IC50均大于1 mg/mL。

2.2 三種側耳屬水提物對小鼠血清IL-2、IFN-γ、SOD和GSH-Px表達水平的影響

結果表明，小鼠灌胃不同劑量的糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳水提物20 d后，金頂側耳水提物3個劑量處理的小鼠血清中IL-2表達水平明顯高于其他側耳屬的對應劑量及陽性對照；阿魏側耳高劑量處理的小鼠血清中IL-2表達水平高于糙皮側耳高劑量及陽性對照；糙皮側耳高劑量處理的小鼠血清中IL-2表達水平略低于陽性對照；但所有劑量均與陰性對照有極顯著差異。金頂側耳與阿魏側耳高劑量處理的小鼠血清中IFN-γ表達水平均高于陽性對照，糙皮側耳高劑量處理的小鼠血清中IFN-γ表達水平略低于陽性對照，但高于陰性。金頂側耳與阿魏側耳高劑量處理的小鼠血清中GSH-Px表達水平略高于陽性，糙皮側耳高劑量處理的小鼠血清中GSH-Px低于陽性組，但明顯高于陰性組。三種側耳不同劑量處理小鼠血清中SOD表達水平與陽性組相差無幾，但均高于陰性組。

圖5 阿魏側耳提取物清除ABTS自由基能力

圖6 金頂側耳提取物清除ABTS自由基能力

圖7 三種側耳屬水提液對小鼠血清中IL-2水平的影響

圖8 三種側耳屬水提液對小鼠血清中IFN-γ水平的影響

圖9 三種側耳屬水提液對小鼠血清中GSH-Px水平的影響

圖10三種側耳屬水提液對小鼠血清中SOD水平的影響

3 小結與討論

在清除DPPH自由基抗氧化能力中，糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳均有不同程度的抗氧化能力，并且在質量范圍內均呈現一定的量效關系，其中糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳乙酸乙酯提取物對DPPH及ABTS的清除率最好。這三種側耳屬真菌能夠誘導IFN-γ、SOD和GSH-Px等細胞因子表達水平，其中金頂側耳水提物效果明顯，從而提高機體免疫力，可預防癌癥、高血壓、糖尿病等疾病的發生[15-16]。

因此，糙皮側耳、阿魏側耳與金頂側耳有開發為抗氧化產品或免疫功能產品的良好前景。