超聲提取-HPLC法快速檢測牡丹籽油中苯并[ɑ]芘

□ 陳 軍 深圳市測達農產品檢測有限公司

苯并[ɑ]芘是一種高活性間接致癌物，被歐盟食品科學委員會（SCF）推薦作為評價PAHs致癌性的標記物[1]。牡丹籽油中BaP的主要來源是植物生長過程中吸收和富集工業廢氣與車輛尾氣排放的顆粒物污染，以及晾曬油料種子、加工過程中的熱處理和提取等環節[2]。目前主要的提取技術有溶劑萃取、固相萃取、凝膠色譜等[3]，檢測標準有GB/T 5009.27-2016、GB/T 22509-2008等，這些標準統籌所有實驗室條件，不太符合基層檢測機構實際所面臨的情況，實用性不高，因此，探尋更為簡便、快速、適合于基層實驗室的檢測方法具有重要意義和價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器設備

Agilent1260、自動進樣器和FLD；KQ5200E可控溫超聲波振蕩提取器；YS2000旋轉蒸發儀等。

1.1.2 試劑

乙腈、甲醇、正己烷、石油醚。

1.1.3 樣品

牡丹籽油（由深圳市南山區農產品批發配送中心提供）。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

稱取0.4 g油樣于50 mL比色管中，加入30 mL乙腈，渦旋混勻，于50℃水浴超聲提取2.5 h，取出轉入100 mL濃縮瓶中，45 ℃減壓旋轉蒸發濃縮至1 mL左右待凈化。

用30 mL正己烷活化中性氧化鋁柱，將待凈化液轉入柱子，收集凈化液，再用60 mL正己烷洗脫，收集合并凈化液，將凈化液于40 ℃減壓旋轉蒸發濃縮至1 mL左右，轉入氮吹管40 ℃氮吹至近干，用1 mL乙腈渦旋復溶，過0.22 μm有機相濾膜，待上機。

1.2.2 標準曲線配制

取濃度為100 μg/mL的BaP標準溶液用甲醇逐級稀釋得到0.1 μg/mL的BaP標準使用液，分別取0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL使用液于棕色10 mL容量瓶，稀釋定容即得1.0、5.0、10、20、30、50 μg/L標準濃度曲線梯度。

表1 流動相選擇參數情況表

圖1 BaP標準曲線

2 結果與討論

2.1 色譜條件的優化

2.1.1 流動相的選擇

分別對比了V乙腈/V水為97∶3、90∶10、80∶20時目標峰的出峰時間、峰型、峰面積，具體參數情況見表1。

經過表1比較分析當V乙腈/V水=90∶10時，BaP的峰與樣品基質雜峰完全分離，出峰時間較短，峰型呈正態分布，峰面積有利于積分定量。

2.1.2 苯并芘標準曲線的建立

在 1～50 μg/L 濃 度 梯 度 范 圍內，以標準系列濃度的峰面積為縱坐標，其濃度為橫坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程為y=0.986 774 13x+0.050 982，相關系數R2=0.999 9，BaP峰面積與質量濃度呈現良好的線性關系見圖1，可用于BaP的定量檢測。

表2 樣品凈化條件優化

表3 牡丹籽油的加標回收率和精密度實驗

2.2 樣品前處理條件的優化

2.2.1 提取條件的優化

采用恒溫加熱超聲提取的方法進行樣品處理，并對提取的條件參數進行優化，主要設計參數有提取劑W（乙腈、甲醇、正己烷、石油醚）、溫度C（30、40、50、60 ℃）和提取時間h（0.5、1.5、2.5、3 h）。對W、C、h這三個參數進行正交實驗和方差分析，以目標物的提取效率為考察標準，綜合結果發現BaP在乙腈作為提取劑，溫度50 ℃，提取時間為2.5 h時提取效率最高。

2.2.2 凈化條件的優化

結合成本和凈化效果，本方法主要對比了中性氧化鋁柱、分子印跡柱和Florisil-SPE柱的凈化效果，以目標物的加標回收率為考察指標，結果見表2。

由表2可知：樣品經過中性氧化鋁柱和分子印跡柱的回收率比Florisil-SPE柱要高，結合洗脫試劑的毒性、批量實驗和回收率穩定性，本方法采用中性氧化鋁柱作為凈化柱。

2.3 方法參數指標的核準

2.3.1 方法的檢出限和定量限

本實驗采用3倍信噪比來計算方法檢出限（LOD，S/N=3）,10倍信噪比計算定量限（LOQ，S/N=10），測得為LOD 0.1 μg/kg，LOQ 為 0.4 μg/kg。

2.3.2 方法的準確度和精密度

選取陰性樣品加入高中低三個濃度的BaP目標物，進樣檢測，計算平均加標回收率和相對標準偏差（RSD，n=6）,具體實驗結果見表3。

由表3可知：在曲線濃度添加范圍內，BaP的平均回收率為86.21%～105.66%，相對標準偏差為1.49%～4.13%，表明方法的準確度和精密度良好，可以滿足定量測定要求。

2.4 方法應用和樣品檢測

采用本方法測定了南山農批市場中20家成品牡丹籽油樣品，其中16個樣品中的BaP低于方法檢出限，4個樣品約有檢出，但低于我國國家標準GB2762-2012規定食用油中BaP的限量 10 μg/kg。

3 結論

本文建立了超聲提取-HPLC法快速檢測牡丹籽油中苯并[ɑ]芘的方法，實驗結果表明，該方法的加標回收率為86.21%～105.66%，最低檢出限為0.1 μg/kg，符合國家標準對食用油中苯并[ɑ]芘的檢測要求，該方法簡優化了樣品的提取和凈化過程，使得樣品能夠批量處理，節省了檢測成本，提高了檢測效率，對大部分基礎檢測機構測定牡丹籽油中的苯并[ɑ]芘具有一定的參考價值。