中國李組織培養技術研究

摘 要：以中國李“帥李”莖段為外植體，通過對不同基本培養基、不同植物生長調節種類和濃度的篩選，建立“帥李”的組織培養再生體系，為”帥李”的組織快繁提供技術指導。結果表明：初代培養宜選用培養基WPM+0.2～0.4mg/L 6- 芐基腺嘌呤（ 6-BA ）+0.08～0.12mg/L 吲哚丁酸（ IBA ）;最佳增殖培養基為WPM+1.0mg/L苯基噻二唑基脲（ TDZ ）+0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA，能誘導形成4～5個叢生芽，將嫩莖接種在添加0.5mg/L萘乙酸（ NAA） 的 1/2MS培養基中，生根率為33.3%。

關鍵詞：帥李;組織培養;再生體系

中圖分類號：S-3文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190730014

李（Prunus）是我國栽培歷史悠久的果樹之一，有著豐富的種質資源[1]。李的童期長，雌蕊敗育率高、遺傳高度雜合，實生苗后代普遍性狀分離，此外常規的扦插或嫁接方法繁殖苗木速度慢、繁殖系數低，這些問題已成為李生產發展的制約因素;如何縮短李的育種時間，快速繁育苗木是李育種工作者長期努力的目標。

“帥李”是山東臨沂主栽李品種，是中國李的一個優良品種，果實卵圓形，果皮紫紅色，果肉淡黃色，口感極好，耐貯運[2]。到目前為止，“帥李”的再生相關研究工作開展較少。本試驗對中國李“帥李”的組織培養技術進行初步的研究，以期建立“帥李”的莖段再生系統，為中國李的苗木快速繁育提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

于2016年4月在臨沂市農業科學院試驗基地“帥李”上采取一年生枝條上的活動芽包括頂芽和莖段為試材。

1.2 試驗方法

將田間取回來的外植體，剪成3cm左右帶芽莖段，浸泡30min，用流動的自來水沖洗1h左右。在超凈工作臺上，先用70%酒精消毒30s，再用0.5%NaClO加吐溫-20℃ 2～3滴消毒15min[3]。再用無菌水沖洗3～4次，將莖段剪成1cm左右，每個莖段帶有一個腋芽，接種到初代培養基上，先暗培養7d，然后轉移到光下培養。

1.3 初代培養基的篩選

試驗采用3因素3水平的正交設計L9（33）（見表1），將消毒過的莖段或頂莖接種到初代培養基，每個處理接種外植體30個，重復3次，30d后統計成活率、增殖倍數。培養溫度為（25 ± 1 ）℃， pH 5.6～5.8，光照時間為 12h/d，光照強度為2 000 lx。

基本培養基：MS、WPM、LP，其中附加蔗糖30g/L，瓊脂 6.5g/L;植物生長調節劑：IBA（0.04mg/L、0.08mg/L、0.12mg/L），6-BA（0.2mg/L、0.4mg/L、1.0mg/L）

1.4 無菌苗增殖

培養基：WPM，其中添加IBA 0.08mg/L，6-BA 0.4mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L;

細胞分裂素： TDZ（0、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L）。將選取初代培養獲得的生長均勻的無菌苗接種到增殖培養基，每個處理接種10個，重復3次。30d后分別統計增殖倍數。

1.5 生根培養

基本培養基：1/2MS，其中附加蔗糖15g/L，瓊脂6.5g/L;

生長素：NAA （0、0.25mg/L、0.5mg/L、0.75mg/L、1.0mg/L）。將長度大于2cm嫩莖接種到生根培養基，每個處理接種15個嫩莖，先暗培養7d后再轉入光下培養。處理重復3次，30d后統計生根率，生根倍數。

1.6 觀察結果及統計方法

成活率=成活外植體/接種外植體總數×100%;

增殖倍數=增殖芽總數/接種芽苗總數×100%;

生根率=生根苗數/接種苗總數×100%;

生根倍數=生根總條數/生根苗總數;

實驗數據借助于DPS17.0軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1? 初代培養基中不同基本培養與植物生長調節劑濃度的篩選? 將消毒過的莖段或頂莖接種到表1中9個不同處理的培養基上，30d后觀察統計成活率。試驗結果表明，WPM基本培養基誘導效果最好，MS誘導效果其次，LP培養后期生長較差。其中處理9成活率最高，達47.7%，與處理2、7、8沒有表現出顯著差異，但與處理1、3、4、5、6表現出差異顯著。結合嫩芽生長后期，處理8、9效果較好 ，即WPM+0.08～0.12mg/L IBA +0.2～0.4mg/L 6-BA。

2.2 不同TDZ濃度對增殖的影響

將初代培養獲取的無菌苗嫩芽切下后分別接種在不同植物生長調節劑組合的WPM培養基中， 從表2可看出，隨著TDZ濃度的增加，增殖倍數呈現上升趨勢。處理5增殖倍數最高，達4.7，與處理4、6之間差異不顯著，但與處理1、2、3差異顯著。單從增殖倍數來看，處理5即WPM+1.0mg/L TDZ+0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA為最佳增殖培養基。

2.3 不同濃度NAA對生根的影響

在1/2MS培養基中添加不同濃度的NAA對生根影響很大，從表3結果可以看出，5個處理生根率差異顯著，處理3、4之間沒有差異。其中處理3（NAA 0.5mg/L）生根率最高，達33.3%，生根倍數達2.1。處理4次之，根的基部產生少量的愈傷團，以致阻礙了生根，且嫩芽后期生長緩慢，因此，最佳生根培養基為1/2MS+0.5mg/L NAA。

3 結論

本試驗以中國李“帥李”的莖段為外植體，分析了不同基本培養與植物生長調節劑對成活率、增殖和生根的影響，初步建立起“帥李”的組織培養植株再生體系。結果表明最佳初代培養基WPM+0.08～0.12mg/L IBA +0.2～0.4mg/L 6-BA;最佳增殖培養基WPM+1.0mg/L TDZ +0.08mg/L IBA +0.4mg/L 6-BA;最佳生根培養基1/2MS+0.5mg/L NAA。

參考文獻

[1] 李玉琴，張玉梅.生物技術在李上的應用[J].河北林業科技，2006（1）：35-36.

[2] 牛慶霖，苑克俊，于婷娟，等.山東省李產業發展現狀研究[J].北方園藝，2015（18）：185-188.

[3] 鄒英寧，李國懷，樊青峰，等不同抗氧化劑對中國李莖段培養的影響[J].華中農業大學學報，2006，25（1）：84-86.