生鮮乳中黃曲霉毒素M1 液質檢測方法

左英芳，馬超越，張 昕，張 佳

（焦作市畜產品質量安全監測中心，河南 焦作 454003）

1 藥物概述

黃曲霉毒素M1（AFM1）主要由哺乳動物食用了發霉的花生、大豆、玉米等（含有黃曲霉毒素B1）的飼料，并在其體內代謝產生。其具有強致突變性、致畸形、致癌性“三致”作用，長期攝入可誘發肝癌。故各國對乳及乳制品中的AFT M1做了嚴格的限定。世界多數采取兩種限量，即0.05μg/kg和0.5μg/kg。中國與美國基本一致，均為0.5μg/kg；歐盟成員國相對較嚴格為0.05μg/kg，歐盟對特殊膳食用品則限量0.025μg/kg。

2 黃曲霉毒素M1的檢測方法

2.1 原理

試樣中的AFM1和13C17-AFM1用乙腈提取后離心氮吹，經Bond Elut Plexa固相萃取柱凈化和富集，凈化液濃縮、定容和過濾后經液相色譜分離，串聯質譜檢測，同位素內標法定量。

2.2 實驗材料

2.2.1 試劑及溶液：甲醇、乙腈為色譜純；實驗用水為滿足國家規定的實驗室一級水；正己烷、丙酮、二氯甲烷為分析純。

2.2.2 AFM1標準品：純度≥98%，或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。13C17-AFM1同位素溶液：0.5μg/ml。

2.2.3 儀器設備：天平：感量0.001g和0.00001g；離心機（德國Sigma），HY-3多功能振蕩器（江蘇金壇）；固相萃取裝置；氮吹儀；液相色譜-串聯質譜儀；一次性微孔濾頭：0.22μm微孔濾膜；Bond Elut Plexa固相萃取柱3ml/60mg。

2.3 實驗步驟

2.3.1 提取：稱取5g混合均勻的試樣（精確到0.001g）于50ml離心管中，加入100μL13C17-AFM1內標溶液（10ng/ml），加入15ml乙腈，渦旋振蕩10min。14000r/min離心5min，取上清液10ml于離心管中，置于50℃水浴中吹至2ml以下，待凈化。

2.3.2 凈化：依次用3.5ml甲醇、3.5ml水活化Bond Elut Plexa固相萃取柱。上樣，加3.5ml水淋洗，抽干，加3.5ml正己烷淋洗（除脂），抽干。用20%丙酮二氯甲烷溶液4ml洗脫，收集洗脫液于離心管中。

2.3.3 復溶：洗脫液于50℃水浴下用氮氣吹干，殘余物用10%乙腈溶液0.5ml溶解，渦旋混勻，取上清液過0.22μm濾膜，用高效液相色譜-串聯質譜儀測定，內標法定量。……