鐵莧菜飲片質量標準制定

徐岳鑫，張雪峰，胡生俊

宿遷市食品藥品檢驗所，江蘇宿遷 223800

鐵莧菜為大戟科植物鐵莧菜Acalypha australis L.的干燥地上部分，在我國除西部高原或干燥地區外，其余各省區均有產生，長于平原或山坡較濕潤地方和空曠草地[1]。鐵莧菜飲片收載于《江蘇省中藥飲片炮制規范》2002年版[2]，其性涼味苦、澀，歸心、肺、大腸、小腸經，具有清熱、解毒、利濕、收斂、止血的功效，用于腸炎、痢疾、吐血、衄血、便血、崩漏；外治癰癤瘡瘍、皮炎濕疹。原質量標準較為簡單，僅有性狀介紹，無法有效控制飲片的質量。本實驗對鐵莧菜飲片的性狀、顯微特征、薄層色譜、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物和含量測定等進行研究，為該飲片質量標準的修訂奠定了基礎。

1 儀器和藥品、試劑

1260高效液相色譜儀 （美國Agilent公司）；BX51光學顯微鏡 （日本Olympus公司）；AUW120D電子天平 （日本島津公司）；ATS4全自動點樣儀及攝像裝置（瑞士Camag公司）；FED115D烘箱（德國Binder公司）；P330馬弗爐（德國Nabertherm公司）。

沒食子酸對照品 （純度90.8%，批號110831-201605）、鐵莧菜對照品（批號 121655-201502），均由中國食品藥品檢定研究院提供；試劑為分析純；水為純化水。

收集鐵莧菜樣品共8批，經江蘇省中科院植物研究所徐增萊教授鑒定為大戟科植物鐵莧菜Acalypha australis L.的干燥地上部分。

2 方法與結果

2.1 藥材性狀

為不規則的短段，莖、葉、花、果、種子混合。莖類圓形，切面黃白色，有髓，表面棕色，有縱條紋；葉多皺縮，破碎，黃綠色；花序腋生，苞片三角狀腎形，合時如蚌；蒴果小，三角狀扁圓形，種子黑色。氣微，味淡。

2.2 顯微特征

粉末黃綠色。葉上表皮細胞垂周壁略平整，下表皮細胞垂周壁波狀彎曲，氣孔平軸式。非腺毛長80～200μm，由 3～4（5）個細胞組成。草酸鈣蔟晶散在，直徑 26～56μm。顯微圖片見圖 1。

圖1 鐵莧菜顯微特征圖

2.3 薄層色譜鑒別

取本品粉末1g，加甲醇20mL，超聲提取20min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取鐵莧菜對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗[3]。吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365 nm處檢視。在供試品色譜中，與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖2。

圖2 鐵莧菜薄層色譜圖

2.4 水分測定

8批樣品水分的平均值為11.35%，以平均值的120%設限，為13.62%，暫規定本品水分不得超過14.0%。

2.5 灰分測定

8批樣品灰分的平均值為11.39%，以平均值的120%設限，為13.67%，暫規定本品總灰分不得超過14.0%。酸不溶性灰分的平均值為3.53%，以平均值的120%設限，為4.24%，暫規定本品酸不溶性灰分不得超過5.0%。

2.6 浸出物測定

8批樣品浸出物（熱浸法，以50%乙醇為溶劑）的平均值為21.05%，以平均值的80%設限，為16.84%，故暫規定本品醇溶性浸出物不得少于16.0%。

2.7 沒食子酸含量測定

2.7.1 色譜條件 色譜柱：安捷倫TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：甲醇為 A，0.1%磷酸溶液為B （0～5min，A 為 10%，B 為 90%，5～20min，A 為10%→90%，B 為 90%→10%）； 流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：270nm；進樣量：5μL。

2.7.2 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品10mg，置50mL量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.7.3 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末0.5g置圓底燒瓶中，加入4mol·L-1鹽酸50mL，稱定重量，加熱回流 4h，放冷，再稱定重量，用 4mol·L-1鹽酸補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.7.4 線性關系考察 精密吸取“2.7.2”項下對照品貯備液適量，配成沒食子酸濃度分別為4.11、20.55、41.10、61.65、102.75、205.50 μg·mL-1的對照品溶液，分別進樣5μL，記錄峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程為：Y=14.224X+3.755 2，r=0.999 6。結果表明，沒食子酸對照品濃度在 4.11～205.50μg·mL-1范圍內呈現良好線性關系。

2.7.5 精密度試驗 精密吸取“2.7.4”項下濃度為61.65μg·mL-1的對照品溶液5μL，連續進樣6次，對照品溶液峰面積的RSD為0.3%，表明精密度良好。

2.7.6 穩定性試驗 取同一批供試品溶液，分別于 0、3、6、12、24 h 進樣 5 μL，按“2.7.1”項下色譜條件測定，峰面積的RSD為0.5%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.7.7 重復性試驗 取同一批樣品，按“2.7.3”供試品溶液制備方法平行制備6份，按“2.7.1”項下色譜條件測定，計算沒食子酸的含量的RSD為1.6%，表明重復性良好。

2.7.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的鐵莧菜樣品6份，每份0.25 g，按低、中、高濃度分別精密加入沒食子酸對照品約 2.4、3.0、3.6mg，照“2.7.3”項下制備供試品溶液，按“2.7.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率，結果平均回收率為97.22%，RSD為1.91%。

2.7.9 樣品測定 按“2.7.3”項下制備供試品溶液，按“2.7.1”項下色譜條件，對8批樣品進行測定，結果按干燥品計算，沒食子酸含量分別為1.23%、1.04%、0.33%、0.91%、1.03%、0.95%、1.96%、1.37%，平均值為1.10%，以平均值的80%設限為0.88%，故暫規定鐵莧菜中所含鞣質以沒食子酸計不得少于0.80%。HPLC法圖譜見圖3、圖4。

圖3 沒食子酸對照品色譜圖

圖4 鐵莧菜飲片色譜圖

3 討 論

3.1 薄層色譜鑒別

在本實驗研究中，對不同取樣量（0.5 g、1 g）和不同提取方式（冷浸過夜、超聲處理30min、水浴加熱回流30min）分別進行了考察，確立了最佳樣品前處理方法。經考察，供試品溶液在24h內點樣，色譜圖中斑點清晰，重現性好。另對不同薄層板（默克產硅膠G預制薄層板、自制硅膠G薄層板）、不同展開系統[三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸（5∶5∶1）、正己烷-乙酸乙酯（2∶1）、石油醚（60 ℃～90 ℃）-乙醚（9∶1）]開展實驗，結果表明，本方法的薄層色譜斑點顯色穩定、清晰一致。本實驗還針對不同點樣量（2μL、5μL、10μL）和不同溫、濕度（t：5℃，RH：49%；t：19℃，RH：72%；t：19 ℃，RH：18%；t：19 ℃，RH：50%）等薄層條件進行了考察，結果表明，本薄層色譜耐受性好，能得到滿意的實驗結果。

3.2 浸出物測定

分別采用不同浸出方法（熱浸法、冷浸法）、不同溶劑（水、50%乙醇、95%乙醇）進行比較，結果表明，以水和50%乙醇作溶劑，采用熱浸法浸出物較高；但樣品經水提取后，過濾速度太慢，較為耗時，不利于實驗操作。因此，確定以50%乙醇為溶劑，采用熱浸法來測定本品的浸出物含量。

3.3 含量測定

在設計含量測定方案時，考慮到鐵莧菜具有清熱解毒、收斂止血的功效，主要含有鞣質、黃酮類、有機酸類化合物[4，5]。其中有機酸類為其清熱解毒功效的藥理學基礎，故也開展了咖啡酸、綠原酸和原兒茶酸等有機酸的含量測定，結果含量較低，故未選擇有機酸類進行測定。鞣質是鐵莧菜收斂止血作用的主要活性成分[6]。鞣質具收斂性，內服可用于治療胃腸道出血、潰瘍和水瀉等癥；外用于創傷、灼傷，可使創傷后滲出物中蛋白質凝固，形成痂膜，可減少分泌和防止感染，能使創面的微血管收縮，有局部止血作用。Park WY等[7]發現，鐵莧菜中所含的鞣質類型為沒食子酸型鞣質，而沒食子酸作為該鞣質的水解產物，具有止瀉止血的藥理作用[8]。同時參考 《中國藥典》2015年版一部中收載的地榆、五倍子、委陵菜等具有收斂止血功效的飲片，均采用酸水解法測定所含鞣質水解后的沒食子酸的含量，故本實驗借鑒此思路，來測定鐵莧菜樣品中沒食子酸的含量。在有的文獻中[9]，采用甲醇超聲提取法直接測定其中沒食子酸含量，本實驗也用該方法對8個樣品進行提取、測定，結果表明，沒食子酸含量極低，僅為0.01%～0.06%，說明鐵莧菜中游離態的沒食子酸含量極低，故選擇了酸水解的方法測定鐵莧菜中沒食子酸的含量。