阿霉素誘導大鼠慢性心力衰竭模型的制備

馬琴

（山西醫科大學晉祠學院，山西太原 030025）

隨著慢性心力衰竭（CHF）發生率的升高，臨床上對于慢性心力衰竭的研究也愈漸深入，CHF動物模型也逐漸在臨床實踐研究中得到應用[1-2]。阿霉素誘導為目前臨床上常用的CHF建模方式，但其死亡率較高。故而，為探尋一種誘導成功率、動物死亡率低的方式一直是臨床關注的重點。本次研究中就幾種不同劑量阿霉素誘導大鼠CHF模型的情況進行了對比分析，具體如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取70只Wistar雄性大鼠進行研究，所有大鼠均為健康SPF級，均由成都達碩生物科技有限公司提供，大鼠體重最小220 g，最大250 g；動物合格證號為：SCXK（川）2008-24；所有大鼠均進行常規飼養、正常自由飲水，大鼠所進食的飼料均為標準合格大鼠飼料。

1.2 試劑與藥品

本次研究中所選用的鹽酸阿霉素均由深圳萬樂藥業有限公司生產，規格為10 mg/支，批號為1401E1；所選用的戊巴比妥鈉則由美國Sigma公司生產，CAS為69020100。

1.3 制備方法

所有大鼠均進行為期1周的適應性喂養，然后以隨機分組原則進行分組，共分為7組，每組10只。利用生理鹽水將阿霉素配制成2 mg/mL的溶液，以大鼠體重為依據，阿霉素腹腔注射，進行CHF模型制備；同時各組大鼠均定期進行稱重，通常需每周稱重一次，以為下周用藥劑量提供依據。

對照組大鼠為進行任何干預；模型A組，以1.25 mg/kg體重劑量注射阿霉素，2次/周，連續注射6周，累積用量為 15 mg/kg；模型 B 組以 1.5 mg/kg體重劑量注射阿霉素，2次/周，連續注射6周，累積用量為18 mg/kg；模型C組以2.00 mg/kg體重注射阿霉素，1次/周，連續注射6周，累積用量為12 mg/kg；模型D組以2.00 mg/kg體重注射阿霉素，前兩周每周2次，后四周每周1次，累積劑量為16 mg/kg；模型E組以2.5 mg/kg體重注射阿霉素，1次/周，連續注射6周，累積用量分別為15 mg/kg；模型F組以3 mg/kg體重注射阿霉素，1次/周，連續注射6周，累積用量分別為18 mg/kg。末次給藥后，常規飼養，對各組大鼠情況進行觀察。

1.4 觀察指標

（1）體征觀察。對各組大鼠每天早、中、晚精神狀態、飲食情況、活動情況、皮毛變化情況、呼吸頻率等進行觀察。

（2）心功能指標檢測。各組大鼠均末次注射停藥后1周時，以1.5%戊巴比妥鈉0.25 mL/100 g行腹腔注射麻醉；麻醉起效后，自大鼠頸部正中切開，促使大鼠左頸總動脈充分暴露，并對其進行鈍性分離，以動脈夾夾住近心端，并進行遠心端結扎，然后以硬膜外麻醉導管制作心導管，外徑長度為1.0 mm，將心導管一端與bl-420E生物機能實驗系統連接；對大鼠心率（HR）、左室收縮壓（LVSP）、左室舒張末壓（LVEDP）、舒張壓（DAP）、收縮壓（SAP）、平均動脈壓（MAP）、左室壓力最大上升及下降速度（±dp/dtmax）進行測定。

（3）對各組大鼠體重及心室質量變化情況進行比較，其中心室質量包括左心室質量指數（LVMI）及右心室質量指數（RVMI）兩項。

1.5 統計學分析

研究中所涉及數據資料均以SPSS19.0處理，定量資料以均屬差表示，進行t檢驗，分類資料以（n，%）表示，進行Χ2檢驗，p＜0.05為有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 行為體征觀察

實驗結束后，模型A組中1只大鼠死亡，模型B組中2只大鼠死亡，模型C組、D組中分別有2只、3只大鼠死亡；模型E組中6只死亡，模型F組中7只大鼠死亡。

各組大鼠實驗前三周，體重均呈現增加趨勢，而從第三周開始，各組大鼠體重均開始逐漸下降，并可見藥物中毒現象，主要表現為精神狀態差、活動能力下降、眼瞼分泌物增多、進食量減少、脫毛、呼吸加快等，部分大鼠可見腹瀉癥狀。以模型E組及F組上述表現最為明顯，且可見腹部明顯膨隆、嚴重腹水、頸肩部與尾根部大面積脫毛現象。心功能檢測結束后，打開大鼠腹腔，可見明顯水腫現象。此外，模型E組與F組大鼠頸總動脈鈍性分離后可見肌肉顏色泛白、頸動脈管徑較細、彈性差、等現象；血流動力學插管難度大，難以良好的把握腹腔麻醉劑量，且操作過程中兩組均有大鼠死亡現象發生，未采集到血液標本，難以得到有效數據，故而未對該兩組大鼠進行數據分析。

2.2 心功能分析

與對照組比較，各模型組大鼠DAP及MAP均明顯下降，而LVEDP則均明顯升高（p＜0.05）；與對照組比較，模型A組、B組及D組大鼠SAP均明下降（p＜0.05），結果見表1。

2.3 各組大鼠體重及心室質量對比

與對照組比較，模型A組、B組、D組大鼠體重及心室質量均明顯升高（p＜0.05），結果見表2。

表1 各組大鼠心功能情況比較

表2 各組大鼠體重及心室質量對比

3 討論

慢性心力衰竭為臨床常見病，是心血管疾病的終末期表現，也是導致心血管疾病患者死亡的一項重要因素，對人類健康的威脅極大[3]。以阿霉素制作實驗性心力衰竭動物模型為目前臨床上研究該病常用的途徑與手段，該模型制備方式因具有操作簡單、實用性強、費用低等特點而逐漸在臨床上得到推廣與應用[4]。但以阿霉素誘導大鼠心力衰竭的一項重要問題即動物死亡率高，有研究支持，阿霉素誘導心力衰竭大鼠的死亡率可達到30%以上，這給研究造成了極大困擾。現階段，臨床上以阿霉素誘導心力衰竭的大鼠模型制備方式較多，且單次用藥劑量也不盡相同，但臨床上尚無統一的標準[5-6]。故而，尋找一種誘導成功率高、大鼠死亡率低的制備方式為當前關注的重點。

本次研究中將選取的大鼠隨機分為7組，并分別以不同劑量的阿霉素進行誘導，與對照組對比結果可見，各模型組大鼠DAP及MAP均明顯下降，而LVEDP則均明顯升高（p＜0.05）；模型A組、B組及D組大鼠SAP均明下降（p＜0.05）；模型A組、B組、D組大鼠體重及心室質量均明顯升高（p＜0.05）；提示阿霉素累積劑量在低于12 mg/kg時通常不易引發心衰，且以阿霉素誘導心衰，其結果與單次給藥劑量高低無較大關聯，而與其累積劑量有關。本次研究中模型E組與F組死亡率較高，并可見明顯腹水現象，提示阿霉素單次給藥劑量較高也可能會對心衰模型制備情況造成影響。研究顯示，心臟泵功能下降是導致心力衰竭的重要因素，而血流動力學變化則是反映心臟泵功能的主要指標。本次研究結果顯示，與對照組比較，各組大鼠動脈舒張壓均明顯下降、LVEDP明顯升高，提示各模型組大鼠經阿霉素誘導后均可見明顯的舒張功能障礙。且研究結果顯示模型A組、B組及D組大鼠還可見明顯動脈收縮壓下降現象，但其LVSP則無明顯變化，提示在模型大鼠出現左室收縮功能不全前，心臟已可見明顯心肌肥厚及舒張功能障礙，因此有學者將LVEDP超過15 mmHg作為心衰造模成功的重要參考指標[7]。

總而言之，多種劑量的阿霉素均可誘導大鼠慢性心力衰竭模型制備，但累積劑量在低于12 mg/kg時通常不易引發心衰。