EBV五聯(lián)檢測在兒童EBV感染診斷中的應(yīng)用價值

張純林 高錦偉 張潔敏

[摘要]目的：分析EBV五聯(lián)抗體檢測在兒童EBV感染診斷和臨床分期中的應(yīng)用價值。方法：收集疑似EBV感染的患兒血液標(biāo)本449例，使用間接免疫熒光法檢測抗EBV殼抗原IgG（VCA-IgG）及抗體親和力、抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）、抗EBV早期抗原IgG（VEA-IgG）、抗EBV核抗原IgG（VNA-IgG），統(tǒng)計(jì)其抗體譜結(jié)果，并將其與僅單獨(dú)使用抗EBV殼抗原IgG（VCA-IgG）和抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）進(jìn)行臨床分期和診斷結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：（1）從五聯(lián)抗體檢測結(jié)果分析;449例疑似患兒中，既往感染189例，占比42.09%;早期感染43例，占比9.57%;需結(jié)合臨床表現(xiàn)確定感染后分期的有28例，占比6.24%。（2）若僅以抗EBV殼抗原IgG（VCA-IgG）和抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）的結(jié)果進(jìn)行臨床分期和診斷，則有既往感染232例，占比51.67%;現(xiàn)癥感染28例，占比6.23%;（3）按患兒的年齡組分析，242例中1歲-6歲年齡段的感染人數(shù)最多，共158例，占所有現(xiàn)癥感染和既往感染患兒的65.29%;其次是6-12歲年齡段，共82例，占比33.88%;0-1歲年齡段，僅2例，占比0.83%。（4）五聯(lián)體檢測結(jié)果中各種陽性組合與病程發(fā)展有很大的關(guān)系。結(jié)論：EBV五聯(lián)抗體檢測在早期感染組中分類更細(xì)致，可使臨床診斷更明確，減少漏診和誤診，并輔助診斷疾病發(fā)生、發(fā)展過程。

[關(guān)鍵詞]EBV，感染，IgG（VCA-IgM）

[中圖分類號]R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）22-0181-03

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是廣泛流行的一種病毒。EBV可以通過唾液或者血液傳播。人是EBV的儲存宿主。EBV感染病人和EBV攜帶者是其傳染源。其中，EBV攜帶者可持續(xù)或間斷排毒達(dá)數(shù)年之久。而兒童感染EBV后，僅根據(jù)其臨床表現(xiàn)尚不能確診。因此，實(shí)驗(yàn)室檢查對EBV感染診斷秈[缶床分期非常關(guān)鍵，對指導(dǎo)臨床治療也有非常重要的意義。本文擬通過回顧性分析疑似患兒的EBV抗體檢測結(jié)果，研究其對于指導(dǎo)臨床準(zhǔn)確判斷EBV感染和分期、治療的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料449例患兒為2018年5～12月在本院就診，疑似為EBV感染者的患兒有449例，年齡2月22天至11歲11月，其中男241例，女208例。每個疑似感染患兒收集一份3mL血液標(biāo)本，分離血清做EBV相關(guān)抗體的五聯(lián)檢測。

1.2方法與試劑（1）方法：抗EBV殼抗原IgG及其親和力、抗EBV殼抗原IgM、抗EBV早期抗原IgG、抗EBV核抗原IgG檢測使用間接免疫熒光法，陽性標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。（2）試劑：抗EBV殼抗原IgM（EBVCA-IgM）、殼抗原IgG抗體（EBVCA-IgC）及抗體親和力、早期抗原IgG（EBVEA-IgG）、核抗原抗體（EBVNA-IgC）檢測試劑盒（間接免疫熒光法）（德國歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司）。（3）儀器：德國歐盟EUROStar熒光顯微鏡。

2 結(jié)果

2.1449例疑似感染EBV標(biāo)本的五聯(lián)抗體檢測結(jié)果及其中同一患兒感染病程，統(tǒng)計(jì)分別見表1和表2。早期感染表現(xiàn)為EBVNA-IgG陰性且EBVCA-IgG低親和力，其余抗體呈陽性;晚期感染表現(xiàn)為EBVCA-IgM陰性且EBVCA-IgG呈高親和力，其余抗體呈陽性;既往感染表現(xiàn)為EBVCA-IgM陰性且EBVCA-IgG呈高親和力但EBVEA-IgG可呈陰亦可陽性表現(xiàn)，其余抗體呈陽性;慢性感染EBVCA-IgM陰性且EBVCA-IgG呈高親和力，EBVCA-IgG、EBVEA-IgG均為陽性且EB VNA-IgG檢測為陰性。早期感染不同于其它感染期的是EBVCA-IgM呈陽性反應(yīng)。其中特殊血清組早期感染可呈現(xiàn)為EBVCA-IgM陽性IgG無親和力，其余各項(xiàng)呈陰性反應(yīng)。其中抗EBVNA-IgG抗體陽性見圖1，抗EBVEA抗體陽性見圖2，抗EBVCA-IgG抗體和抗EBVCA-IgM抗體陽性分別見圖3和圖4。

2.2若僅以抗EBV殼抗原IgG（VCA-IgG）和抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）結(jié)果進(jìn)行分期，則449例疑似感染EBV標(biāo)本的臨床診斷和分期統(tǒng)計(jì)見表3。

4討論

EBV五聯(lián)抗體檢測與單獨(dú)使用抗EBV殼抗原IgG（VCA-IgG）和抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）的結(jié)果比較：除了未感染組，兩者在既往感染組、現(xiàn)癥感染組的結(jié)果均不相同。且EBV五聯(lián)抗體檢測在現(xiàn)癥感染組中分類更細(xì)致，可使臨床診斷更明確，減少漏診和誤診。因?yàn)閱为?dú)檢測抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）經(jīng)常會受到一些因素的干擾（如：抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）持續(xù)陽性，抗EBV殼抗原IgM（VCA-IgM）滴度太低或延遲產(chǎn)生，B細(xì)胞多克隆激活產(chǎn)生非特異性IgM抗體）而使結(jié)果不可靠。而EBV五聯(lián)抗體檢測中包含了抗EBV殼抗原IgG（VCA-IgQ親和力檢測，該項(xiàng)檢測已發(fā)展了一段時間，已成為確定新近感染的可靠方法。因?yàn)镋BV感染后抗EBV殼抗原IgM、抗EBV早期抗原IgG、抗EBV殼抗原IgG與抗EBV核抗原抗體IgG是先后出現(xiàn)，表2中各種陽性組合與病程發(fā)展有很大的關(guān)系，學(xué)齡前兒童多為初次感染，五種抗體在1～4月內(nèi)會有一個很好的抗體水平反應(yīng)，從而使EBV感染相關(guān)疾?。ㄈ鐐魅拘詥魏思?xì)胞增多癥、炎癥、呼吸道感染與EBV隱性感染等）得到及時診斷，以致患兒得到合理有效的治療?？傊?，EBV五聯(lián)體檢測能反應(yīng)EB病毒感染后各個時間段的抗體水平，對于'EB病毒感染相關(guān)疾病的診斷比較完整，不容易漏診誤診。

從年齡段來看，0～1歲的感染者僅2例;1～6歲（包含6歲）的感染者最多，有158例，占65.29%;6～12歲（包含12歲）的感染者82例，占33.88%。分析不同年齡段患兒感染率差別，0-1歲的兒童體內(nèi)還保留著從母體獲得的免疫力，且受到的照顧最周全，與外界接觸機(jī)會少，所以少見感染者。而1-6歲階段，兒童開始上幼托等，與外界接觸的機(jī)會大幅增加，故增大了感染的可能。所以，對1歲以上有疑似EBV感染癥狀的兒童應(yīng)及時就醫(yī)并注意個人衛(wèi)生，防止交叉感染。在疑似感染EBV的449例標(biāo)本中，未感染組有189例，占比42.09%。由此可見，僅僅根據(jù)臨床癥狀不能準(zhǔn)確地診斷EBV感染。所以，如果臨床發(fā)現(xiàn)疑似感染的癥狀，就應(yīng)該及時就醫(yī)并積極地進(jìn)行抗體檢測等實(shí)驗(yàn)室檢查，盡快地確定或者排除感染的可能性。同時，這189例檢測結(jié)果為陰性的患兒，不能排除感染的可能。因?yàn)楫?dāng)特異性目標(biāo)抗體未產(chǎn)生或其滴度低于檢測限（感染初期、免疫系統(tǒng)抑制或免疫功能低下）時，檢測結(jié)果可為陰性，但實(shí)際為感染者。所以，為避免出現(xiàn)漏診，如臨床可疑而檢測結(jié)果為陰性時，應(yīng)擇期采血樣復(fù)查，或者運(yùn)用其他檢測方法（病毒核酸檢測、培養(yǎng)法等）進(jìn)行復(fù)查確認(rèn)。

另外，兩種檢測方法在未感染組的檢測結(jié)果相同。這在一定程度上說明，陰性標(biāo)本在兩種檢測方法下檢測結(jié)果較為一致。由于本次研究總例數(shù)有限，兩種檢測方法陰性率的結(jié)果應(yīng)增大樣本基礎(chǔ)上再進(jìn)行系統(tǒng)的比較，才能得出更準(zhǔn)確地結(jié)論。檢測結(jié)果為早期感染的有43例，占比9.57%。對于這43例患兒，可以確診感染并及時進(jìn)行治療。從采集血樣到檢測完成，用時僅有幾個小時，這要得益于間接免疫熒光法。間接免疫熒光法在保證高特異性和敏感性的同時，操作更為簡單，用時也更少，可以一次檢測五種EBV的抗體。相比培養(yǎng)法、核酸檢測法等其他方法，間接免疫熒光法的優(yōu)勢明顯。需要結(jié)合臨床表現(xiàn)或者其它檢測加以鑒別的抗體結(jié)果有28例，占比6.24%。在EBV感染的進(jìn)程中，不同感染階段可能會有相同的抗體表現(xiàn)。所以需要結(jié)合其它臨床信息或者檢測手段加以鑒別。另有一些研究提出了EBV的六聯(lián)檢測，其中增加了VEA-IgM項(xiàng)目的檢測。這種檢測方法由于多了一個變量進(jìn)行臨床分期，可能會對目前的五聯(lián)抗體檢測有所補(bǔ)充，從而減少不確定結(jié)果的例數(shù)，但是其在EBV檢測中的必要性和應(yīng)用價值還有待研究。既往感染有189例，占比42.09%，是所有分組中占比較高的?？梢?，EBV感染在兒童中比較普遍。這與陳炳龍等人文章結(jié)論相似。