新疆兵團巴州地區乳源性葡萄球菌屬細菌分離及藥敏試驗

姜云　唐思靜

摘要：從巴州地區不同奶牛養殖場采集乳樣24份，進行分離鑒定葡萄球菌屬細菌，采用瓊脂擴散法對分離株進行抗生素敏感性研究。結果：獲得了5種葡萄球菌屬細菌，分別是金黃色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、緩慢葡萄球菌、克氏葡萄球菌、溶酪葡萄球菌。分離到的5種細菌對慶大霉素、諾氟沙星、環丙沙星、阿莫西林高度敏感;對卡那霉素，甲氧芐啶中度敏感;對青霉素、紅霉素、萬古霉素、四環素、利福平耐藥。說明巴州地區奶牛養殖場乳中細菌的耐藥現象還比較嚴重。

關鍵詞：葡萄球菌屬;分離鑒定;藥敏試驗

中圖分類號：S852.611

文獻標識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.15.002

作者簡介：姜云，女，學士，高級畜牧師，研究方向：從事家畜遺傳育種、動物疫病診療防治。

0引言

奶牛隱性乳房炎作為一種常見疾病，嚴重影響奶牛業的發展。奶牛乳房炎發病原因多，通常是由多種非特定病原微生物感染引起，以金黃色葡萄球菌最常見。試驗從巴州不同奶牛養殖場采集乳樣24份，分離鑒定葡萄球菌屬細菌，采用瓊脂擴散法對分離株進行抗生素敏感性研究。

1材料

1.1樣品來源

采自巴州地區3個不同奶牛場，牛只乳房用乳頭藥浴液消毒后，每個乳頭擠去頭2～3把乳，無菌取乳樣10mL，共24個乳樣（分次進行），貼好標簽4h內進行檢驗^[1]。

1.2培養基

普通瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基（含結晶紫）三糖鐵瓊脂、鮮血瓊脂培養基、高鹽甘露醇瓊脂、營養肉湯^[2]。

1.3生化試劑

各種細菌培養基生化試驗管及藥敏片均購于杭州天和微生物試劑有限公司。

2方法

2.1細菌分離及鑒定

無菌取乳樣分別接種于普通瓊脂培養基、鮮血瓊脂培養基和麥康凱瓊脂培養基，在37℃恒溫箱培養24 h后，觀察平皿上菌落形態、大小、顏色、溶血性等，將菌落分類，每一類典型菌落進行涂片鏡檢^[3]。采用革蘭氏染色，區分陰性菌和陽性菌，并判定細菌類屬，并將其進一步純化培養。將葡萄球菌屬進行直接分離培養（普通瓊脂平板、普通瓊脂血平板）和選擇性分離培養（高鹽甘露醇瓊脂）。取已純培養好的菌種，分別接種血瓊脂平板、普通瓊脂平板、甘露醇等生化培養基，37℃培養18～24 h，置室溫24 h，觀察其生長表現、溶血情況和色素變化;同時接種普通肉湯，37℃培養18～24 h后做血漿凝固酶試驗，對可疑單個菌落涂片、染色、鏡檢，進一步觀察其在鑒別培養基上的生長情況，并純化培養菌落，保存備用^[4]。

2.2藥敏試驗

利用紙片瓊脂擴散法對5株分離到的葡萄球菌菌株的抗生素敏感性進行檢測。取營養肉湯增菌培養后的菌液，用移液槍吸取100uL均勻涂抹到整個營養瓊脂培養基上，貼藥敏片，37℃倒置培養24～48 h，后判定結果參照美國實驗室標準委員會（NCCIS）法規^[5]。

3結果與分析

3.1細菌分離及鑒定

細菌分離純化后，根據鏡檢，生化試驗結果，參考相關文獻認為分離到了5種葡萄球菌屬的細菌。分別是木糖葡萄球菌為革蘭氏陽性菌球菌，成單個成雙及不規則葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，無鞭毛。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑為0.5～1 μm。緩慢葡萄球菌為革蘭氏陰性球菌?？耸掀咸亚蚓绕渌蚓蟆?種細菌的生化鑒定試驗結果見表1。

3.2藥敏試驗

研究選用了12種不同類型的常見抗生素檢測葡萄球菌抗藥性，結果表明5種葡萄球菌屬細菌對慶大霉素、諾氟沙星、環丙沙星、阿莫西林高度敏感，對卡那霉素，甲氧芐啶中度敏感。對青霉素、紅霉素、萬古霉素、四環素、利福平耐藥，說明幾個奶牛場乳中葡萄球菌屬的細菌耐藥現象比較嚴重。

注：S為高度敏感，I為中度敏感，R為耐藥。-表示無抑菌直徑。

4討論與結論

（1）搞好圈舍環境衛生，保持牛舍、牛床和牛體清潔，接奶前應對乳房、擠奶員和自動擠奶器加強清洗消毒，定期進行奶牛隱性乳房炎檢測。

（2）發現感染金黃色葡萄球菌的奶牛，及時用藥治療，最好分開飼養、擠奶，避免交叉感染，治愈率低的奶牛建議淘汰處理。

（3）在治療金黃色葡萄球菌性乳房炎時，要通過實驗室細菌培養和藥敏試驗結果，選用高度敏感和針對性強的抗生素進行治療，治愈后要對乳中的藥物殘留進行嚴格監測。

（4）選用中草藥治療，既不易產生抗藥性及藥物殘留，又有藥物與營養劑雙重功能。

（5）疫苗預防。目前市場上出售的疫苗大多為滅活苗，但這種疫苗存在感染的風險性、廣譜性弱。

參考文獻

[1]李宏勝，郁杰，李新圃，等.我國部分地區個體奶牛場乳房炎細菌學調查[J].中獸醫醫藥雜志，2002 （6）：14-17.

[2]袁永隆，張禮華，劉純傳，等.我國奶牛乳房炎常見病原菌的區系調查[J].中國農業科學，1992，25 （4）：70-76.

[3]賈國勇，魏海紅.乳源葡萄球菌的分離鑒定及耐藥性監測[J].上海畜牧獸醫通訊，2008 （3）：36-38.

[4]王曉蘭，孫慶華.奶牛隱性型乳房炎奶樣中葡萄球菌的研究[J].安徽農業科學，2006，34（ lO）：2 153，2 156.

[5]高攀，王登峰，李建軍，等.新疆牛源金黃色葡萄球菌抗菌素敏感性調查[J].新疆農業科學，2012，49（ ll）：2134-2139.