高效液相色譜法測定阿司匹林腸溶片中阿司匹林含量

保嘉敏 趙春苗 周世雄

摘 要：本文采用高效液相色譜法（HPLC-VWD）對阿司匹林腸溶片中成分阿司匹林進(jìn)行測定，對方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、檢測限、定量限、線性關(guān)系和線性范圍考察、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)（加樣回收試驗(yàn)）進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)本方法確實(shí)可靠。本方法可測定濃度在0.999862mg/mL-0.01999724 mg/mL間的阿司匹林，檢測下限可達(dá)0.1ug/mL。

關(guān)鍵詞：阿司匹林;HPLC-VWD;方法驗(yàn)證

阿司匹林腸溶片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，監(jiān)測阿司匹林腸溶片中的阿司匹林含量是一項(xiàng)重要指標(biāo)[1]。本文采用高效液相色譜法測定阿司匹林腸溶片中的阿司匹林，分別對系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、檢測限、定量限、線性關(guān)系和線性范圍考察、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)（加樣回收試驗(yàn)）進(jìn)行驗(yàn)證[2]。

一、儀器與材料

1.1 樣品 ?阿司匹林腸溶片（25mg）市售樣品。

1.2 儀器及試藥

高效液相色譜儀：Thermo Fisher Ultimate 3000（VWD檢測器）。超聲儀：上海科導(dǎo)SK7210LHC超聲儀，35KHz。色譜柱：Welch Xtimate C18（5um，150×4.6mm）。

0.45um有機(jī)性樣品濾膜。天平：賽多利斯電子天平（BSA224S-CW）（100g，0.01mg;220g，0.1g）;梅特勒-托利多電子天平（MX5）（3g，0.001mg）。

試劑：甲醇，色譜級，德國默克，I866432 601。乙腈：色譜純，德國默克，JA050820。四氫呋喃，色譜純，德國默克，I826801615。冰醋酸，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，20140326。水，為GB/T6682中規(guī)定的一級水。阿司匹林，中國食品藥品檢定研究院，批號：100113-201405，純度：99.8%。水楊酸，中國食品藥品檢定研究院，批號：100106-201104，純度：99.9%。

1.3標(biāo)準(zhǔn)儲備液的制備 ?取阿司匹林和水楊酸，用1%冰醋酸甲醇配制成含阿司匹林0.1mg/mL，水楊酸0.01mg/mL溶液作為系統(tǒng)適應(yīng)性測試溶液。取阿司匹林約2.5mg，準(zhǔn)確稱定后，用1%冰醋酸甲醇溶解并定容至25mL，此溶液阿司匹林含量為0.1mg/mL，作為含量測定項(xiàng)下的對照品溶液。

1.4供試品制備 ?取本品細(xì)粉85mg（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），精密稱定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液振搖使阿司匹林溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.5 測定法 ?以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動相;檢測波長為303nm，柱溫30℃。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10uL，注入色譜儀，測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，既得。

二、驗(yàn)證項(xiàng)目

2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn) ? ?照高效液相色譜法測定，阿司匹林與水楊酸的分離度為13.56，滿足系統(tǒng)分離度R>2.0的要求。

2.2特異性試驗(yàn) ? 制備正常樣品與空白樣品，按照供試品溶液制備方法處理，進(jìn)樣檢測分析，考察試驗(yàn)樣品中除阿司匹林和水楊酸以外的其他組分對阿司匹林和水楊酸的測定沒有干擾。

2.3精密度試驗(yàn) ?分別精密吸取阿司匹林對照品溶液10uL，按測定方法重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值，分別為438.561、438.704、438.956、429.862、438.955、438.720，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值為0.84%。

2.4線性關(guān)系與線性范圍考察 ?分別不同濃度梯度的阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，取10uL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。配置阿司匹林的濃度分別為0.999862mg/mL、0.1999724 mg/mL、0.0999862 mg/mL、0.07998896 mg/mL、0.05999172 mg/mL、0.03999448 mg/mL、0.01999724 mg/mL。以峰面積為縱坐標(biāo)，以阿司匹林濃度為橫坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為Y=3916.2x+3.8453，R為0.9998。

2.5檢測限定量限的確定 ?取一定濃度的對照品溶液，精密量取10uL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定，滿足信噪比3：1或10：1為最低檢測限或定量限的要求。測試得到其檢出限為0.1ug/mL，定量限為0.3ug/mL。

2.6重復(fù)性試驗(yàn) ?照1.4供試品制備方法平行制備6份樣品，進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，平均含量為0.26mg/mg，RSD為0.61%。

2.7加標(biāo)回收率試驗(yàn)（準(zhǔn)確度試驗(yàn)）制備樣品進(jìn)行3水平3平行加標(biāo)試驗(yàn)，回收率分別為100.24%、101.34%、101.78%、100.85%、100.57%、100.83%、101.48%、101.98%、100.23%，平均值為101.03%，RSD為0.61%。

三、結(jié)論

通過HPLC-VWD進(jìn)行測定，對阿司匹林腸溶片阿司匹林含量進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、線性關(guān)系與線性范圍考察、檢測限、定量限、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)（加樣回收試驗(yàn)），各項(xiàng)試驗(yàn)測試結(jié)果均能滿足要求，儀器性能穩(wěn)定，質(zhì)控結(jié)果滿意。從以上數(shù)據(jù)可以看出用該方法檢測阿司匹林腸溶片中阿司匹林的含量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以在實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用。

參考文獻(xiàn)

[1]中國醫(yī)藥科技出版社，《中華人民共和國藥典》[M]2015年版 二部

[2]中國醫(yī)藥科技出版社，《中華人民共和國藥典》[M]2015年版 四部