液相色譜法測定葡萄酒中著色劑方法的研究與探討

張碩 王磊

摘要：本文通過多年的實踐經(jīng)驗，采用了變波長超高效液相色譜法，充分利用每種著色劑最大可見吸收波長，在檢測過程中變化波長進(jìn)行測定，避免了單一波長下繁瑣的前處理，減少提取過程的損失，并且避免雜質(zhì)在紫外區(qū)對樣品測定的干擾，保持基線平穩(wěn)，相應(yīng)的提高了幾種色素的靈敏度。

關(guān)鍵詞：著色劑;高效液相色譜法

合成著色劑是為了賦予或改善食品色澤而添加到食品中的物質(zhì)，它不是食品的成分，在著色劑合成中可能伴有其他副產(chǎn)品而造成污染，特別是早期使用的合成著色劑很多發(fā)現(xiàn)具有致癌性，因此世界各國對食用合成著色劑都嚴(yán)格控制。目前，我國允許使用的安全性較高的只有8種。對合成著色劑的檢測通常采用高效液相色譜法。

《檢測和校準(zhǔn)實驗室能力的通用要求》規(guī)定，檢測實驗室應(yīng)開展測量不確定度評定工作，當(dāng)檢測結(jié)果臨近臨界值時，測量不確定度分析評定是檢測工作的重要技術(shù)組成部分。我們采用了變波長超高效液相色譜法，充分利用每種著色劑最大可見吸收波長，在檢測過程中變化波長進(jìn)行測定，避免了單一波長下繁瑣的前處理，減少提取過程的損失，并且避免雜質(zhì)在紫外區(qū)對樣品測定的干擾，保持基線平穩(wěn)，相應(yīng)的提高了幾種色素的靈敏度。同時，超高效液相色譜大大縮短了分析時間，節(jié)約了成本。

一、材料與方法

（一）儀器

ACQUITY iJPLC超高效液相色譜系統(tǒng)

（二）色譜條件

色譜柱;ACQUITY UPLCBEH C柱，2.1×50mm，1.7μm;流動相：甲醇（A），0.02mol/L乙酸銨（B）;流速：0.2ml/min;進(jìn)樣量：3μL;柱溫：30℃;梯度洗脫程序見表1。

（三）樣品測定

均勻稱取樣品10g，用檸檬酸或稀氨水將樣品調(diào)節(jié)到pH=6-7左右，加水定容至50.0mL，經(jīng)0.22μm濾膜過濾上機。根據(jù)保留時間定性，峰面積定量，以峰面積對濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程，外標(biāo)法定量。

二、結(jié)果與討論

（一）流動相的選擇

采用梯度洗脫，通過試驗調(diào)整流動相的比例，最終確定梯度洗脫條件（見表1），我們可以發(fā)現(xiàn)各峰分離完全，且峰形良好，分析時間短。

（二）測定波長的選擇

采用ACQUITY UPLC測定樣品時可以設(shè)定檢測波長程序，使儀器在不同時刻用不同波長測定樣品。經(jīng)過反復(fù)測定發(fā)現(xiàn)，這幾種合成著色劑的保留時間穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，因此可以在每種著色劑出峰的時間將波長設(shè)定為其最大可見吸收波長。國標(biāo)采用單一的254nm進(jìn)行檢測，但在此波長下有吸收的化學(xué)組分很多，會形成大量干擾峰影響著色劑的檢測。采用每一種著色劑的最大可見吸收波長進(jìn)行檢測，無色成分沒有吸收，就可以避免這個問題，同時提高靈敏度、簡化前處理過程。通過對5種合成著色劑的吸收波長進(jìn)行掃描確定最大吸收波長：檸檬黃428nm、莧菜紅520nm、胭脂紅509nm、日落黃483nm、赤蘚紅528nm。根據(jù)各種著色劑的保留時間及最大吸收波長確定波長變化程序見表2。

（三）線性范圍及檢出限

在1.0～100.0mg/L的濃度范圍內(nèi)響應(yīng)值與合成著色劑的濃度成良好的線性關(guān)系。以Y表示濃度，X表示峰面積得到線性方程及相關(guān)系數(shù)見表3。

（四）加標(biāo)回收率試驗

在樣品中分別加入10mg/L和20mg/L的著色劉混標(biāo)，依本法測定，計算回收率，結(jié)果表明回收率良好。（見表4）

（五）精密度試驗

對同一加標(biāo)樣品連續(xù)測定（n=6），測得RSD值分別為檸檬黃1.01%、莧菜紅1.31%、胭脂紅1.24%、日落黃1.12%、赤蘚紅2.05%。

三、結(jié)語

筆者提出的方法分離效果好、靈敏度高、干擾小、處理簡單，方法線性范圍寬，精密度準(zhǔn)確度均取得滿意的效果，對葡萄酒的檢測很有實用價值，值得進(jìn)一步推廣。

參考文獻(xiàn)：

[1]周小新，周紅.離子色譜法測定水中澳酸根離子含量不確定度評價[J].職業(yè)與健康，2009，25（17）.

[2]杜淑霞.高效液相色譜法測定乳飲料中安賽蜜含量的不確定度評定[J].食品研究與開發(fā)，2010，31（2）.

[3]劉燕，陳國利，彭新凱，等.氣相色譜法測定果凍中甜蜜素結(jié)果不確定度評定[J].食品與機械，2008，24（2）.