CA-1500全自動血凝儀兩種方法測定纖維蛋白原的結果比較

歐陽貴平，謝香萍，李小花，劉石長，江萍

(贛州市南康區第一人民醫院檢驗科,江西 贛州341400)

纖維蛋白原(Fg)是血漿中含量最多的一種凝血蛋白，其含量降低或功能異常均可致凝血功能障礙；作為一種與凝血相關的急性時相蛋白，在血栓性疾病的發生和發展中也有重要意義。近年來Fg定量已作為出血與血栓性疾病診治中最常用的檢查項目，因此對其測定的準確性也直接影響到臨床診斷和治療。目前，無論進口和國產全自動血凝儀對Fg測定多數都涵蓋 Clauss法和PT-der法兩種方法，本文就用Sysmex公司CA-1500全自動血凝儀Clauss法和PT-der法兩種方法測定Fg的結果進行比較分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集本院2014年5月份門診及住院病人凝血功能檢查血漿255例，年齡2至69歲，男性150例，女性105例。

1.2 儀器 日本Sysmex公司CA-1500全自動血凝儀。

1.3 試劑 采用西門子公司生產的CA-1500全自動血凝儀配套試劑，PT-der法采用PT試劑盒，批號為：545546，ISI值為：0.96；Clauss法采用 Fg 測定試劑盒，批號為：538075，緩沖液批號為：547038。采用西門子公司生產的CA-1500全自動血凝儀配套凝血質控品：Dade CI-Trol Coagulation Control Level 1， 批 號 為 ：528147；Dade CI-Trol Coagulation Control Level 2，批號為：548239B。以上試劑和質控品均在有效期內使用。

1.4 方法 臨床樣本采集空腹靜脈血 (所有樣本均無溶血、黃疸和脂血)1.8ml于真空抗凝管(含0.2m l 109mmol/L枸椽酸鈉抗凝劑)中,顛倒混勻,3000r/min離心10min，在2h內同時用Clauss法和PT-der法測定Fg含量，CA-1500全自動血凝儀檢測臨床樣本時室內質控在控。依據Clauss法測定結果進行低值(Fg＜2.0g/L)、 中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)分組。

1.5 統計學方法 采用SPSS11.5軟件進行統計學處理，計數資料用(x±s)表示，組間比較用t檢驗,P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1精密度 批內精密度同時用兩種方法連續檢測質控血漿Fg濃度20次，天間精密度同時用兩種方法連續檢測質控血漿Fg濃度20d，計算平均值、標準差(s)和變異系數(CV)，結果見表 1。

2.2 兩種方法檢測結果一致性分析 同時用Clauss法和PT-der法檢測病人血漿Fg濃度,以Clauss法為標準,將結果分為低值(Fg＜2.0g/L)、中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)三組，PT-der法檢測結果與Clauss法結果進行配對t檢驗和相關回歸分析，Fg 含量在低值(Fg＜2.0g/L)、 中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)時，Clauss法和 PT-der法測定 Fg 的結果都有顯著差異(P＜0.01)，顯示出PT-der法測定值明顯高于Clauss法測定值。結果見表2。

表1 Clauss法和PT-der法測定FIB的批內和天間精密度比較(n=20)

表2 Clauss法和PT-der法測定病人血漿纖維蛋白原含量結果比較及相關分析

3 討論

Fg含量檢測原理和方法包括蛋白質比色測定、濁度或光散射法測定、鹽析測定、免疫法測定抗原等[1]。Clauss法和PT-de法測定的Fg均屬于濁度或光散射法的一種，也是目前全自動血凝儀較普及的方法。Clauss法操作簡單、實用精確、結果可靠，被WHO和CLSI推薦為參考方法，但試劑成本較高。其原理是在被檢血漿中加入凝血酶，血漿即凝固，從國際標準品Fg參比血漿測定的標準曲線中獲得被檢血漿的Fg實際含量。凝血酶原導出法(PT-der法)是根據全自動血凝儀在測定凝血酶原時間(PT)的過程中，依據PT凝固曲線中光散射強度的改變程度，推導出Fg的濃度，因此不需要消耗試劑和消耗品，盡管該方法節約試劑、操作簡單、快速，但只能對纖維蛋白原含量作出大致估計，當Fg含量明顯異常時，不能準確判斷[2]。

精密度評價是方法學評價的基礎，本次研究用兩種方法對廠家質控品進行批內精密度、天間精密度進行分析，結果顯示Clauss法的批號528147的批內CV值為2.46%、天間CV值為6.86%，批號548239B的批內CV值為3.40%、天間CV值為6.25%；PT-der法批號528147的批內CV值為3.98%、天間CV值 7.14%，批號 548239B的批內CV值為5.00%、天間CV值7.51%,均在儀器允許的范圍 (批內CV值<5%、總的CV值<10%)。CA-1500血凝儀PT-der法測定Fg結果精密度比Clauss法低,但在儀器的允許范圍之內。

本實驗室使用兩種方法對255例不同濃度的臨床樣本進行檢測，并對檢測結果進行統計分析，Clauss法和PT-der法兩種方法測定三組Fg結果有顯著統計學差異 (P＜0.01)。在三組臨床樣本中,PT-der法測定Fg結果比Clauss法高,Fg濃度在中值(Fg2.0~4.0g/L)Clauss法與PT-der法測定結果相關系數(r值為0.8717)較高,在高值和低值的相關系數(r值分別為0.7943,0.6648)均較低,另外從本次試驗兩種方法測定的兩個批號質控品的數據Clauss法測定548239B和528147的均值分別為2.06g/L和2.03g/L而PT-der法測定548239B和528147的均值分別為3.4g/L和2.76g/L，差異明顯。由于測定方法的原理不同，PT-der法測定結果受到很大的影響。目前，國內外對PT-der法測定Fg方法可靠性研究主要有兩種觀點：一種是在Fg低值時與Clauss法結果無顯著差異，在高值時有顯著差異，PT-der法結果比Clauss法高[3-5]，另一種觀點認為PT-der法結果與 Clauss法結果差異顯著，PT-der法結果比Clauss法高,建議不使用PT-der法[6-8]。出現這種情況的原因可能與儀器、病人和試劑等因素有關[9,10]。綜上，本實驗室CA-1500血凝儀PT-der法不適合代替Clauss法測定血漿纖維蛋白原含量進行臨床篩查、診斷和治療。隨著自動化血凝儀的普及以及測定方法的規范化和標準化，保證檢驗結果的準確性和可靠性，實現實驗室數據互認，綜合其它作者報道的PT-der法測定Fg的評價，使用Clauss法淘汰PT-der法測的組成(包括病人的年齡)定 Fg是一種必然趨勢。在沒有條件用Clauss法而用PT-der法的測定血漿Fg濃度的實驗室應建立本實驗室的生物參考區間，并對PT-der法測定結果與Clauss法測定結果進行比對，了解其檢測性能，最大可能保證檢驗質量。

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