丁酸鈉和芽孢桿菌制劑聯用對彭縣黃雞屠宰性能、脂肪酸及腸道菌群的影響

李 娟， 雷春龍， 張 龍， 邱時秀， 朱佳文，吳永勝*， 許禎瑩， 陳亞迎， 徐麒麟， 劉瀚揚

（1.成都市農林科學院畜牧研究所，四川成都 611130；2.西華師范大學生態研究院，四川南充 637009）

枯草芽孢桿菌屬于嚴格需氧菌，并非腸道微生物，其可以殺滅或抑制有害微生物，調節腸道微生態平衡，改善腸道完整性和營養物質吸收效率（Jeong等，2014）。 Maruta （1996）試驗表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌 （Bacillus subtilis C-3102），肉雞活體的屠宰率顯著提高，胴體胸肌增加，腹部脂肪減少，空腸彎曲桿菌的數量降低，感染雞群的發病率減少。

酸化劑、益生素作為高效、無污染、無殘留的保健型飼料添加劑，正逐步被應用于飼料行業。酸化劑具有降低消化道的pH、提高消化酶的活性、改善腸道菌群的作用（王冉等，2002）。關于酸化劑和益生素聯用的文獻報道較少，本試驗研究飼料中添加丁酸鈉和枯草芽孢桿菌單用和聯用對彭縣黃雞腸道微生物菌群、肉質脂肪酸、屠宰性能的影響，以期為彭縣黃雞的養殖及深入研究提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗選用的288只健康且體重相近的100日齡彭縣黃雞（公雞），由彭州天華禽業有限公司提供。

1.2 藥品 試驗所需的益生素為枯草芽孢桿菌制劑，由本實驗室篩選，活菌數≥108cfu/g，其是用米糠作為載體，接種菌液，固體發酵而成。本試驗所需的酸化劑為丁酸鈉，購于日照東潤德農牧發展有限公司，純度為98.5%。

1.3 主要試劑 鹽酸（HCl），氨水（NH3·H2O），焦性沒食子酸（C6H6O3），乙醚（C4H10O），石油醚：沸程 30～ 60℃，95%乙醇（C2H6O），甲醇（CH3OH）：色譜純，氫氧化鈉 （NaOH），正庚烷 [CH3（CH2）5CH3]：色譜純，無水硫酸鈉（Na2SO4），氯化鈉（Na-Cl），異辛烷[（CH3）2CHCH2C（CH3）3]：色譜純，硫酸氫鈉（ NaHSO4），氫氧化鉀（KOH），均由成都市科龍化工試劑廠提供。

1.4 試驗設計及飼養方式 采用單因素試驗設計，隨機分成4組，每組4個重復，每個重復18只雞。Y0為對照組，飼喂基礎飼糧，Y1、Y2、Y3組分別在基礎日糧中添加0.05%丁酸鈉、0.03%枯草芽孢桿菌、0.05%丁酸鈉+0.03%枯草芽孢桿菌。試驗雞采用錯疊3層小群體籠養方式進行。各試驗組免疫程序按照常規免疫程序進行。自由采食和自由飲水。試驗基礎飼糧參照我國黃羽肉雞飼養標準2004（NY/T33-2004）配制，試驗日糧組成及營養水平見表1。試驗預試期5 d，正試期47 d。

表1 試驗日糧組成及營養水平

1.5 測定指標及方法

1.5.1 屠宰性能 試驗結束，從每組中隨機抽取體重相近的仔雞8只 （每個重復2只），按Zhao（2012）方法進行屠宰。

1.5.2 腿肌脂肪酸檢測 屠宰后取一塊腿肌樣品，參照GB 5009·168-2016《食品中脂肪酸的測定》方法對雞腿肌中的脂肪酸進行測定。

1.5.3 腸道菌群檢測

1.5.3.1 菌群稀釋 屠宰時精確稱取雞盲腸內容物，以無菌生理鹽水稀釋為終濃度為10 mg/mL菌懸液，為100倍稀釋母液。用0.2 mL無菌吸管精確吸取0.1 mL細菌懸液放入含有0.9 mL生理鹽水的潔凈滅菌試管中，然后將管內懸液混合均勻，即為10-1倍稀釋菌液。另取一支吸管自10-1試管吸0.1 mL放入含有0.9 mL生理鹽水的試管中，其余依次類推，最終得到 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀釋的菌液。

1.5.3.2 細菌分離 培養基種類及培養方法見表2。每個稀釋度菌液取0.01 mL稀釋液分別接種4種培養基進行大腸桿菌、沙門氏菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的分離培養，每種稀釋度檢測3次。同時以生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。

1.5.3.3 計數 培養一段時間后取出培養皿，算出同一稀釋度的菌落平均數，并按每毫升中總活菌數=同一稀釋度三次重復的菌落平均數×稀釋倍數×10進行計算得到每毫升總活菌數。

表2 腸道微生物菌培養基、培養方式和條件

1.6 數據的統計分析 采用JMP10統計軟件對數據進行分析，采用最小二乘分析法對四個組進行單因素方差分析，其中P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05表示差異顯著，結果表示為“平均值±標準誤”。

2 結果

2.1 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對彭縣黃雞屠宰性能的影響 由表3可知，與對照組相比，日糧中添加0.05%丁酸鈉組活重、腹脂重（P＜0.05）分別提高3.50%、369.30%，腺胃率（P＜0.05）降低了18.75%。日糧中添加0.03%枯草芽孢桿菌組活重、肌胃重、肌胃率（P＜0.05）分別提高4.3%、17.08%、16.33%。聯用組中屠體重、全凈膛重、全凈膛率和半凈膛率較對照組（P＜0.05）分別降低2.52%、6.95%、8.29%、6.90%，肌胃重（P＜0.05）提高15.52%。

表3 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對彭縣黃雞屠宰性能的影響

2.2 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對彭縣黃雞腿肌脂肪酸的影響 由表4可知，日糧中添加0.05%丁酸鈉組較添加0.03%枯草芽孢桿菌組飽和脂肪酸十七烷酸的比例（P＜0.05）降低26.92%；添加了丁酸鈉之后，總單不飽和脂肪酸含量增加，但差異不顯著（P＞0.05）；添加0.03%的枯草芽孢桿菌之后，飽和脂肪酸中的硬脂酸C18：0含量（P＜0.05）降低18.39%；總飽和脂肪酸降低，總單不飽和脂肪酸、總多不飽和脂肪酸、總不飽和脂肪酸均升高，但差異不顯著（P ＞ 0.05）。 二者聯用后，γ-亞油酸 C18：3n6的水平（P ＜ 0.05）提高了 31.25%。

表4 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對彭縣黃雞腿肌脂肪酸的影響

2.3 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對彭縣黃雞腸道微生物菌群和pH的影響 由表5可知，與對照組相比，日糧中添加0.05%丁酸鈉+0.03%枯草芽孢桿菌聯用組雙歧桿菌數量 （P＜0.05）提高了652.19%；添加0.05%丁酸鈉組致病菌沙門氏菌的數量 （P＜0.05）降低了83.58%。日糧中添加0.03%枯草芽孢桿菌和二者聯用均能提高彭縣黃雞腸道乳酸菌數量（P＞0.05），降低沙門氏菌的數量（P＞0.05）。添加不同量的丁酸鈉、枯草芽孢桿菌和二者聯用均未出現致病菌大腸桿菌。添加0.05%的丁酸鈉和二者聯用均可以降低腸道的pH（P ＞ 0.05）。

3 討論

黃冠慶（2013）等研究認為，酸化劑和益生素聯用，當添加量為0.3%時可顯著降低胸肌滴水損失，添加量為0.5%時可顯著提高腿肌率及顯著降低胸肌滴水損失和胸肌率。潘康成（2005）等研究認為，枯草芽孢桿菌制劑能顯著提高肉雞的腿肌重和腿肌率。Mahmoud（2017）等在飼料中添加枯草芽孢桿菌發現，肉雞胴體品質顯著提高。Bai（2017）等研究表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌對滴水損失、蒸煮損失、剪切力、L×24 h、a×24 h、b×45 min和 b×24 h值均有影響（P ＜ 0.05），添加枯草芽孢桿菌組較對照組體重增加（P＜0.05）。本試驗研究結果表明，日糧中添加0.05%的丁酸鈉能顯著提高地方品種彭縣黃雞的活重、腹脂重，添加0.03%的枯草芽孢桿菌能顯著提高彭縣黃雞的活重、肌胃重、肌胃率。而日糧中添加0.05%丁酸鈉+0.03%枯草芽孢桿菌效果并不理想，可能是影響了腸道對營養物質的吸收，進而影響了屠宰性能。

表5 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對雞腸道微生物菌群和p H的影響

補充枯草芽孢桿菌使盲腸中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量顯著增加，而大腸桿菌和葡萄球菌的數量顯著減少（Yang 等，2016）。 王瑩（2015）研究認為，芽孢桿菌制劑對蛋雞育雛期腸道內大腸桿菌的影響不明顯，但顯著增加了乳酸桿菌的數目，也增加了盲腸內的微生物多樣性。本次研究結果與前人的研究結果相似，丁酸鈉和枯草芽孢桿菌聯用能顯著提高彭縣黃雞腸道的雙歧桿菌數量。有研究證明短鏈脂肪酸如丁酸鹽能抑制肉雞沙門氏菌的生長（Leeson等，2005）。本試驗結果表明，丁酸鈉+枯草芽孢桿菌和單獨添加丁酸鈉均能降低致病菌沙門氏菌的數量，單獨添加丁酸鈉效果更明顯，能顯著降低沙門氏菌數量。

脂肪酸是構成脂肪的重要化學物質，是組織細胞的組成部分，其決定脂肪的理化性質，能夠促進機體新陳代謝，其中不飽和脂肪酸含量更是影響肉品風味的重要因素（李慧芳等，2004）。彭縣黃雞雞肉不飽和脂肪酸（UFA）相對含量為56.09%～60.39%。油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸是彭縣黃雞體內脂肪酸的主要組成部分，朱仁俊（2012）等的研究結果表明，飽和脂肪酸攝入過高是導致血液膽固醇升高的主要原因之一。此外，多不飽和脂肪酸中的動物必需脂肪酸亞油酸、花生四烯酸和亞麻酸可降低血液中膽固醇的含量，具有預防心血管疾病的作用，并且可參與精子的形成，同時也是線粒體和細胞膜的重要組成物質 （張秀梅等，2014）。本研究中，丁酸鈉和枯草芽孢桿菌聯用并沒有提高總不飽和脂肪酸的比例，但是丁酸鈉和枯草芽孢桿菌聯用能顯著提高雞肉γ-亞油酸C18：3n6 的水平。

4 小結

本試驗結果表明，單獨添加0.05%丁酸鈉、0.03%枯草芽孢桿菌均能提高彭縣黃雞屠宰性能、改善腸道微生物菌群和肉質脂肪酸水平，而二者聯用并不理想。