欖香烯注射液配伍不同溶媒的穩定性變化探討

寧 萍 饒曉黎 胡 玉

安徽省滁州市第一人民醫院心胸外科 239000

欖香烯是從中藥姜科植物溫郁金(溫莪術)的根莖中提取具有抗癌作用的活性有效成分，其制劑欖香烯注射液廣泛用于臨床，對多種癌癥具有明顯的抗腫瘤作用[1-4]。目前，欖香烯的基礎藥理研究已經較多，但臨床使用過程中溶媒配伍禁忌方面無相關文獻報道。臨床上廣泛使用的欖香烯制劑主要有口服乳劑及注射液乳劑，其中注射液說明書用法為靜脈注射和胸腔灌注，但臨床實際主要為靜脈滴注用藥，由于說明書未明確標注溶媒及溶媒量，因此在臨床使用過程中可能對醫護人員及處方醫囑審核人員造成一定困擾。本研究通過欖香烯注射液與臨床常見4種溶媒配伍，后觀察配伍溶液顏色與外觀、pH值、不溶性微粒，以及使用HPLC測定β-欖香烯活性成分變化情況，為臨床合理用藥提供參考，同時也為藥師審方提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，包括DAD紫外檢測器和自動進樣器；PHS-25 酸堿度測定計(上海盛磁儀器有限公司)；FA-2004電子天平(常州天之平儀器設備有限公司)；TDZ5-WS低速多管自動平衡離心機、TG16-W高速離心機(長沙維爾康湘鷹離心機有限公司)； SK40-120小型超聲波清洗機(張家港市神科超聲電子有限公司)。

1.2 試劑 β-欖香烯對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100268-201402，純度99.4%)；欖香烯注射液(大連華立金港藥業有限公司，規格20ml:0.1g，含β、γ、δ-欖香烯，批號：1707201)；5%葡萄糖注射液(安徽雙鶴藥業有限責任公司，規格：250ml:12.5g，批號：180526 3B)、10%葡萄糖注射液(安徽雙鶴藥業有限責任公司，規格：250ml:25g，批號：171212 9Q)、0.9%氯化鈉注射液(安徽雙鶴藥業有限責任公司，規格：250ml:2.25g，批號：180502 12K)、5%葡萄糖氯化鈉注射液(安徽雙鶴藥業有限責任公司，規格：250ml:12.5g:2.25g，批號：180730 4C)；甲醇(南京化學試劑股份有限公司)色譜純、乙腈(天津科密歐試劑有限公司)色譜純；超純水(院檢驗科提供)；其余試劑為分析純。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件。色譜柱：symmetry C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈∶水=88∶12；檢測波長：210nm；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；進樣量：10μl；色譜工作站：Agilent ChemStation。

1.3.2 試劑配制。精密稱取β-欖香烯對照品108.71mg，移至10ml容量瓶并使用甲醇定容，搖勻，制作成10.81mg/ml的對照品溶液。取欖香烯注射液樣品2ml置于10ml容量瓶中加甲醇適量并超聲處理，最后定容至刻度，搖勻并過濾，即得1mg/ml的供試品溶液。根據臨床常用欖香烯注射液用藥濃度，取欖香烯注射液2支共40ml分別加入5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液各250ml，配置成欖香烯注射液0.80mg/ml的4種配伍溶液。

1.4 觀察指標 欖香烯注射液分別與5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍，室溫下放置6h，分別在0h、2h、4h、6h觀察溶液顏色與外觀、pH值，以及使用HPLC測定β-欖香烯活性成分變化情況。

2 結果

2.1 配伍后顏色外觀變化 將1.3.2項中配置的4種欖香烯注射液溶液室溫條件放置6h，并分別觀察0、2、4、6h時4種溶液的外觀及顏色，用比色管觀察顏色變化，結果表明6h內欖香烯注射液4種配伍溶液外觀呈乳白色且無明顯變化，無沉淀及氣泡生成。

2.2 配伍后pH值變化 將1.3.2項中配置的4種欖香烯注射液溶液使用PHS-25 pH測定計檢測pH值，測定結果見表1，結果表明4種欖香烯注射液溶液6h內pH值變化無明顯差異。

表1 欖香烯注射液4種溶液配伍不同時間pH變化

2.3 方法學考察

2.3.1 線性回歸方程。精密量取β-欖香烯對照品溶液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.5ml、2.0ml置于10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，分別制成溶度分別為0.22mg/ml、0.43mg/ml、0.86mg/ml、1.62mg/ml、2.16mg/ml的對照品溶液，根據1.3.1項色譜條件測定峰面積，制備標準曲線。以β-欖香烯峰面積Y作為橫坐標，β-欖香烯的濃度C作為縱坐標，計算β-欖香烯線性回歸方程和相關系數r，繪制β-欖香烯標準曲線得為Y=5.766 420 12×106C-7.512 54×104(r=0.996 8),結果表明β-欖香烯在濃度為0.22～2.16mg/ml范圍內線性關系良好。

2.3.2 專屬性實驗。取對照品溶液1ml置于10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，再分別取上述溶液和供試品溶液各10μl,按照1.3.1項色譜條件檢測，結果顯示β-欖香烯對照品和欖香烯注射液供試品主峰處未見其他峰干擾，專屬性良好，結果見圖1。

2.3.3 精密度實驗。根據2.3.1線性回歸方程中β-欖香烯對照品溶液配置方法，配置得0.86mg/ml的β-欖香烯對照品溶液，按照1.3.1項色譜條件進行檢測，重復進樣5次，測定峰面積，RSD為0.92%(n=5)，結果表明本法精密度良好。

2.4 配伍后活性成分含量變化 根據1.3.1項色譜條件測定2.1項中不同時間點的4種輸液含量，記錄峰面積并根據β-欖香烯標準曲線方程計算4種溶液中β-欖香烯的含量。以0h作為β-欖香烯100%含量比較其余時間點的含量變化情況，結果表明6h內4種欖香烯注射液配伍溶液相對含量變化無明顯差異，具體結果見表2。

A

B

A：對照品溶液，B：供試品溶液，1： β-欖香烯主峰

表2 欖香烯注射液4種溶液配伍不同時間含量變化(%)

3 討論

臨床用藥溶媒的選擇首先應參考藥品說明書，大連華立金港藥業有限公司生產的欖香烯注射液說明書中用法用量為靜注及胸腹腔灌注，均未明確標注溶媒及體積，查閱相關書籍提示欖香烯注射液可溶于20%脂肪乳注射液150ml及0.9%氯化鈉注射液300～400ml中靜脈滴注[5]，中國藥典臨床用藥須知中標明欖香烯注射液除可使用以上2種溶媒外，還可溶于5%葡萄糖注射液300～400ml中進行靜脈滴注[6-7]。臨床使用欖香烯注射液過程中因直接靜脈注射患者反映藥液刺激性及靜脈炎等不適，對直接靜脈用藥抵觸較大。經統計我院2017年399例患者使用欖香烯注射液溶媒為0.9%氯化鈉注射液占85%以上，溶媒量在100～250ml比例占90%以上，胸腹腔灌注使用方式比例較低約占2%。研究發現欖香烯單藥或合并化療藥胸腔灌注治療胸腔積液具有較好效果[8-9]，我院欖香烯胸腔灌注給藥全部給藥方式中比例較低，且在使用中應注意不良反應風險，應做好應對準備[10]。欖香烯乳注射劑治療癌性胸水時應避免用利多卡因代替普魯卡因注入胸腔內[11]。隨著欖香烯注射液藥物的廣泛使用，其不良反應的報道逐漸增多[12-14]，主要涉及的不良反應累及器官包括皮膚附件、呼吸系統、循環系統、消化系統、神經系統及全身性損害，其中新的不良反應也開始報道[15]。我院2017年1月—2018年11月期間報道的欖香烯不良反應僅有7例，無嚴重不良反應發生，不良反應發生率為1.10%，且主要為靜脈刺激、靜脈炎等，其可能是由于欖香烯注射液直接靜脈輸注導致。本研究結果欖香烯注射液與4種常見溶液配伍后6h內顏色外觀、pH值和含量無明顯變化，結果可作為臨床用藥參考。臨床發現欖香烯注射液配伍溶媒后使用,患者耐受性好、接受度高，臨床使用不良反應減少。

目前，中藥注射劑配伍穩定性研究報道較多[16-18]，但β-欖香烯注射液配伍研究較少。β-欖香烯藥理作用明確且相關研究較多，但γ、δ-欖香烯未見相關研究報道，本研究中欖香烯注射液制劑中含有β、γ、δ-欖香烯等三種異構體，其中由于目前市售僅能提供β-欖香烯標準品，在溶媒配伍后含量測定考察中未能詳細測定三者含量，因此研究還存在一定不足，還需進一步研究驗證。