一例由豬流行性腹瀉病毒變異株引發(fā)仔豬腹瀉的診斷與治療

周 政

（湘潭縣易俗河鎮(zhèn)農(nóng)技農(nóng)機(jī)畜牧水產(chǎn)推廣服務(wù)中心，湖南 湘潭 411228）

在生豬養(yǎng)殖過程中，仔豬腹瀉是較為常見的臨床疾病，其臨床表現(xiàn)主要包括腹瀉、消瘦和脫水等，1周齡內(nèi)哺乳仔豬發(fā)病后死亡率可高達(dá)100%[1]。引起仔豬腹瀉的病因有很多，其中豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PRoV）是較為常見的，可以引起仔豬腹瀉，而豬德爾塔冠狀病毒也是近期發(fā)現(xiàn)可以導(dǎo)致仔豬腹瀉的新型冠狀病毒[2]。PEDV感染仔豬后可導(dǎo)致病豬出現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉、消瘦等臨床癥狀，且伴發(fā)高死亡率[3-4]。但由于其臨床癥狀與其它病毒性腹瀉類似，臨床和病理變化診斷無法確診，需要借助實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)對病因進(jìn)行確診，以進(jìn)行針對性地治療和防控。

2018年4月初，筆者所在的湖南省湘潭縣某規(guī)?；B(yǎng)豬場暴發(fā)仔豬腹瀉，10日齡內(nèi)仔豬出現(xiàn)持續(xù)性水樣腹瀉、嘔吐和極度消瘦的臨床癥狀，排出糞便為黃色，后期為黑色且?guī)в行任兜募S便，伴有極高的死亡率，養(yǎng)殖戶使用多種抗菌藥后仍然無效。最終確診為PEDV變異株感染所引起，經(jīng)過緊急處理措施后，疫情得到有效控制，疾病的診斷和治療過程如下。

1 發(fā)病情況

2018年4月初，湘潭縣易俗河鎮(zhèn)某規(guī)模化豬場（存欄母豬100頭左右）部分欄舍仔豬發(fā)生水樣腹瀉、食欲差等臨床癥狀，養(yǎng)殖戶以為是細(xì)菌性疾病感染所導(dǎo)致，故使用常規(guī)抗菌藥物（恩羅沙星）對發(fā)病豬群進(jìn)行治療，但效果較差。在治療期間，其它仔豬群也陸續(xù)發(fā)生較嚴(yán)重的腹瀉，且7日齡內(nèi)發(fā)病豬群死亡率接近100%。值得注意的是，該豬場其它發(fā)育階段豬群未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，說明該豬場未發(fā)生繁殖障礙性傳染病，如豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合征等。

2 臨床癥狀與病理變化

通過對發(fā)病豬群臨床癥狀進(jìn)行觀察，發(fā)病的豬群主要是仔豬和保育豬，病豬消瘦、腹瀉、脫水和畏寒，在產(chǎn)床可見仔豬嘔吐物和水樣腹瀉糞便。通過對死亡和瀕臨死亡的仔豬進(jìn)行病理解剖，發(fā)現(xiàn)被解剖的仔豬均出現(xiàn)較為明顯的病理變化，如豬小腸腸壁變薄、腸內(nèi)有未消化的凝乳塊，且內(nèi)容物有腥臭味，但明顯的病理變化主要集中在腸道，其它主要臟器未發(fā)生明顯臨床癥狀。

基于對豬群的發(fā)病特點(diǎn)、臨床癥狀和病理變化的觀察，我們初步判定該場豬群腹瀉病可能是由于流行性腹瀉病毒、傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒或其它腹瀉性病毒所導(dǎo)致。為了對發(fā)病原因進(jìn)行確診，我們將腹瀉仔豬送至湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原診斷。

3 實(shí)驗(yàn)室病原診斷

將發(fā)病仔豬無菌解剖，取小腸內(nèi)容物入無菌試管內(nèi)，加入適合的滅菌PBS溶液后充分混勻，反復(fù)凍融3次后，4℃高速離心（13 000 r/min）5 min，取上清液按照試劑盒說明書提取DNA/RNA，逆轉(zhuǎn)錄后獲得cDNA，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對樣品進(jìn)行病原檢測，發(fā)現(xiàn)為PEDV陽性（圖1），豬傳染性胃腸炎病毒和豬輪狀病毒陰性。

圖1 被檢樣品PEDV-N基因部分序列RT-PCR檢測結(jié)果

為了確定該豬場暴發(fā)的PEDV毒株是否為變異株，我們挑選1個樣品的S1基因高變區(qū)序列進(jìn)行擴(kuò)增與測序（圖2），同時(shí)將獲得的序列進(jìn)行Blast分析。結(jié)果顯示，擴(kuò)增的PEDV毒株S1基因部分片段大小為1 503 bp；Blast分析結(jié)果顯示，該毒株與GenBank收錄的變異株相似性為97.3%~99.8%，與PEDV CV777疫苗株同源性較低，僅為93.6%，說明該豬場流行的PEDV為變異株。

圖2 本次研究PEDV分離株S1基因部分序列RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

4 治療與防控

通過進(jìn)一步對病原進(jìn)行試驗(yàn)技術(shù)診斷，最終可以確診為該豬場仔豬腹瀉是由于PEDV變異株感染所引起，需要采取緊急的處理措施，以降低豬群的死亡率，減少養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失。

4.1 緊急疫苗接種

由于該豬場對豬群免疫接種的腹瀉疫苗為“腹瀉三聯(lián)活疫苗”，其中PEDV疫苗株來源為CV777毒株，而該豬場發(fā)生的是PEDV變異株暴發(fā)，傳統(tǒng)的CV777疫苗株對豬群提供保護(hù)力有限，而豬群若繼發(fā)其它免疫抑制性疾病可導(dǎo)致免疫接種效果差，使豬群雖然接種基于CV777毒株研發(fā)的弱毒疫苗仍然暴發(fā)PED（豬流行性腹瀉）。因此，我們選用武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)的“科瀉寧（豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗）”和“科腹凈（豬傳染性胃腸炎/流行性腹瀉二聯(lián)弱毒疫苗）”對豬群進(jìn)行緊急接種免疫，這兩種疫苗是基于PEDV變異株所進(jìn)行研發(fā)的，對PEDV變異株的防控具有較好的效果。其具體免疫防控措施參考疫苗廠家提供建議進(jìn)行。

4.2 有效的防控措施

對無法挽救的發(fā)病豬群進(jìn)行撲殺并無害化處理，將發(fā)病初期的豬群和健康豬群進(jìn)行隔離，并緊急免疫接種疫苗；對全場進(jìn)行消毒和衛(wèi)生清理，用不同消毒機(jī)制的消毒劑對豬舍地面、器具、墊料和運(yùn)輸車輛等進(jìn)行定期消毒；對豬舍內(nèi)的飼料和飲水等進(jìn)行病原檢測，確定無PEDV污染后方可進(jìn)行飼喂或投飲；在飲水中加入適量的多維或食鹽，提高豬群免疫力，或防止病豬腹瀉而脫水死亡；在豬群的飼料中加入適量的抗生素（如阿莫西林），防止繼發(fā)細(xì)菌性感染等。

該豬場嚴(yán)格實(shí)施以上免疫程序和防控措施后，筆者于10日后回訪，該豬場PED疫情明顯好轉(zhuǎn)，仔豬的發(fā)病率和死亡率均下降。1個月后，豬場負(fù)責(zé)人表示豬場出現(xiàn)腹瀉的案例較少，且腹瀉的原因多是細(xì)菌感染所致，不是PEDV感染所引起。

5 小結(jié)與討論

在生豬養(yǎng)殖過程中，仔豬易出現(xiàn)腹瀉、發(fā)熱等臨床癥狀，若養(yǎng)殖戶未及時(shí)干預(yù)和治療，該病會迅速波及其它健康仔豬群，導(dǎo)致較高的發(fā)病率和死亡率，特別是由細(xì)菌或病毒所引起的疾病。導(dǎo)致仔豬腹瀉的病因較為復(fù)雜，如細(xì)菌、寄生蟲、病毒感染、天氣變化和其它因素，但多為病原感染所導(dǎo)致，特別是病毒性感染，能導(dǎo)致仔豬腹瀉的病毒多為PEDV等冠狀病毒感染。豬流行性腹瀉在我國分布廣泛，且對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重，2010年以來我國學(xué)者從暴發(fā)豬流行性腹瀉的豬場分離出的PEDV多為變異株，其基因組與PEDV CV777疫苗株存在很大的差異，使得部分豬場即使接種免疫了CV777弱毒疫苗仍然暴發(fā)流行性腹瀉，并引起仔豬腹瀉和大批量死亡，給豬場造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[5-6]。因此，為有效防控豬流行性腹瀉的發(fā)生與流行，豬場可選擇基于PEDV變異株研發(fā)的弱毒疫苗或滅活苗對豬群進(jìn)行免疫接種，若發(fā)生腹瀉等臨床癥狀，及時(shí)將病料樣本送至專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行診斷，確定導(dǎo)致該病發(fā)生的原因，然后有針對性地治療和進(jìn)一步預(yù)防等。