谷物中嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的同時測定試驗初報

路峰

摘 要 將超高效液相色譜儀和三重四極桿質譜儀聯用測定小麥中3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮。樣品經超聲提取、SPE凈化后，用液相分離和三重四極桿質譜儀內標法進行定量分析。結果表明，4種毒素在5～150 ng·mL-1的濃度范圍內線性良好;對5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和100 ng·mL-1的混合標準溶液連續3次進樣，3個濃度標準品的準確度和濃度的相對標準偏差分別為95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，儀器精密度良好;同時考察了空白小麥基質加標結果，結果顯示4種毒素10 ng·mL-1的加標回收率為98.9%～112.0%。

關鍵詞 嘔吐毒素;玉米赤霉烯酮;小麥;超高效液相色譜儀;三重四極桿質譜儀

中圖分類號：TS210.7 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.20.071

嘔吐毒素，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON），屬單端孢霉烯族化合物，因可引起豬的嘔吐而得名。當人攝入了被DON污染的食物后，會出現厭食、嘔吐、腹瀉、發燒、站立不穩、反應遲鈍等急性中毒癥狀，嚴重時會損害造血系統造成死亡。歐盟的嘔吐毒素限量標準為小于1.0 mg·kg-1;我國食品安全國家標準GB 2761—2017《食品中真菌毒素限量》中規定，玉米等谷物及其制品中嘔吐毒素限量為1.0 mg·kg-1。玉米赤霉烯酮（ZON）又稱F-2毒素，具有雌激素樣作用，能造成動物急慢性中毒，引起動物繁殖機能異常甚至死亡，我國國家標準《食品中真菌毒素限量》中規定谷物及其制品中該毒素的限量指標為60 μg·kg-1。通過將超高效液相色譜儀和三重四極桿質譜儀聯用，建立了快速、準確測定小麥中3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

實驗使用島津LC-30A超高效液相色譜儀與LCMS-8045三重四極桿質譜儀聯用系統。具體配置有：DGU-20A5在線脫氣機，LC-30AD×2輸液泵，SIL-30AC自動進樣器，CBM-20A系統控制器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統控制器，LCMS-8045三重四極桿質譜儀，Lab Solutions色譜工作站。

1.2 分析條件[1-3]

1）液相色譜條件。LC-30A系統;色譜柱：UHPLC C18 250mm×2.0 mm I.D.×75 mm L;流動相：A為0.01%氨水，B為乙腈;流速：0.3 mL·min-1;進樣體積：10 μL;柱溫：40 ℃;洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為10%（梯度洗脫時間程序：0～2 min，B相60%;2～4 min，B相95%;4.5～5.5 min，B相100%;5.7～8.0 min，B相10%）。

2）質譜條件。離子源接口電壓：-3.5 kV;離子源ESI，負離子掃描;干燥氣：氮氣，15 L·min-1;霧化氣：氮氣，3.0 L·min-1;碰撞氣：氬氣;加熱模塊溫度：400 ℃;脫溶劑管溫度：250 ℃;掃描模式：多反應監測（MRM）;駐留時間：20 ms;延遲時間：3 ms。

1.3 樣品制備

1.3.1 標準溶液配制

取適量單標儲備液，用乙腈配制成1 000 ng·mL-1 的混合標準溶液，用水逐級稀釋成濃度為150 ng·mL-1、100 ng·mL-1、75 ng·mL-1、50 ng·mL-1、25 ng·mL-1、10 ng·mL-1和5 ng·mL-1 的標準工作液。內標物13C-DON、13C-ZON和13C-3-ADON的濃度均為50 ng·mL-1。

1.3.2 樣品前處理方法

準確稱取5.0 g粉碎均勻的樣品至50 mL的離心管中，加入乙腈-水（21∶4，v/v）溶液40 mL，渦旋1 min，超聲60 min，離心5 min（10 000 r·min-1）。移取5 mL上清液至多功能凈化柱（MycosepTM226）的玻璃管內，加入100 μL內標及5 mL乙腈溶液混勻，將多功能凈化柱的填料管插入玻璃管中并緩慢推動填料管，棄去2 mL初濾液，取續濾液4 mL至氮吹瓶中。在40～50 ℃下氮氣吹干，用乙腈-水（1∶9，v/v）溶液定容至1 mL，超聲渦旋30 s，用0.22 μm濾膜過濾至進樣瓶中備用。

1.4 實驗試劑

氨水、乙腈，均為分析純。

1.5 實驗對象

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（3-ADON）、15-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-ADON）、玉米赤霉烯酮（ZON）。

2 結果與分析

2.1 標準樣品的MRM色譜圖

10 ng·mL-1混合標準樣品的MRM色譜圖如圖1所示。

由圖1可知，出峰時間DON最早，ZON最晚;15-DON的峰強度最小，ZON的峰強度最大。可見，使用本分析方法，DON、15-AON、3-AON、ZON四種毒素均能得到很好的分離。

2.2 線性關系

4種毒素的校準曲線參數見表1。

2.3 檢出限和定量限

4種毒素的檢出限和定量限見表2。

2.4 精密度實驗

對5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和100 ng·mL-1的混合標準溶液連續3次進樣，3個濃度標準品的準確度和濃度的相對標準偏差（RSD）分別為95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，儀器精密度良好，見表3。

2.5 基質加標實驗

以空白小麥樣配制加標溶液，加標濃度為10 ng·mL-1，4種毒素DON、15-ADON、3-ADON和ZON加標回收率分別為98.9%、105.9%、104.7%和112.0%。

3 結論與討論

建立一種將超高效液相色譜儀和三重四極桿質譜儀聯用測定小麥中3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的方法。4種毒素在5～150 ng·mL-1濃度范圍內線性良好;10 ng·mL-1基質加標樣品的回收率良好;低、中、高3個濃度標準品的準確度和濃度的相對標準偏差分別為95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，靈敏度高，可以滿足對這4種毒素的分析要求。

參考文獻：

[1] Bhat R， Rai RV， Karim AA. Mycotoxins in food and feed： present status and future concerns[J].Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety，2010，9（1）：57-81.

[2] 蘇永騰，饒輝，符金華，等.液相色譜-串聯質譜法測定植物飼料原料中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A和T-2毒素[J].中國飼料添加劑，2014（10）：16-24.

[3] 楊萬穎，鄭彥婕，李碧芳，等.液相色譜串聯質譜法同時測定小麥粉中10種真菌毒素[J].廣東化工，2008，35（9）：123-128.

（責任編輯：趙中正）