1型糖尿病大鼠外周5-HT水平下降與結腸動力障礙的相關性研究

成穎瑩， 王 娟， 戎偉芳， 張國花

(上海交通大學基礎醫學院解剖學與生理學系，上海 200025)

糖尿病是一種以高血糖為主要特征的代謝性疾病，1型糖尿病患者胃腸道并發癥比較常見，如胃輕癱、腸道動力異常等[1]。由腸嗜鉻細胞合成并分泌的5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)參與調節腸道運動、腸神經發生、上皮細胞的分泌及血管的舒張，同時參與黏膜的生長維持與機體的炎癥反應[2]。有研究表明5-HT參與糖尿病血糖和胰島素分泌的調節[3]，5-HT4受體激動劑可以改善糖尿病小鼠胃輕癱[4]。本研究旨在研究結腸及血液中5-HT在1型糖尿病發展過程中的變化特點及外源性給予5-HT對糖尿病大鼠血糖和結腸運輸功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SD雄性大鼠46只，體質量200～220g,2月齡，由上海交通大學醫學院實驗動物中心提供，自由進食飲水，恒溫25℃。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 主要藥品與試劑 鏈脲佐菌素(streptozo-tocin， STZ)、5-HT、洋紅(carmine)購自Sigma公司；羊抗5-HT抗體購自Neuromics公司；Alexa fluro 568標記的驢抗羊二抗購自Invitrogen公司；BCA蛋白測定試劑盒、增強型顯影液購自Thermo Scientific公司；預染蛋白marker、辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗兔IgG、HRP標記的羊抗小鼠IgG購自Bio-rad公司；兔抗色氨酸羥化酶(TPH1)抗體購自Millipore公司；鼠抗β-actin購自Bioworld公司。

1.2.2 主要儀器 羅康全活力型血糖儀購自德國羅氏診斷有限公司；冰凍切片機、熒光倒置顯微鏡購自德國Leica公司；Ultimate 3000 UHPLC高效液相色譜系統購自Dionex公司；冷凍離心機、TSQ Vantage三重四級桿質譜儀系統購自Thermo Scientific公司；顯影儀ImageQuant LAS 4000購自GE公司。

1.3 方法

1.3.1 大鼠1型糖尿病模型的建立 采用腹腔注射STZ建立大鼠1型糖尿病模型。將STZ溶解于0.01mol/L冰冷的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH=4.0)，腹腔注射給藥(50mg/kg)，對照組腹腔注射等體積的緩沖溶液。……