血清AFP、GP73和AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)在慢性乙型肝炎診斷中的價(jià)值

王利公，趙 珊，陶 慧，紀(jì)瑞靜

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710061；2.西安交通大學(xué)校醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710061；3.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院彬州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西彬州 713500)

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染所致的慢性疾病，該病具有長(zhǎng)期性、反復(fù)性的特點(diǎn)[1]。WHO一項(xiàng)調(diào)查表明，全球感染HBV病毒高達(dá)20億人，其中慢性HBV感染達(dá)2.3億人，是全球范圍內(nèi)發(fā)病率最高的傳染性疾病之一[2]。中國(guó)是HBV感染高發(fā)地區(qū)，據(jù)統(tǒng)計(jì)中國(guó)有超過9 000萬(wàn)以上慢性HBV感染者，約占人口總數(shù)7.5%～10.0%，其中慢性乙型肝炎高達(dá)2 000萬(wàn)人[3]。慢性乙型肝炎治療至今未能達(dá)到徹底或功能性治愈，而病情遷延不愈是導(dǎo)致肝硬化和肝細(xì)胞癌的重要原因。流行病學(xué)調(diào)查統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)治療的慢性乙型肝炎患者進(jìn)展為肝硬化的概率為7%～21%，從肝硬化進(jìn)展為肝細(xì)胞癌的概率達(dá)2%～4%[4]。因此，早期診斷慢性乙型肝炎感染顯得尤為重要。肝臟組織病理學(xué)活檢是診斷慢性乙型肝炎的金標(biāo)準(zhǔn)，但組織蛋白檢測(cè)需要獲取病理樣本，操作具有創(chuàng)傷性且患者不易配合，限制了臨床應(yīng)用。相對(duì)而言，血清指標(biāo)具有方便、客觀、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，在疾病篩查、病情監(jiān)測(cè)等方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。肝功能指標(biāo)檢測(cè)對(duì)于肝臟疾病進(jìn)展具有一定鑒別意義，甲胎蛋白(AFP)被認(rèn)為是有效判斷慢性乙型肝炎的病情嚴(yán)重程度的血清學(xué)指標(biāo)。高爾基體跨膜糖蛋白73(GP73)和甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)有望成為最具潛力診斷和預(yù)后評(píng)估的新的標(biāo)志物。本研究檢測(cè)了血清AFP、GP73、AFP-L3水平，并進(jìn)一步分析了AFP、GP73、AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性乙型肝炎的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究經(jīng)西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，在2016年3月至2019年2月西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院各類肝病患者182例中選取經(jīng)病理組織學(xué)或影像學(xué)證實(shí)為慢性乙型肝炎的患者100例作為慢性乙肝組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)入選患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2015版)[5]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)血清乙型肝炎E抗原(HBeAg)呈陽(yáng)性持續(xù)時(shí)間≥6個(gè)月；(3)近1年內(nèi)無(wú)抗肝纖維化、抗HBV藥物治療；(4)年齡≥18歲；(5)入選患者同意本次研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有甲型、丙型等病毒性重疊感染；(2)伴有糖尿病、甲亢等代謝類疾病；(3)嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)、心血管、免疫系統(tǒng)等疾病；(4)合并其他惡性腫瘤。另選取同期在醫(yī)院體檢中心健康體檢者110例作為對(duì)照組，經(jīng)檢測(cè)心、肝、腎、肺重要臟器功能無(wú)異常，各類肝炎病毒標(biāo)志物呈陰性；排除全身或局部感染、心血管疾病、惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾病等。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集 收集2組納入研究者的臨床資料，包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙、飲酒史等。

1.2.2血清學(xué)指標(biāo) 慢性乙肝組患者入院后禁食水12 h，采集肘靜脈血5 mL，對(duì)照組入組后禁食、禁水10 h以上，采集空腹肘靜脈血5 mL；采集血液標(biāo)本，采用臺(tái)式離心機(jī)(購(gòu)自中國(guó)湘儀離心機(jī)儀器有限公司，型號(hào)L400)以3 000 r/min高速離心10 min；靜析后取上層血清，標(biāo)本劑量1.5 mL，分裝于小型離心管中，標(biāo)記組別、時(shí)間，置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存，統(tǒng)一檢測(cè)。AFP采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法，電化學(xué)發(fā)光儀和試劑盒購(gòu)自中國(guó)上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；GP73采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)，酶標(biāo)儀購(gòu)自瑞士Tecon公司，型號(hào)M200，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為450 nm，試劑盒購(gòu)自中國(guó)上海茁彩生物科技有限公司；AFP-L3采用親和吸附離心管法檢測(cè)，生化儀購(gòu)自美國(guó)雅培公司，型號(hào)C8000，試劑盒購(gòu)自中國(guó)北京熱景生物技術(shù)有限公司。分離洗脫液AFP-L3，并計(jì)算AFP-L3占AFP比例。所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.2.3陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)[6]參考值：AFP>9.6 ng/mL，GP73>106.5 ng/mL；AFP-L3>9.2%。

2 結(jié) 果

2.12組間臨床資料和血清指標(biāo)的比較 2組間性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙、飲酒史等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；慢性乙肝組血清AFP、GP73和AFP-L3水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2慢性乙型肝炎綜合征危險(xiǎn)因素分析 Logistic多因素回歸分析顯示，AFP、GP73和AFP-L3是慢性乙型肝炎的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)。見表2。

表1 2組間一般資料和血清指標(biāo)的比較

表2 Logistic回歸分析慢性乙型肝炎的危險(xiǎn)因素

2.3血清AFP、GP73、AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性乙型肝炎的診斷效能 ROC曲線分析顯示，AFP診斷慢性乙型肝炎的AUC為0.863，GP73為0.832，AFP-L3為0.730，AFP、GP73、AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.953，明顯高于AFP、GP73、AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)(Z=2.843、3.145、7.099，P<0.05)。見表3、圖1、2。

圖1 血清AFP、GP73、AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)用于慢性乙型肝炎診斷的ROC曲線

表3 血清AFP、GP73、AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性乙型肝炎的診斷效能

圖2 血清AFP、GP73、AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)用于慢性乙型肝炎診斷的ROC曲線

3 討 論

慢性乙型肝炎是由HBV進(jìn)入機(jī)體內(nèi)通過血液循環(huán)快速傳播至肝細(xì)胞及其他組織，引起全身炎性反應(yīng)的一種慢性疾病。中國(guó)以醫(yī)源性和母嬰傳播為主，而嬰幼兒時(shí)期的HBV感染大多導(dǎo)致慢性乙型肝炎并一直伴隨終生[7]。乙型肝炎是我國(guó)目前慢性肝病的主要病種之一，該病發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今尚未完全闡明。研究發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗原可激活機(jī)體免疫應(yīng)答，引發(fā)適應(yīng)性和固有免疫應(yīng)答，機(jī)體免疫在消除乙型肝炎病毒過程中，會(huì)導(dǎo)致肝臟慢性損傷并誘發(fā)機(jī)體炎性反應(yīng)；進(jìn)一步合成糖蛋白、膠原、蛋白多糖等細(xì)胞外基質(zhì)成分，加重肝臟纖維化，造成肝硬化，使病情進(jìn)一步惡化而進(jìn)展為肝癌[8]。慢性乙型肝炎在發(fā)病初期臨床癥狀不典型，病情發(fā)展較為隱匿，往往出現(xiàn)腹水、消化道出血時(shí)才被發(fā)現(xiàn)，貽誤最佳治療時(shí)機(jī)。因此，對(duì)慢性乙型肝炎的早期診斷，及時(shí)采取治療措施，可提高患者生存質(zhì)量。

AFP是在胚胎期合成的功能性蛋白，由卵黃囊和肝細(xì)胞產(chǎn)生，其相對(duì)分子質(zhì)量為70×103，半衰期5 d，主要來源于胚胎的肝細(xì)胞。正常成年人AFP水平較低，將近70%肝癌患者AFP水平出現(xiàn)異常增高。當(dāng)肝細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂產(chǎn)生新的肝細(xì)胞時(shí)，AFP水平會(huì)再次增高，因此臨床上常作為原發(fā)性肝癌血清標(biāo)志物，用于原發(fā)性肝癌的早期診斷，指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷。研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生活動(dòng)性肝炎后肝細(xì)胞會(huì)進(jìn)行修復(fù)，AFP會(huì)出現(xiàn)不同程度升高，肝細(xì)胞再生活性明顯增強(qiáng)，表明慢性乙型肝炎患者AFP持續(xù)升高的原因與乙肝病毒復(fù)制存在某種內(nèi)在聯(lián)系[9-10]。有學(xué)者亦證實(shí)大量的肝炎患者AFP呈高水平表達(dá)，這與本研究結(jié)果一致[11]。有報(bào)道稱，在非肝癌性肝病如急慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化的患者血清中AFP水平增高[12]。研究表明不同病毒性肝炎患者AFP陽(yáng)性表達(dá)率從急性輕度、慢性中度、慢性重度依次升高，隨著炎性反應(yīng)增強(qiáng)，AFP水平亦隨之升高，表明血清AFP水平可反映炎性反應(yīng)程度[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，AFP診斷慢性乙肝的AUC為0.863，提示AFP不僅對(duì)腫瘤疾病診斷具有重要的臨床價(jià)值，對(duì)肝臟發(fā)生炎性反應(yīng)病變亦有重要的臨床參考價(jià)值，早期檢測(cè)AFP水平可預(yù)測(cè)患者疾病進(jìn)展情況。

AFP-L3是AFP糖鏈結(jié)構(gòu)的異質(zhì)體，與肝癌細(xì)胞增生呈正相關(guān)，被廣泛用作肝癌診斷的標(biāo)志物之一。卓傳尚等[14]研究發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清AFP-L3水平顯著升高，表明AFP-L3能夠?yàn)樵缙谠\斷提供參考，對(duì)預(yù)防病情進(jìn)展及癌變具有一定臨床意義。劉彥明等[15]研究亦證實(shí)慢性乙型肝炎患者肝組織存在HBV-DNA的大量復(fù)制，隨著HBV-DNA載量不斷增加，AFP-L3水平明顯升高，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等重要肝臟細(xì)胞器的損傷。本研究還發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者AFP-L3水平明顯高于健康人群，提示AFP-L3可作為監(jiān)測(cè)慢性乙型肝炎肝細(xì)胞損傷的指標(biāo)。研究證實(shí)，隨著Chid-Pugh分級(jí)增加，血清AFP-L3呈上升趨勢(shì)，進(jìn)一步說明AFP-L3可作為評(píng)估肝功能的重要指標(biāo)[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，在診斷慢性乙型肝炎中AFP-L3的AUC為0.730，提示可作為診斷慢性乙型肝炎的指標(biāo)之一，但參考價(jià)值有限。

GP73為高爾基Ⅱ型跨膜蛋白，廣泛存在于高爾基體中，一般在肝臟組織中少量表達(dá)或不表達(dá)。國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，病毒或非病毒引起的肝病患者血清GP73水平出現(xiàn)明顯升高[17]。樂萍等[18]同樣發(fā)現(xiàn)病毒性或自身免疫性肝炎和進(jìn)行性肝硬化患者血清GP73呈高水平，推測(cè)GP73在慢性肝病疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果亦證實(shí)，慢性乙型肝炎患者血清GP73呈高水平表達(dá)，這與HBV感染程度有關(guān)，提示GP73可作為診斷慢性乙型肝炎的血清標(biāo)志物之一。本研究進(jìn)一步分析了三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值，結(jié)果顯示AUC為0.953，靈敏度和特異度為89.0%和81.8%，明顯高于AFP、GP73、AFP-L3單獨(dú)檢測(cè)，提示三者聯(lián)合可以提高慢性乙型肝炎的診斷效能。血清AFP、GP73、AFP-L3聯(lián)合檢測(cè)可以反映HBV-DNA復(fù)制、肝細(xì)胞損傷等病情進(jìn)展。三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)靈敏度和特異度均大于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)，能夠滿足慢性乙型肝炎在HBV-DNA復(fù)制、肝細(xì)胞損傷等病情進(jìn)展的早期診斷。

4 結(jié) 論

綜上所述，通過聯(lián)合檢測(cè)血清AFP、GP73、AFP-L3，能夠提高慢性乙型肝炎診斷效能，對(duì)疾病的診斷和治療具有重要臨床價(jià)值。