抗體聯合親和力檢測診斷巨細胞病毒宮內感染的臨床研究

劉 力 羅茜茜 張敬蕊 普曉瑜

(石家莊市第四醫院檢驗科，石家莊050000)

人巨細胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是胎兒宮內感染最常見的病毒，一般只引起亞臨床感染和潛伏感染。當孕婦患有巨細胞活動感染時，病毒可通過胎盤進入胎兒體內引起先天性感染。孕婦原發感染引起宮內感染的幾率為24%～75%，非原發感染引起宮內感染的幾率為0.15%～2.0%[1]。發生宮內感染的胎兒10%～15%出生有癥狀，多數可出現發育遲緩、 肝脾腫大、小頭畸形、脈絡膜視網膜炎、血小板減少、貧血等癥狀，特別引起嬰兒的巨細胞包涵體病，患兒可多個系統多個器官受損。85%～90%出生無癥狀，但約10%～15%可能發生遲發性神經耳聾，精神運動疾病等[2,3]。一般選擇HCMV特異性IgM和IgG抗體聯合應用來診斷是否感染及感染類型。本實驗應用新型HCMV-IgG親和力ELISA解離法檢測試劑盒，開展HCMV-IgG親和力檢測，必將為感染診斷提供更加有力的幫助。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1一般資料 選擇2016年1月～2017年11月在我院行巨細胞病毒感染篩查，結果為血清IgM抗體和IgG抗體雙陽性的孕婦130例，無典型的感染癥狀，平均年齡(26.7±6.5)歲，其中8～16周孕婦123例，20周后的孕婦7例。入組孕婦空腹采集促凝血4 ml，離心分離血清備用。本實驗經石家莊第四醫院醫學倫理學委員會批準，入組患者知情同意。

1.1.2試劑和儀器 人巨細胞病毒IgM和IgG檢測試劑及IgG親和力檢測試劑盒及儀器均來自于鄭州安圖生物公司。巨細胞核酸檢測采用美國生產的ABI7300型實時熒光定量PCR儀，試劑由廣州達安提供。

1.2方法

1.2.1人巨細胞病毒IgM和IgG檢測 采用化學發光法，廠家配套高低值質控品同步檢測。灰區判斷值分別為IgM 8～12 AU/ml；IgG 10～14 AU/ml。大于此范圍即為陽性。

1.2.2巨細胞病毒IgG親和力檢測方法 包被HCMV抗原的96孔酶標板，分別加入低親和力質控品、高親和力質控品、稀釋(1∶100)后待測樣品100 μl/孔，各2孔，37℃溫浴30 min，洗板6次后，一孔加入解離緩沖液，一孔加入對照緩沖液各100 μl，37℃溫浴10 min，同上洗板后加入酶結合物100 μl，37℃溫浴30 min，洗板后加入底物液和顯色劑各50 μl，37℃避光10 min，加入終止液，混勻，檢測吸光值，兩孔比值為親和力指數(Avidity index,AI)。

1.2.3巨細胞病毒核酸檢測 PCR方法檢測130位孕婦尿中HCMV-DNA含量，并對HCMV-DNA拷貝大于閾值的孕婦，隨訪產后胎兒狀況，分別留取胎兒尿液、血液各一份，血液進行人巨細胞的IgM檢測，尿液進行核酸定量檢測。檢測閾值為2 000拷貝/ml。

2 結果

102例(孕8～16周)血清樣本親和力指數>50%，判為高親和力。HCMV-DNA均小于2 000拷貝/ml。胎兒均無不良結局。對低親和力和灰區親和力孕婦隨訪，以了解新生兒感染情況。實驗數據顯示，11例(孕8～16周7例，孕20周以上的4例)血清樣本為親和力指數在45%～50%，判為灰區，其中1例HCMV-DNA(孕28周)陽性，隨訪檢測胎兒出生后尿液HCMV-DNA大于2 000拷貝/ml，血清巨細胞病毒IgM抗體陽性，診斷為先天性HCMV感染。17例(孕8～16周14例，孕20周以上的3例)

表1 入組孕婦巨細胞病毒IgG親和力指數與不良結局

Tab.1 Cytomegalovirus IgG affinity index and adverse outcome in pregnant women group

Groupsn(%)DNA positiverateAdverse outcomesrateA group(AI>50%)102(78.46%)0(0)0(0)B group(45%≤AI≤50%)11(8.46%)1(0.77%)1(0.77%)C group(AI<45%)17(13.07%)7(5.38%)2(1.54%)

血清樣本親和力指數<45%，判為低親和力，HCMV-DNA陽性7例。其中，胎兒出生后尿液HCMV-DNA大于2 000拷貝/ml 1例，血清巨細胞病毒IgM抗體陽性，診斷為先天性HCMV感染1例，流產1例。表1為AI結果與百分比。

3 討論

IgM抗體被認為是近期或原發感染的指標。但是IgM抗體持續6～9個月陽性情況時有發生,實驗室方法學也會有非特異性假陽性問題存在，臨床醫生很難推斷是否真正感染以及感染時期。雖然可檢測尿液中人巨細胞病毒核酸，但當前核酸陰性并不能排除前期感染的可能。

抗體親和力是抗體的結合部位與相應抗原決定簇之間的非共價引力與斥力之和。親和力檢測可用于鑒別原發(近期)感染和復發(既往)感染。全軍計劃生育優生優育技術研究所發布的《妊娠期TORCH篩查指南》中建議HCMV-IgM和HCMV-IgG親和力聯合檢測，可以確定妊娠婦女的感染診斷[4]。在妊娠16 周前檢測抗體親和力為高親和力指數則是既往感染的良好指標[4]。人接觸CMV抗原后，產生抗體親和力隨時間延長而增加，IgG抗體親和力低說明為近期原發性CMV感染，抗體親和力高說明感染發生在較長時間以前。感染后3個月內的血清樣本HCMV-IgG親和力指數一般為(21±13)%，既往感染的親和力指數一般為(78±10)%[5]。有報道顯示在妊娠16～18周之前檢測HCMV-IgG親和力指數，診斷胎兒感染的敏感度為100%，20周以后則迅速降為62.5%，因此 ，妊娠12～16周檢測出高IgG抗體親和力指數是診斷既往感染較好的指標[6]，對后續開展產前診斷更有參考意義。

在本文結果中A組標本均為孕8～16周的孕婦，AI>50%，提示孕前既往感染，胎兒無不良結局。在C組標本中AI<45%提示近期感染，胎兒不良結局率較高達到1.54%，說明病毒感染通過胎盤進入胎兒體內的風險較高。而在B組標本中有1例胎兒診斷為先天性CMV感染，標本為產婦孕28周時采集，不能排除是否原發感染，因此在孕早期進行TOUCH的篩查是非常重要的。

IgG親和力檢測判斷感染類型雖早有報道，但是由于方法學差異，試劑優劣，判斷標準也有很大差別。之前國內多采用尿素變性的方法檢測親和力，方法繁瑣，特異性差。本文采用的ELISA方法檢測IgG親和力實驗更便捷，結果更可靠。

綜上所述，巨細胞抗體IgM檢測方法多采用酶免法，影響實驗結果的因素較多，如RF干擾、交叉反應、多克隆刺激等。而對于親和力的檢測，明確判斷高親和力和低親和力的同時，可以有灰區的情況存在。建議2周后再復查[4]，動態監測血清IgM和IgG抗體的變化，并結合孕婦孕周、臨床表現、流行病學病史及產前診斷技術綜合評估感染風險，多指標多方法綜合應用，才能更好地判斷孕婦感染時期。