保健食品逢泰膠囊中大黃素和大黃酚的含量測定

□ 湯麗昌 北海市食品藥品檢驗所

逢泰膠囊是以澤瀉、生何首烏、荷葉、絞股藍、紅曲、糊精、硬脂酸鎂為主要成分加工而成的膠囊劑，其中，澤瀉、何首烏是輔助降血脂的主要功效來源，使該膠囊作為保健食品具有降血脂的輔助功效。目前有文獻顯示，澤瀉含有大黃素，何首烏含有大黃素和大黃酚，而大黃素、大黃酚的含量對于臨床用藥的安全性和活性有較大的指導意義[1-3]。2015年版《中國藥典》將何首烏中的大黃素作為質量控制成分[4]，然而保健食品的大多數產品標準并無其含量測定項。本研究采用高效液相色譜法對逢泰膠囊中的大黃素和大黃酚進行含量測定，以期為逢泰膠囊產品質量標準的制定提供依據。

1 材料與試劑

1.1 儀器

LC-2010A HT型高效液相色譜儀（島津）；S1-T256渦旋混合器；CPX5800H-C超聲波清洗機（美國必能信上海科導儀器有限公司）；XA205DU萬分之一電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

大黃素對照品（批號：110756-200110），中國藥品生物制品檢定所提供；大黃酚對照品（批號：110796-201319），中國食品藥品檢定研究所提供；逢泰膠囊，武漢市元大生物科技有限公司提供；甲醇為色譜純（Thermo），磷酸為色譜純（Tedia），超純水（Milipore制備）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Shim-pack VP-ODS色譜柱（4.6×250mm，5μm），以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。流動相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（80∶20），流速為1.0mL/min，紫外檢測波長為254nm。柱溫：30℃，進樣量10μL，理論板數按大黃素計算不低于2000，大黃素和大黃酚的分離度＞1.5。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備

精準稱取9.14mg大黃素對照品，置于50mL棕色容量瓶中，加入少量甲醇超聲溶解后繼續用甲醇定容至刻度。搖勻，即得每1mL含有大黃素182.8μg的標準溶液，備用。精準稱取10.02mg大黃酚對照品，置于250mL棕色容量瓶中，加入少量甲醇超聲溶解后繼續用甲醇定容至刻度。搖勻，即得每1mL含有大黃素40.08μg的標準溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備

取批次為20180401的逢泰膠囊10粒，取其內容物混合，精密稱取0.2g置于10mL棕色容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲提取（300W，250KHZ）處理30min，靜置冷卻，用色譜純甲醇定容至容量瓶的刻度，搖勻后用0.22μm微孔濾膜過濾，取濾液即得標準的供試品溶液，備用。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

取不含大黃素、大黃酚的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。

表1 大黃素含量測定結果

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗

取制備好的對照品溶液、陰性樣品溶液、樣品溶液分別注入液相色譜儀，記錄。結果表明，陰性溶液在大黃素、大黃酚保留時間處并沒有出現相應峰，對照品溶液和樣品溶液理論板數均大于2000，大黃素和大黃酚的分離度為7.6。

2.3.2 線性關系考察試驗

吸取對照品溶液（大黃素質量濃度為182.8μg/mL，大黃酚質量濃度為100.2μg/mL）1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mL，分別置于100mL棕色容量瓶中，然后加入甲醇并稀釋至刻度，經0.22μm微孔濾膜過濾，按“2.1”步驟選定的色譜條件注入對照品待測液，記錄峰面積。以峰面積Y與對照品待測液濃度X進行線性回歸，得到回歸方程Y=19904X-1776.5（r=0.9999），大黃素在1.828～36.56μg/mL線性關系良好；Y=17692X-577.7（r=0.9999），大黃酚在0.4008～8.016μg/mL線性關系良好。

2.3.3 精密度試驗

精密吸取“2.3.2”步驟下所得大黃素和大黃酚對照品混合液線性中第3個濃度5μL，重復進樣6次，分別測其峰面積，大黃素的RSD為0.93%，大黃酚的RSD為1.42%。結果表明，儀器和分析方法的可重復性均良好，即精密度較好。

2.3.4 穩定性試驗

取同一批次供試品（批號：20180401）按“2.2.2”步驟下的制樣方法制備1份供試品溶液，按“2.1”選定的色譜條件分別在供試品溶液制備后0、4、8、12、16、20、24h進樣5μL，測定大黃素、大黃酚峰面積，RSD分別為1.46%、1.24%，該結果表明試驗溶液在24h內穩定。

2.3.5 重復性試驗

精密稱取6份批號為20180401的樣品，按“2.2.2”步驟的制樣方法制備6份供試品溶液，按“2.1”選定的色譜條件下測定大黃素、大黃酚峰面積。結果顯示，大黃素和大黃酚峰面積分別為RSD=0.97%、RSD=1.69%，表明該分析方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗

精密稱取批號為20180401的樣品6份，分別精密加入0.5mL大黃素、大黃酚對照品溶液。按“2.2.2”步驟的制樣方法制備，按“2.1”選定的色譜條件下，測定大黃素、大黃酚峰面積，按照樣品含量方法操作并計算，大黃素回收率為101.1%，RSD為1.21；大黃酚回收率為96.7%，RSD為1.53。

2.4 樣品測定

精密稱取供試品3批，按“2.2.2”步驟的制樣方法制備供試品溶液，然后按“2.1”選定的色譜條件，注入高效液相色譜儀進行測定，將所測得的大黃素和大黃酚峰面積代入標準曲線中，各樣品兩組分含量見表1。

3 結論

本研究與文獻報道方法對比發現[4-5]，樣品用加熱回流和超聲提取大黃素、大黃酚的提取完全程度基本一致。本研究采用的方法簡單便捷、精密度、重現性、穩定性良好，試驗操作簡單且回收率高，可為保健食品逢泰膠囊質量控制提供依據。