貓須草的組織培養及添加物研究

摘要：采用組織培養技術使用四種培養基和兩種添加物對貓須草進行組培試驗。MS培養基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭、N6培養基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、N6培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭。試驗表明：使用上述四種培養基對貓須草進行組織培養，都能夠形成愈傷組織，并最終形成組培苗，但是MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基表現最好，使用MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基是試驗的四種培養基中最適合貓須草組培的培養基質，在以后的組培苗繁育試驗中可以根據該培養基進行激素方面的細微調節來達到最優目的。在培養基中加入香蕉和活性炭成分，目的是對比在貓須草培養基中加入這兩種添加物后各個時期的表現。結果表明，加入活性炭的培養基要優于加香蕉的培養基。

關鍵詞：貓須草;組織培養;添加物;試驗

基金項目：貓須草在永州市的抗寒品種選育及高產關鍵技術研究 （永科發〔2017〕41號）

中圖分類號：S567.23 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼： ?A ? ? ? ? ? ? ?DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2019.20.033

1 材料與方法

1.1 試驗儀器與材料

貓須草幼嫩莖尖切2～3cm小段、新潔爾滅、棉球、超凈工作臺、鑷子、酒精燈、MS培養基+6-BA 1.0mg/L+香蕉培養基、MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基、N6培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基、N6培養基+6-BA 1.0mg/L+香蕉培養基、解剖刀、無菌培養室。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的選取及清洗 取貓須草莖尖5cm左右，放置玻璃瓶用清水沖洗10min，然后，用新潔爾滅洗滌，用清水沖洗20min。洗凈后迅速放入接種室，用75%酒精或者0.1%氯化汞清洗10s，就可以進行接種。

1.2.2 培養基的配制 ?培養基同時采用四種培養基：MS培養基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭、N6培養基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、N6培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭。在MS和N6培養基的基礎上每升培養基中加入1.0mg6-BA、少量的香蕉和活性炭。以上培養基中每升都加入蔗糖20g/L、瓊脂7.5g/L，配制完成后用0.1mol/LNaOH將pH值調至5.6～5.8。

香蕉泥的配制：將1kg香蕉切成片，加少量水煮沸約40min將香蕉煮爛，最后將固體物質通過紗網過濾，剩下的汁才能加入培養基中。不同培養基香蕉含量不同，在這里試驗中使用200g/L。

活性炭培養基，在每升培養基中加入500mg活性炭。

1.2.3 接種及組培期間觀察 在超凈工作臺接種時，切除滅菌后氧化的黑色部位，留下莖尖和較嫩的腋芽約1cm左右，每瓶放置4～6個芽點。四種培養基，每種接20瓶。接種完，放入培養室中溫度控制在21℃～23.5℃，光照度為2000Lx，光照時間為12h，進行分化處理，并進行觀察。最快的MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基7d切口處開始膨大，有愈傷組織逐漸產生。10d后產生愈傷組織，12d開始萌動，發出新芽，形成叢芽。24d就可以進行轉接，進行壯苗處理。這時由于開始產生出葉片，培養室中溫度應控制在23±1℃，光照度2200Lx，光照時間10h。將叢芽從增殖培養基取出，分切成3個新芽的小塊，分別接種至壯苗培養基中，每瓶12叢。轉接后7～10d后，叢芽會長成1～2cm的瓶苗。15～20d長至3cm時，可以對瓶苗進行繼代培養和生根培養。在這里試驗選擇采用生長較強壯的MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭瓶苗進行繼代培養，其余瓶苗進行生根培養，進行生根培養基轉接。轉接6d后開始發現有白色突起，10d后看見有明顯的白色粗根形成。

2 結果與分析

由表1可知：在貓須草組織培養試驗中，從分化到生根期。這四種培養基不管是分化、增殖、壯苗、生根，表現最好的是MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基。由于試驗后期需要，最后將MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基培養的組培苗轉入繼代培養。確定MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基是試驗的四種培養基中最適合貓須草組培的培養基質，在以后的組培苗繁育試驗中可以根據該培養基進行激素方面的細微調節來達到最優目的。

表1 貓須草組織培養對比試驗

后期在繼代培養中，MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基所培養的貓須草組培苗比較強壯，感染、褐化、白化率都較低，非常適合做貓須草的培養基質。

由表2可知：在不同添加劑對貓須草組織培養的影響試驗中，試驗選擇香蕉和活性炭做貓須草培養基的培養基添加劑。這兩種添加劑在組織培養生產中會經常使用。在試驗過程中，貓須草是草本植物，本身就容易產生愈傷組織和分化。不需要特別的激素和營養來促進它的愈傷組織和分化。在對比試驗中，用活性炭做添加劑比香蕉要好的多。

表2 ?不同添加劑對貓須草組織培養的影響

3 結論

由表五可知，使用上述四種培養基對貓須草進行組織培養，都能夠形成愈傷組織并最終形成組培苗，但是MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基表現最好，使用MS培養基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養基是試驗的四種培養基中最適合貓須草組培的培養基質，在以后的組培苗繁育試驗中可以根據該培養基進行激素方面的細微調節來達到最優目的。

在培養基中加入香蕉和活性炭成分，目的是對比一下在貓須草培養基中加入這兩種物質在各個時期的表現。結果表明，加入活性炭的培養基要優于加香蕉的培養基。

參考文獻

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作者簡介：李綱，碩士，講師，研究方向：栽培技術。