HPLC對(duì)比分析福鼎大白茶綠茶、紅茶中的茶多酚兒茶素類物質(zhì)

楊秀群 劉永祺 劉燕 羅菊

摘? ?要? ?建立了一種檢測(cè)茶葉中茶多酚兒茶素含量的方法。對(duì)比研究超聲提取和冷凝回流提取方法處理樣品，結(jié)果表明，提取溫度50 ℃，時(shí)間70 min，樣品與溶劑料液比為1∶20時(shí)效果最佳。經(jīng)孔徑0.22 μm有機(jī)相濾頭過(guò)濾，高效液相色譜儀檢測(cè)，結(jié)果顯示目標(biāo)物在20 min內(nèi)出峰，在濃度20～1 600 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.998 7以上，精密度RSD（n=5）在1.04%～1.28%，日內(nèi)重現(xiàn)性好，回收率在81.7%～83.6%。應(yīng)用該方法檢測(cè)福鼎大白茶綠茶、紅茶中的茶多酚，發(fā)現(xiàn)兩種加工工藝處理的福鼎大白茶兒茶素的含量有差異，該研究結(jié)果可以用于指導(dǎo)消費(fèi)者依據(jù)自身需要選取茶葉，同時(shí)為茶葉功能食品的研發(fā)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞? ?高效液相色譜法;福鼎大白茶;綠茶;紅茶;茶多酚兒茶素

中圖分類號(hào)：S132? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.28.006

我國(guó)茶葉分類方式多樣，最常見的是以加工工藝劃分，根據(jù)是否發(fā)酵及發(fā)酵的程度通常把茶葉分為紅茶、黃茶、黑茶、白茶、青茶、綠茶。其中，綠茶又稱為不發(fā)酵茶，由新葉經(jīng)殺青、揉捻和干燥等工藝制成，而紅茶經(jīng)揉捻、發(fā)酵、干燥制成[1]。發(fā)酵能使茶葉的內(nèi)含成分發(fā)生生物化學(xué)變化，加工工藝不同將影響茶葉的組成成分，特別是茶多酚[2]。

茶多酚（Tea-poly0phenols，TP）是茶葉中最主要的功能成分之一，占茶葉干重的10%～30%[3]。茶多酚又叫茶鞣質(zhì)、茶單寧，是茶葉中一類多羥基酚類化合物的總稱，主要包括兒茶素類、黃酮、花青素類和酚酸類[4]。其中兒茶素類化合物為茶多酚的主體成分，占茶多酚總量的65%～90%。兒茶素可分為表沒(méi)食子兒茶素（Epigallocatechin，EGC）、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epicatechingallate，ECG）、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epigallocatechingallate，EGCG）、兒茶素（C）、表兒茶素（Epicatechin，EC）[5]等。兒茶素是茶葉中最主要的活性物質(zhì)，具有強(qiáng)于VC、VE的抗氧化性[6]，有抗腫瘤、抗誘變、預(yù)防齲齒等諸多藥效[7]，尤其EGCG具有抗病毒、抗腫瘤[8]、抗突變[9]、降壓、抗白血病等功效[10]。兒茶素已成為一類重要的食品添加劑和藥物。兒茶素是茶樹次生物質(zhì)代謝的重要成分，也是茶葉保健功能的主要物質(zhì)，決定茶葉色、香、味品質(zhì)的重要因素[11]。兒茶素的成分受不同品種茶樹、栽培環(huán)境和加工工藝的影響[12]，研究?jī)翰杷乜蔀樵u(píng)價(jià)茶葉及其制品的品質(zhì)及藥用價(jià)值[13-14]，以及用于解讀茶樹多酚代謝的生理調(diào)控機(jī)制提供一定的依據(jù)[15]。

茶多酚的檢測(cè)方法分為總量檢測(cè)和組分含量檢測(cè)，總量檢測(cè)有分光光度法、電化學(xué)法、近紅外光譜法等;組分檢測(cè)有高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、原子吸收法、氣相色譜法等。其中，液相色譜法因分析簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確而被廣泛應(yīng)用[16-20]。

本文采用超聲和冷凝回流的方法提取茶多酚，高效液相色譜法測(cè)定福鼎大白茶綠茶、紅茶中4種兒茶素的含量，通過(guò)對(duì)比研究同種茶葉兩種加工工藝即綠茶、紅茶處理后4種兒茶素的含量，評(píng)價(jià)兩種加工工藝對(duì)兒茶素含量的影響，以便更好地指導(dǎo)消費(fèi)者依據(jù)自身需要選取茶葉，同時(shí)為茶葉功能食品的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：LC-20AT型高效液相色譜儀（儀器配置：SPD-M20A檢測(cè)器，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-20AD二元泵，CYO-10AASVP柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器），日本島津;ML104型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;KH-250DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海梅香儀器有限公司;WGL-65B電熱鼓風(fēng)干燥箱，天津市泰斯特儀器有限公司;TST-UPW-20L超純水儀，石家莊泰斯特儀器設(shè)備有限公司;BCD-271VMQ冰柜，美的公司。

試劑：表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG， 純度99.92%），表兒茶素茶多酚沒(méi)食子酸酯（ECG， 純度98.93%），表沒(méi)食子兒茶素（EGC， 純度98.34%），（+）-兒茶素（C， 純度99.58%）標(biāo)準(zhǔn)品，成都曼思特生物科技有限公司;甲醇、乙腈色譜純，美國(guó)TEDIA;甲醇、磷酸、檸檬酸分析純，重慶富宇。實(shí)驗(yàn)用水：超純水，超純水機(jī)制得。

材料：采用紅茶、綠茶工藝加工的福鼎大白茶（貴州省貴陽(yáng)市清鎮(zhèn)某茶廠生產(chǎn)），分別命名為福鼎大白茶紅茶、福鼎大白茶綠茶。二者經(jīng)恒溫箱50 ℃干燥至恒重。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 液相色譜條件

采用InertSustaiu C18 Column（4.6 mm×250 mm， 5 μm）色譜柱;用乙腈和0.1%磷酸水溶液作為流動(dòng)相，體積比為20∶80，總流速1 mL·min-1，柱箱溫度35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，進(jìn)樣量10 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

單一標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制：分別準(zhǔn)確稱取EGC、C、EGCG、ECG標(biāo)準(zhǔn)品各0.800 0 g，分別溶解后轉(zhuǎn)移至5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，所得各標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為1 600 μg·mL-1。

混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制：分別準(zhǔn)確稱取EGC、C、EGCG、ECG標(biāo)準(zhǔn)品各0.800 0 g，混合溶解后轉(zhuǎn)移至5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，所得各標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為1 600 μg·mL-1。將混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液用甲醇逐級(jí)稀釋為20、40、80、100、200、800、1 600 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，并用0.22 μm的有機(jī)系微孔濾膜過(guò)濾，避光低溫儲(chǔ)存待測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 稔佩佩.綠茶、烏龍茶、紅茶[J].博物，2004（1）：2-3.

[2] 吳警，劉春瑩，郭久寧，等.綠茶和發(fā)酵茶的茶多酚組成比較[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（9）：5343-5345，5419.

[3] 陳旭紅.安全快速對(duì)茶葉中茶多酚的提取和含量的測(cè)定[J].食品研究與開發(fā)，2004，25（4）：135-137.

[4] 魏泱，丁明玉.茶多酚的色譜分析法[J].色譜，2000，18（1）：35-38.

[5] 劉小喬，李忠岐，高靜，等.茶多酚中兒茶素類的HPLC分析[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，29（5）：2611-2615.

[6] 王棟，康健.茶多酚的功效、提取和應(yīng)用[J].新疆大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，5（2）：217-221.

[7] 唐根源，吳紅京，吳棱，等.等度反相高效液相色譜法測(cè)定茶多酚中的兒茶素和咖啡因[J].色譜，2001，19（3）：233-235.

[8] Daniel S Albrecht， Elizabeth A Clubbs， Mario Femtzzi. Epigalloeatechin-3-gallatc（EGCG）inhibits PC-3 prostate v，ang，cr cell proliferation via MEK-independent ERKl/2 activation[J].Chemico-Biological Interactions，2007，71（2008）：89-95.

[9] Kuroda Y. Bio-antimutagenic activity of green tea catechins in cultured Chinese hamstcr cells [J].Mutat.Res.，1996，361：1791.

[10] 王小萍，劉曉軍，唐小波，等.高EGCG含量茶的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J].茶葉通訊，2009，31（3）：108-110.

[11] 宛曉春.茶葉生物化學(xué)[M].3版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2007：8-15.

[12] 唐曉波，劉曉軍，王小萍.高EGCG茶樹品種的篩選及開發(fā)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（1）：60-61.

[13] 趙霖，Dieter Trcatter，羅永明.不同月份采摘的綠茶中茶多酚含量及其營(yíng)養(yǎng)學(xué)意義[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，5（26）：377-379.

[14] 陳惠衡，施玲，劉芳.茶多酚測(cè)定結(jié)果與綠茶品質(zhì)關(guān)系的研究[J].分析試驗(yàn)室，2007，26（12）：87-89.

[15] 王麗麗，陳鍵，宋振碩，等.茶葉中茶多酚檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].茶葉科學(xué)技術(shù)，2013（4）：6-12.

[16] 鐘世安，周春山，楊娟玉.高效液相色譜法分離純化酯型兒茶素的研究[J].化學(xué)世界，2003，44（5）：237-241.

[17] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法[S].GB/T 8313—2008.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

[18] 張國(guó)民，廖予琦，王慶忠.HPLC內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定茶葉中4種兒茶素和咖啡因[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，32（3）：47-50.

[19] 侯冬巖，回瑞華，李鐵純，等.高效液相色譜法對(duì)綠茶中茶多酚含量的測(cè)定[J].食品科學(xué)，2010，31（24）：305-307.

[20] 張爽，黃夢(mèng)甜，焦妍津，等.超高效液相色譜.紫外檢測(cè)器法快速測(cè)定茶飲料茶多酚中兒茶素類組成及含量[J].食品科學(xué)，2013，34（22）：170-173.

（責(zé)任編輯：丁志祥）