白及粗多糖功效研究

馬小雙 蔣倩 李文艷

摘要：指出了白及作為一種傳統(tǒng)的中藥材，藥用價(jià)值高，用藥廣泛，化學(xué)成分復(fù)雜，藥理活性多樣，具有良好的開發(fā)價(jià)值。利用四氧嘧啶誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，研究了白及多糖的降血糖功效。通過連續(xù)給小鼠灌胃白及多糖18d后，可以在一定程度上改善糖尿病小鼠的狀態(tài)，緩解多飲多食多尿及消瘦等癥狀，降低小鼠血糖。試驗(yàn)過程中主要測定了糖尿病小鼠的血糖值、體質(zhì)指數(shù)、負(fù)重游泳時(shí)間、免疫器官濕重等各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果表明：白及多糖能夠保護(hù)小鼠免疫器官，增加小鼠脾臟和胸腺的濕重，延長小鼠負(fù)重游泳的時(shí)間，白及多糖具有抗疲勞功效和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效。

關(guān)鍵詞：抗疲勞;降血糖;增強(qiáng)免疫力

中圖分類號(hào)：TS210 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-9944（2019）20-0153-03

1引言

白及是蘭科植物白及[BletiUastriata（Thunb.）Reichb.f.]的干燥塊莖，別名良姜、紫蘭，其根白色，連及而生，故日白及，其性味苦、甘、澀，平、微寒，主歸肺經(jīng)、胃經(jīng)、肝經(jīng)。具有補(bǔ)肺、止血、消腫、生肌、斂瘡的功效。主要用于治療肺傷咳血、衄血、金瘡出血、癰疽腫毒、潰瘍疼痛等癥。素有“外科最善”之稱，是我國傳統(tǒng)止血藥，歷史悠久。臨床上廣泛用于治療咳血、瘡瘍腫毒、外傷出血、吐血、皮膚皸裂、肺結(jié)核、潰瘍病出血等病癥，療效突出。

現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，除了上述作用之外，白及還具有抑制腫瘤血管生成、抗感染、抗疲勞、抗氧化、防腐、促進(jìn)傷口凝血、保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)機(jī)體傷口愈合的功效。人們研究發(fā)現(xiàn)，白及的假鱗莖含有大量易溶于水的多糖，其主要功能性成分是葡萄甘露聚糖，白及多糖具有十分特殊的黏性。白及多糖由甘露糖和葡萄糖兩種單糖組成，不含有糖醛酸，提純后的白及多糖為白色粉末狀，在熱水和偏堿性溶液中易溶解，在冷水中不易溶解。白及水溶液的粘性很大，且粘度隨其分子量增加而增加。白及的主要化學(xué)成分是聯(lián)節(jié)類、菲類及其衍生物，此外還含有少量揮發(fā)油、黏液質(zhì)、白及甘露聚糖以及淀粉、葡萄糖等。白及多糖具有生物活性、生物相容性，且毒性較低，在醫(yī)藥領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，隨著研究的深入，白及的功能特效也越來越多地被人們發(fā)現(xiàn)。

近年來不斷研發(fā)白及的新型制劑，其臨床療效十分顯著。糖類是自然界中最多的天然有機(jī)化合物，也是重要的生物高分子和重要的信息分子。多糖及糖復(fù)合物在自然界分布廣泛，功能多種多樣，它們參與了細(xì)胞各種生命活動(dòng)。有的多糖具有特殊生物活性，能夠顯著降低動(dòng)物機(jī)體的血糖，可作為一種機(jī)體免疫調(diào)節(jié)劑，沒有毒副作用，被臨床和疫苗廣泛應(yīng)用。多糖常與其它大分子共同存在于植物細(xì)胞中，可利用多糖不溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)在提取液中加入乙醇溶液使白及多糖從提取液中沉淀出來，初步達(dá)到分離純化的目的。

2材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

2.1.1原料與試劑

白及購于文山市三七農(nóng)貿(mào)市場、昆明種小白鼠、四氧嘧啶（上海伊卡生物技術(shù)有限公司）、鹽酸二甲雙胍片（河北醫(yī)科大學(xué)制藥廠）、無水乙醇、蒸餾水、生理鹽水。

2.1.2試驗(yàn)儀器與設(shè)備

干燥箱（上海以恒科學(xué)儀器有限公司）、R-1005型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科技有限公司）、XL5A離心機(jī)（湖南湘立科學(xué)儀器有限公司）、KQ-300E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、586型魚躍血糖儀（上海魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司）、HH-s2s恒溫水浴鍋（金壇市大地自動(dòng)化儀器廠）、燒杯、量筒、滴管、電子天平、分析天平、玻棒、抽濾裝置、濾紙、錐形瓶、pH計(jì)、小鼠灌胃器、鼠籠。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1小鼠降血糖實(shí)驗(yàn)

2.2.1.1建模

實(shí)驗(yàn)前將26只雌雄各半的昆明種小鼠放在室溫和相對濕度穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)性喂養(yǎng)4d，小鼠給予營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)以及自由飲水。4d后將其分為對照組和糖尿病模型組。對照組給以營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)及自由飲水，糖尿病模型組禁食12h后腹腔注射藥物四氧嘧啶，劑量為200mg/kg，84h后，小鼠斷尾采血測定糖，當(dāng)數(shù)值大于11.1mmoL/L時(shí)則表明糖尿病小鼠造模成功，可用于接下來的藥理實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)期間每天稱量小鼠的體重，并密切觀察小鼠的狀態(tài)。

2.2.1.2分組及給藥

選取造模成功的患糖尿病小鼠20只，將小鼠隨機(jī)分為5個(gè)組，每個(gè)小組4只，即糖尿病模型組、鹽酸二甲雙胍組、白及多糖低劑量組、白及多糖中劑量組、白及多糖高劑量組。分組后，在每天的固定時(shí)間段8：OO～10：00給小鼠灌胃，實(shí)驗(yàn)周期為18d。實(shí)驗(yàn)期間，小鼠給以正常營養(yǎng)飼料喂養(yǎng)，每天每只3～5g，自由攝食飲水，室內(nèi)確保通風(fēng)，溫度和相對濕度保持穩(wěn)定。白及多糖高劑量、中劑量、低劑量組每天分別灌胃白及多糖400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，鹽酸二甲雙胍組每天灌胃劑量為200mg/kg1，用生理鹽水溶解，灌胃量為0.2mL/10g，對照組與模型組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃18d。在未次給藥前小鼠禁食10h（不禁水），給藥2h后斷尾采血用魚躍血糖儀測小鼠血糖。

2.2.2小鼠力竭游泳實(shí)驗(yàn)

取小鼠16只，雌雄各半，放在室溫和相對濕度穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)性喂養(yǎng)4d，小鼠給予正常飼料喂養(yǎng)以及自由飲水，4d后將小鼠隨機(jī)分成4個(gè)組，每個(gè)小組4只，白及多糖高劑量、中劑量、低劑量組每天分別灌胃白及多糖劑量為400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，用生理鹽水溶液溶解，灌胃劑量為0.4mL/20g，對照組小鼠灌胃0.4mL/20g體積生理鹽水，持續(xù)灌胃15d。末次給藥30min后在小鼠尾部束小鼠體重10%的物體，并分別放人水溫25土1℃，水深12cm，長、寬、高為40 cmX 30cmX 20cm的玻璃缸內(nèi)游泳，立即計(jì)時(shí)并注意觀察，當(dāng)小鼠頭部沉入水中12s內(nèi)不能浮出水面即視為體力耗竭，應(yīng)立即停止計(jì)時(shí)，并記錄小鼠游泳時(shí)間，與對照組小鼠比較并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。按下列公式計(jì)算存活時(shí)間延長率：

延長率=實(shí)驗(yàn)組小鼠力竭游泳時(shí)間/對照組小鼠力竭游泳時(shí)間-1

2.2.3小鼠臟器指數(shù)測定

采用2.2.2韻實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行后續(xù)藥理實(shí)驗(yàn)，將小鼠處死后立即解剖，取其胸腺和脾臟，用濾紙吸干胸腺和脾臟表面的血液，在分析天平上稱濕重，按下列公式計(jì)算臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)=器官重量（mg）/小鼠體重（g）×100%

2.2.4數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS19.0數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料正態(tài)分布用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來表示，采用單變量方差分析和單因素方差分析方法，當(dāng)P<0.05為具有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果與分析

3.1糖尿病小鼠血糖水平變化

血糖升高且空腹血糖含量>11.1mmoL/L是糖尿病最顯著的標(biāo)志。診斷糖尿病的主要依據(jù)是以空腹血糖值升高超過11.1mmoL/L。因此本試驗(yàn)以試驗(yàn)前后血糖的高低值作為主要的檢測依據(jù)來探討白及多糖對糖尿病小鼠的降血糖作用。

小鼠血糖水平變化如表1所示，模型組與對照組相比，各糖尿病組小鼠的血糖值顯著升高（P<0.05），且血糖值均高于11.1mmoL/L，表明糖尿病小鼠動(dòng)物造模成功。灌胃18d后，模型組的血糖值基本上沒有變化，而其它給藥組的血糖均有降低，藥物組與模型組小鼠比較，白及多糖低劑量、中劑量、高劑量各組的小鼠空腹血糖水平顯著降低（p<0.05），結(jié)果表明，白及多糖能降低四氧嘧啶誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病小鼠的血糖。

3.2白及多糖對小鼠游泳時(shí)間的影響

如表2白及多糖對小鼠力竭游泳時(shí)間的影響所示，各組小鼠力竭游泳時(shí)間均比對照組顯著延長（P<0.05）。其中對照組和實(shí)驗(yàn)組相比，白及多糖低劑量、中劑量、高劑量組小鼠游泳時(shí)間被延長（P<0.05），高劑量組小鼠游泳時(shí)間的延長率為59.83%，中劑量組小鼠游泳時(shí)間的延長率為38.63%，低劑量組小鼠游泳時(shí)間延長率為18.79%，明顯延長了小鼠的游泳時(shí)間，白及多糖具有抗疲勞的作用。

3.3小鼠臟器指數(shù)測定結(jié)果

如表3白及多糖對小鼠免疫器官指數(shù)的影響所示，各個(gè)實(shí)驗(yàn)組小鼠免疫器官指數(shù)與對照組相比，各個(gè)實(shí)驗(yàn)小組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)都不同程度的升高（P<0.05），白及多糖高劑量組的效果最好，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高30.88%、48.58%;中劑量組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高了29.90%、39.0o%;低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)提高了9.57%，表明白及多糖能夠促進(jìn)糖尿病小鼠胸腺和脾臟的生長發(fā)育，能增強(qiáng)小鼠免疫力。

4結(jié)論與討論

灌胃18d后，模型組的血糖值基本上沒有變化，而其它給藥組的血糖均有所下降，與模型組小鼠比較，多糖低劑量組、中劑量組、高劑量組的小鼠空腹血糖水平顯著降低（P<0.05），白及多糖對四氧嘧啶誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病小鼠具有一定的降血糖做用。白及多糖對實(shí)驗(yàn)糖尿病模型小鼠的影響是廣泛的，都表明白及多糖能有效改善糖尿病模型小鼠的相關(guān)各項(xiàng)指標(biāo)，減輕小鼠的病情，阻止或延緩并發(fā)癥的出現(xiàn)。深人研究白及多糖防治糖尿病及并發(fā)癥的機(jī)制，將其作為防治糖尿病及并發(fā)癥的有效制劑開發(fā)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

常用疲勞的評價(jià)方法有兩個(gè)：運(yùn)動(dòng)耐力實(shí)驗(yàn)和生化指標(biāo)檢測。提高運(yùn)動(dòng)耐力是緩解疲勞能力最有力的表現(xiàn)，小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)常用來測定小鼠的疲勞狀況，可客觀的反映小鼠運(yùn)動(dòng)疲勞的程度，負(fù)重力竭游泳時(shí)間常常被作為反映運(yùn)動(dòng)耐力的重要指標(biāo)，而且運(yùn)動(dòng)耐力下降又是機(jī)體疲勞最直接的表現(xiàn)，結(jié)果表明，白及多糖可以有效延長小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，高劑量組游泳時(shí)間的延長率為59.83%，中劑量組游泳時(shí)間的延長率為38.63%，低劑量組游泳時(shí)間延長率為18.79%，白及多糖具有一定的抗疲勞的作用。

脾臟、胸腺是動(dòng)物體內(nèi)主要的免疫器官，免疫器官指數(shù)反應(yīng)了動(dòng)物免疫器官的發(fā)育和免疫細(xì)胞的功能情況，客觀上體現(xiàn)了機(jī)體的非特異性免疫能力。實(shí)驗(yàn)組與正常對照組相比較，各個(gè)給藥組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)都有不同程度的升高（P<0.05），白及多糖高劑量組效果最好，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高30.88%、48.58%;中劑量組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別提高了29.90%、39.00%;低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)為9.57%，白及多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效。