長柄側耳發酵液對小鼠肝臟組織抗氧化能力的研究*

郭 強

（商丘學院體育學院，河南 商丘 476000）

食用菌鮮美可口，同時包含人體所需氨基酸、蛋白質、維生素及多糖等多種營養成分，且不含膽固醇及淀粉，經常食用可顯著提高人體對食物營養的吸收率，在抗腫瘤方面同樣具有顯著的效果，具有提高人體免疫力、降低血壓，保護肝臟組織，預防粥樣動脈硬化等多種作用[1]。

目前，市場上關于培養食用菌液體發酵的試驗層出不窮，工藝也越來越精湛。據相關報道，食用菌發酵后，得到的液體不僅可以抑制腫瘤活性，而且還可以美白保濕，保護人體肝臟，但抗疲勞和抗氧化能力沒有被明確提出[1]。通過食用菌液體的發酵，我們可以獲得質量相當穩定的發酵液，而且這種方式相對于固體培養有更多的優勢。第一，可以獲得更高的產量。第二，液體發酵的條件沒有那么苛刻，發酵的周期不但短而且過程便于控制[2]。

本文中采用強制喂食小鼠長柄側耳發酵液，不斷反復地研究小白鼠的運動能力，耐缺氧時間，血乳酸、尿素氮、肝糖原儲存量肝糖原儲存量等指標。據研究表明，側耳屬類食用菌不管是在機體免疫力上，抗腫瘤上，還有降壓降脂方面都具有比其他食用菌較好的作用，該項目的重點是研究長柄側耳的菌種發酵對有血清中的膽固醇或者甘油三酯高于正常值的小鼠的預防作用，以及怎樣保護小白鼠的肝臟和提高小鼠抗氧化能力的，以便為長柄側耳菌種的使用發展提供科學依據[1]。為進一步研究和發揮食用菌在藥材方面的作用提供參考。

1 實驗方法

1.1 材料與方法

1.1.1 材料與試劑

長柄側耳菌株 502001（Changxingjin land ecological agriculture development Co.Ltd.）；尿素氮（Produit par zhejiang aikang biotech Co.Ltd.）、Blood lactic acid試劑盒；葡萄糖、乙醇等（Hangzhou zhengshan chemical Co.Ltd.），均為分析純；400只清潔級ICR57小鼠（Jinan jinfeng experimental animal Co.Ltd），雄性，30 g～32 g，動物許可證號為SCXK2016-0001。SOD、MDA、GSH-PX測試盒。

液體培養基：葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母浸粉 1%、磷酸二氫鉀 0.05%、硫酸鎂 0.05%[3]。

1.1.2 主要用到的儀器

EKF lactatescout便攜式Blood lactic acid測定儀；TS-5型離心機；WFJ-15型超微粉碎機；電熱恒溫水浴鍋；可見分光光度計小鼠飼養籠；Hei-VAPA dvantage旋轉蒸發儀；小鼠恒溫游泳池。

1.1.3 長柄側耳發酵液的制備

先于0.5 L的錐形瓶容器裝入0.3 kg的液體培養基，液體發酵罐的菌種量比例是1%，以30℃的溫度培養5 d得到液體菌種。0.5 L搖瓶裝入液體培養基0.3 kg，之后移入液體菌種，液體發酵罐的菌種量控制在1%，200 r·min-1、26℃培養5 d[4]。通過抽吸過濾發酵液體，獲得用于小鼠試驗的發酵的試發酵液。

1.2 灌胃劑量與分組

把試驗小白鼠分為4個組，各試驗每組小鼠20只分別進行食用菌發酵液的喂食，每天按照體重分別灌胃 10 mg·kg-1d-1、20 mg·kg-1d-1和 30 mg·kg-1d-1的劑量，對照組灌胃每天10 mg·kg-1蒸餾水，持續1個月。

1.3 負重游泳實驗

小白鼠最后1次灌胃0.5 h后，在小白鼠的尾巴上扣上其體重4%重量的的鉛絲，然后把它丟入試驗游泳箱中，水溫控制在30℃左右，水的高度0.3 m，然后把小白鼠完全在水面下面的游泳時間超過5 s的時間的長短記錄下來。

1.3.1 爬桿試驗

小鼠最后1次灌胃0.5 h后，進行爬桿試驗。記錄由于肌肉疲勞導致摔落的小白鼠開始和跌落之間的時間，反復試驗3次。

1.3.2 耐缺氧試驗

耐缺氧試驗需要在喂食長柄側耳發酵液0.5 h之后進行，首先在0.5 L容積的廣口瓶放入15 g的石灰，使之沉淀在瓶底，然后把小白鼠依次放入每個瓶子里，把瓶口密封起來，然后把從加蓋到小老鼠停止呼吸的時間記下來（不斷晃動廣口瓶，小鼠沒有動靜可判斷已死亡）。

1.3.3 尿素氮、肝糖原儲存量和血乳酸測定方法

小鼠最后1次灌胃0.5 h后，讓其在符合標準的游泳池中游1.5 h之后，去除血清并分離血清，測尿素氮的含量，取0.2 g的肝組織測肝糖原的儲存量，在眼球取血，測血乳酸含量。

1.3.4 抗氧化指標測定

小鼠最后1次灌胃0.5 h后，在小白鼠的尾巴上扣上它體重10%重量的的鉛絲，讓它在試驗游泳箱中游泳，使其精疲力竭之后（以頭部在水中10 s沒有浮出水面為標準），取其肝組織測SOD、GSH-Px的活力和MDA的水平。

2 試驗結果

2.1 長柄側耳發酵液在抗疲勞方面的作用

長柄側耳酵液對小鼠負重游泳、爬桿和耐缺氧時間的影響見表1。

表1 長柄側耳發酵液對小鼠負重游泳、爬桿和耐缺氧時間的影響Tab.1 Effects of Plearotas spodoleucas fermentation liquid on swimming,climbing and anoxia tolerance time

從表1的數據對比對照組H2O 10 mg·kg-1d-1，低劑量組 10 mg·kg-1d-1、中劑量組 20 mg·kg-1d-1；高劑量組30 mg·kg-1d-1食用菌酵液灌胃之后，小白鼠的運動時間變長久了，比如游泳或者爬桿的時候，另外，耐缺氧的時間也變長，它表明食用菌酵液對小鼠運動耐力的增強，也說明食用菌發酵液在抗疲勞方面，功能非常強大。

2.2 小鼠指標在灌胃發酵液之后的變化

食用菌酵液對小鼠指標的影響如表2所示。

由表2可知，低劑量組（10 mg·kg-1d-1）小鼠的尿素氮、血乳酸和MDA含量都在下降，肝糖原儲存量、SOD和GSH-P x活性有所上升，但差異都不是很明顯；高劑量組（30 mg·kg-1d-1）肝糖原儲存量、SOD和GSH-P x活性相對于對照組顯著上升，尿素氮、血乳酸和MDA含量也顯著下降。說明食用菌食用菌酵液越多，小鼠抗氧化能力越強。

表2 食用菌酵液對小鼠指標的影響Tab.2 Effect of Plenrotus spodoleacas fermentation liquid on mouse indexes

3 結論

市場的現實需求是需要符合當下社會公眾的思想認知的，兩者密不可分。也就是說，隨著生活中人們越來越看重自己的健康，因為食用菌的營養豐富，對健康有大有裨益，所以食用菌的需求量會越來越大，需求量的提成，也會促進更多的食用菌方面的開發和利用。因為網絡讓人們了解了更多的疾病，人們也已經不再僅僅考慮如何提高生活質量了，營養的實物，疾病的預防也越來越受到關注。因為食用菌安全又營養，在疾病預防方面也有功效，所以它符合當下發展的一個健康理念，也非常受歡迎。因此購買食用菌的人很多，消費量很大，具有十分大的市場潛力。

本文的試驗材料主要是長柄側耳發酵液，根據測試過程中的數據我們可以看出小白鼠在被灌胃發酵液之后，各項的指標都有不同程度的變化，比如，低劑量組的抗疲勞和抗氧化的指數就不是很明顯，但是中高劑量組的抗疲勞和抗氧化我們就可以看出來明顯差異：第一，小白鼠游泳爬桿堅持的時間更久，而且耐缺氧能力也增強了很多，其中，小白鼠

的尿素氮含量和血乳酸含量都下降，肝糖原儲存量顯著上升，MDA含量呈下降趨勢，SOD、GSH－P x活力增強。研究結果說明中高劑量組食用菌酵液對小白鼠影響更大，提高運動能力的同時，也極大地提升了耐力。本文的研究結果雖只提供了參考，但是對以后食用菌發酵液的發展有指導作用，為食用菌在保健方面的功能和作用提供了前期理論基礎，為它未來打開保健市場提供了參考。在后續的研究中，我們主要是考慮怎樣最大限度地讓發酵液發揮抗疲勞和抗氧化作用，然后再進行一系列試驗和分析。