通竅滌痰方對急性腦梗死病人細胞因子、血管內皮功能及外周血單核細胞microRNA-155、microRNA-212表達的影響

王 玲

近年來隨著人們生活水平的不斷提高，糖尿病、高血壓病增多，導致腦血管病發病率逐年上升[1]。因此，臨床上尋找及時有效治療腦血管病的方法對促進腦血管病康復、降低腦血管病死亡率具有重要意義[2]。目前，西醫治療急性腦梗死方法主要包括神經保護、改善微循環、抗凝、抗血小板聚集及溶栓等治療，但其效果并不十分理想[3-4]。中醫藥對中風病的認識及治療歷史悠久，療效確切，不良反應小，且思路多樣化，已在臨床上廣泛應用[5-6]。本研究旨在探討通竅滌痰方對急性腦梗死病人細胞因子、血管內皮功能及外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年6月—2019年1月我院收治的急性腦梗死病人98例，符合《全國第四屆腦血管病學術會議紀要》[7]和《中藥新藥臨床研究指導原則(試行)》[8]中關于急性腦梗死的診斷標準，中醫辨證屬風痰瘀阻證，癥狀主要表現為半身不遂、口舌歪斜、不語或言語謇澀、痰多而黏、頭暈目眩、舌質暗淡、舌苔白膩或薄白、脈弦滑。按照隨機數字表法分為對照組與觀察組。對照組49例，男28例，女21例；年齡47～72(59.83±7.38)歲；發病至入院時間3～46(20.32±3.14)h。觀察組49例，男30例，女19例；年齡43～74(60.37±6.58)歲；發病至入院時間4～45(21.17±2.56)h。兩組性別、年齡、發病至入院時間等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入標準 經顱腦磁共振成像(MRI)或者CT證實為腦梗死，均為急性發病，且病人于發病48 h內入院接受治療者；首次發病；病人知情同意并簽署知情同意書。

1.3 排除標準 ①有腦外傷、腦腫瘤、風濕性心臟病等疾病者；②心、肺、肝、腎功能嚴重異常者；③精神疾病者；④合并全身嚴重感染、腫瘤等；⑤過敏體質者。

1.4 治療方法 兩組入院后給予常規處理，包括補液及給予血管擴張劑、降壓、利尿及自由基清除劑等。對照組給予依達拉奉注射液30 mg加入20 mL生理鹽水中靜脈輸注，每日1次。觀察組在對照組基礎上加用通竅滌痰方治療，組方：天麻10 g，鉤藤10 g，白菊花10 g，川芎5 g，桑枝15 g，郁金6 g，石菖蒲6 g，遠志5 g，竹茹6 g，陳皮10 g，木香3 g，蓮子心3 g，夜交藤12 g，麥冬10 g。取上述諸藥水煎，每日1劑，分兩次服用，早晚溫服，每次服用150 mL。兩組療程均為14 d。

1.5 療效評價標準 基本痊愈：病人美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評分減少91%～100%，主要癥狀、體征消失；顯著進步：病人NIHSS評分減少46%～90%，主要癥狀、體征明顯改善；進步：病人NIHSS評分減少18%～45%，主要癥狀、體征改善；無效：病人NIHSS評分減少18%以下，主要癥狀、體征無改善。

1.6 觀察指標 ①觀察兩組治療前日常生活活動能力(Balthel指數)和神經功能缺損程度評分(NIHSS評分)變化。②觀察兩組治療前后細胞因子變化，包括白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)，分別于治療前與治療14 d時抽取外周靜脈血，分離血清，于-20 ℃下保存待測，采用酶聯免疫吸附法測定IL-6、TNF-α和IL-8水平。③觀察兩組治療前后血管內皮功能變化，包括一氧化氮(NO)和內皮型NO合成酶(eNOS)，分別于治療前與治療14 d時抽取外周靜脈血，分離血漿，于-20 ℃下保存待測，采用硝酸還原酶法測定NO水平，采用酶聯免疫吸附法測定eNOS水平。④觀察兩組治療前外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達，分別于治療前與治療14 d時抽取外周靜脈血3 mL，提取總RNA，利用mirVana PARIS miRNA抽取試劑盒提取總RNA，以TaqMan miRNA反轉錄試劑盒對miRNA進行反轉錄。以U6作為內參，計算△Ct獲得miRNA的相對表達量，Ct miRNA-Ct U6=△Ct。

2 結 果

2.1 兩組臨床療效比較(見表1)

表1 兩組臨床療效比較

注：兩組總有效率比較，χ2=7.900，P<0.05

2.2 兩組治療前后Balthel指數和NIHSS評分比較 兩組治療前Balthel指數和NIHSS評分比較差異無統計學意義(P>0.05)；兩組治療后Balthel指數較治療前升高(P<0.05)，而NIHSS評分較治療前降低(P<0.05)；觀察組治療后Balthel指數評分高于對照組(P<0.05)，而NIHSS評分低于對照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組治療前后Balthel指數和NIHSS評分比較(±s) 分

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對照組治療后比較，2)P<0.05

2.3 兩組治療前后細胞因子變化比較 兩組治療前血清IL-6、TNF-α和IL-8水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；兩組治療后血清IL-6、TNF-α和IL-8水平較治療前降低(P<0.05)；觀察組治療后血清IL-6、TNF-α和IL-8水平低于對照組(P<0.05)。詳見表3。

表3 兩組治療前后細胞因子變化比較(±s)

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對照組治療后比較，2)P<0.05

2.4 兩組治療前后血管內皮功能變化 兩組治療前血漿NO和eNOS水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；兩組治療后血漿NO和eNOS水平較治療前升高(P<0.05)；觀察組治療后血漿NO和eNOS水平高于對照組(P<0.05)。詳見表4。

表4 兩組治療前后血管內皮功能變化(±s)

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對照組治療后比較，2)P<0.05

2.5 兩組治療前后外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達比較 兩組治療前外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；兩組治療后外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達較治療前降低(P<0.05)；觀察組治療后外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達低于對照組(P<0.05)。詳見表5。

表5 兩組治療前后外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達比較(±s)

與同組治療前比較，1)P<0.05；與對照組治療后比較，2)P<0.05

3 討 論

中醫學認為腦梗死屬“中風”范疇，由于起病急驟、變化迅速、證見多端，與風性善行數變的特征相似，故而以中風名之[8-9]。中醫認為腦梗死病機較為復雜，主要為血(血瘀)、氣(氣逆)、虛(血虛、氣虛、陰虛)、火(肝火、心火)、風(肝風)、痰(風痰、濕痰、痰熱)六端，此六端因素可發生多種轉歸：或由輕漸重，其表現主要為風邪橫竄經絡，每挾痰挾瘀[10-12]。風痰瘀阻是中風病常見的一種類型，由于病人長期勞逸過度、飲食不節，臟腑功能失調，造成痰瘀等病理因素停滯血脈，致氣血通暢阻滯，發生半身不遂、猝然昏撲等[13]。因此，應以平肝熄風、活血通絡、豁痰開竅為治療法則。本研究采用通竅滌痰方治療，方中天麻、鉤藤、白菊花具有平肝熄風功效，川芎、桑枝、郁金具有活血通絡功效，石菖蒲、遠志、竹茹具有豁痰開竅功效，陳皮、木香、蓮子心具有行氣清心功效，夜交藤、麥冬具有養血安神功效。縱觀全方可奏平肝熄風、活血通絡、豁痰開竅功效。本研究表明，通竅滌痰方治療急性腦梗死療效良好，且可改善病人日常生活活動能力及減輕神經功能缺損程度。炎癥因子與急性腦梗死發生、發展密切相關。IL-6主要來源于腦組織神經細胞、星形膠質細胞及T、B淋巴細胞等，是具有炎癥與免疫調節的多功能細胞因子，能夠激活血管內皮細胞、T淋巴細胞和巨噬細胞等參與炎癥反應過程，且證實為腦梗死的獨立預測因子[14]。TNF-α是機體重要的一種炎癥免疫調節因子，腦組織中星形膠質細胞及神經元可產生TNF-α，并且通過其激活作用在血管內皮細胞表面形成一種凝血酶激活復合物，促使纖維蛋白原沉積于血管壁上，從而導致動脈粥樣硬化的產生[15]。IL-8主要來源于巨噬細胞，能夠誘導自然殺傷細胞及T、B淋巴細胞分泌γ-干擾素，趨化中性粒細胞聚集于炎癥部位，使組織細胞直接損傷，促進炎癥發生發展。有研究報道顯示，IL-8為腦損傷過程中重要的一種細胞因子[16]。本研究結果顯示，觀察組治療后血清IL-6、TNF-α和IL-8水平低于對照組，說明通竅滌痰方可通過降低IL-6、TNF-α和IL-8水平，減輕炎癥反應。

血管內皮功能與急性腦梗死發生、發展密切相關，急性腦梗死病人存在血管內皮功能損傷[17-18]。內皮細胞主要通過釋放一系列血管活性物質對血管代謝和運動進行調節，其中NO是最重要的一種血管舒張因子，主要由eNOS催化L-精氨酸轉化而來，具有減少氧自由產生、抑制平滑肌細胞增殖、抑制單核細胞黏附、抑制血小板聚集和舒張血管等生理效應。本研究結果顯示，觀察組治療后血漿NO和eNOS水平高于對照組，說明通竅滌痰方可通過提高血漿NO和eNOS水平而改善血管內皮功能。

microRNA是一類非編碼RNA，近年來發現其在腦卒中的發生、發展中扮演重要角色。microRNA-155是一種多功能微小RNA，在哺乳動物的多種組織細胞中均表達，如成纖維細胞、中樞神經系統等，主要通過靶向各種基因調控多種生物學作用，從而在疾病的發生、發展中具有關鍵作用。近年來，研究發現microRNA-155在動脈粥樣硬化、高血壓、血腦屏障及血管免疫炎癥等方面具有重要作用，而這些與腦卒中的發生、發展密切相關[19]。microRNA-212在炎癥反應中發揮重要調控作用。相關研究報道顯示，microRNA-212表達升高與缺血性腦卒中發病風險增加明顯相關，且認為外周血microRNA-212及其所調控的下游信號通路在腦卒中發病中扮演重要角色[20]。本研究結果顯示，觀察組治療后外周血microRNA-155和microRNA-212表達低于對照組，說明通竅滌痰方可降低外周血microRNA-155和microRNA-212表達。

綜上所述，通竅滌痰方對急性腦梗死病人療效良好，可減輕炎癥反應，改善血管內皮功能紊亂及降低外周血單核細胞microRNA-155和microRNA-212表達。