成年人血清細胞角質蛋白19可溶性片段地區性參考區間的建立與探討

顧玉蘭，丘佳明，陳麗芳，宛傳丹△

(1.江蘇省常熟市第二人民醫院腫瘤科 215500;2.江蘇省常熟市第二人民醫院病理科 215500;3.江蘇省常熟市醫學檢驗所 215500)

細胞角質蛋白作為上皮細胞的骨架重要分子，廣泛分布于正常組織細胞表面。在惡性上皮細胞中，因為異常活躍的蛋白酶類促進了細胞的降解，使得大量細胞角質蛋白可溶性片段釋放進入血液[1- 2]。其中細胞角質蛋白19可溶性片段(CYFRA21- 1)是一種可用于診斷及評價非小細胞肺癌的腫瘤標記物，具有較高的敏感度和特異度[3- 5]。

指標的量化檢驗涉及參考區間的建立，其直接影響到臨床醫生對疾病的判斷。而腫瘤指標參考區間常受到種族、地域、年齡、性別及地區飲食習慣等眾多因素的影響。因此，國際臨床化學聯合會(IFCC)建議應結合本地區建立適用本地區實驗室的參考區間[6]。本文以統計學線性擬合法分析基于常熟市醫學檢驗所實驗室信息管理系統(LIS)現有的CYFRA21- 1檢驗數據建立間接參考區間，并與美國臨床和實驗室標準化委員會(CLSI)推薦的非參數法建立的參考區間進行比較，探尋更為便捷、省力且有效的參考區間驗證方案，為本地區提供更為精準的CYFRA21- 1參考區間。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集江蘇省常熟市LIS中2017年6月至2018年6月所有CYFRA21- 1的檢測數據。這些標本來源于本地區3家大型綜合醫院(江蘇省常熟市第一人民醫院、江蘇省常熟市第二人民醫院和江蘇省常熟市中醫院)及各鄉鎮二級醫院、衛生院等，記為臨床檢測組。納入標準為經全面體檢和影像學檢查排除患有嚴重心、肺、腎、肝、腸、胃等基礎疾病；無內分泌系統、免疫系統等疾病；無腫瘤病史。排除妊娠期及哺乳期的女性。將2018年1-6月各醫院送檢的體檢健康者記為健康體檢組，兩組分別以不同的方法進行統計計算。

1.2CFYRA21- 1檢測 所有受檢者均在早晨、空腹、安靜狀態下采集靜脈血5 mL左右，室溫靜置30 min以上，2 h 內分離血清，以3 000×g離心5 min。采用美國雅培公司的Architecti全自動化學發光免疫分析系統及配套試劑進行檢測分析。方法為化學發光微粒子免疫檢測法，質控品及校準品均由美國雅培公司提供。每天質控均在控，并做好記錄。

1.3數據整理 導出的原始數據剔除同一患者重復檢測數據，保存第1次有效數據。排除臨床診斷為腫瘤相關疾病的患者檢測數據。以統計學軟件SPSS20.0四分位法將大于P75+3×(P75-P25)的數據作為離群值剔除。將最終有效數據用SPSS20.0軟件分析其頻數分布。

2 結 果

2.1原始數據與篩選結果 2017年6月至2018年6共檢測CYFRA21- 1 28 899例，依據四分位法統計分析檢測值，將大于P75+3(P75-P25)的數據作為離群值剔除。再根據納入標準剔除無效數據，最后經過篩選后得臨床檢測組有效數據16 550例，年齡20～100歲，平均(63.11±14.43)歲；其中男9 624例，女6 926例。健康體檢組共818例，經過篩選后得有效數據806例，年齡19～84歲，平均(41.11±12.10)歲；其中男570例，女236例。將數據依次按性別、年齡進一步分為男青年組、男老年組、女青年組、女老年組進行研究，結果見表1。年齡與CYFAR21- 1數據頻率分布直方圖，見圖1、2。

A：臨床檢測組；B：健康體檢組

圖1CYFAR21-1檢測值頻率分布直方圖

A：臨床檢測組；B：健康體檢組

圖2年齡頻率分布直方圖

2.2線性擬合法計算參考區間 通過R語言軟件利用LIS信息系統里存儲的CYFRA21- 1臨床檢測數據建立的累積頻率分布直方圖見圖1，通過擬合線性回歸方程，求得95%參考區間，見表1。

表1 LIS存儲臨床數據組血清CYFRA21- 1間接參考區間

A：男青年組;B:女青年組;C：男老年組;D:女老年組

圖3CYFRA21-1累積頻率分布圖(A、B兩點

間數據代表最佳線性)

2.3非參數法計算參考區間 對CYFRA21- 1進行正態分布檢驗顯示，樣本各組數據呈現偏態分布(P<0.05)，參考區間的建立應取其右單側第95百分位數作為參考上限。采用中位數M及四分位數(P25,P75)來描述各組數據。見表2。

表2 健康體檢組血清CFRA21- 1參考區間

2.4兩種方案參考區間比較 兩種方案數據來自不同人群樣本，通過t檢驗比較發現兩種方案得出的各分組參考區間之間差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 兩種方案參考區間比較分析

3 討 論

血清CYFRA21- 1是肺癌，特別是非小細胞肺癌最為敏感的腫瘤標記物，常用于監測非小細胞肺癌的病程[5]。其特異性較強，可用于肺癌與肺炎、肺結核、慢性阻塞性肺炎等肺部疾病的鑒別診斷。同時，血清CYFRA21- 1針對非小細胞肺癌化療等效果的評價與預后評估也具有十分重要的臨床意義[3，9]。血清CYFRA21- 1參考區間對于臨床上非小細胞肺癌診斷至關重要，而不同種族人群、不同地區及年齡、性別等均可影響到參考區間的設立。文獻檢索顯示，國內僅有3篇論文涉及CYFRA21- 1的參考區間建立與設定[7- 8]。3個地區(上海、蘇州、南通)所采用的方法不完全相同，且得出的結論之間存在差異。上海、蘇州地區均以非參數百分位法建立參考區間，取95%百分位數為上限[10- 11]。該方法樣本較小，粗略地估算了參考區間。南通地區以體檢與醫院存儲數據進行統計分析，以科學統計方法評估出最適用于該地區的參考范圍，數據精準可靠。常熟地區自2010年江蘇省常熟市醫學檢驗所成立后，將本地區所有檢驗資源整合一起，質量管理體系通過ISO15189認可，建立了完善的LIS，保存了大量臨床樣本檢測數據。據國外文獻研究，參考區間可以基于當前數據，通過相關統計算法建立[12- 13]。

本文研究以兩種常用的方法來推導參考區間，一是建立在本地區成年人人群檢驗數據基礎之上；二是建立在健康成年人群樣本庫，以統計學方法演算出參考區間。通過分析，兩種方法的結果與廠家提供的均存在一定差異。廠家說明書的參考區間為0～3.3 ng/mL，該參考區間不分青年組(20～45歲)及老年組(>45歲)。而本研究建立在LIS大數據分析基礎上，得出的常熟地區血清CYFRA21- 1男青年組95%間接參考區間為0～3.49 ng/mL；男老年組95%間接參考區間為0～3.84 ng/mL。女青年組95%間接參考區間為0～2.74 ng/mL；女老年組95%間接參考區間為0～3.03 ng/mL。男性參考區間上限高于女性，且老年組要高于青年組，與原參考區間上限也存在差異。另一方案通過建立在本地區健康人群的血清CYFAR21- 1檢測數據上的分析顯示，血清CYFAR21- 1 男青年組95%參考區間上限為3.35 ng/mL；男老年組95%參考區間上限為3.52 ng/mL；女青年組95%參考區間上限為3.18 ng/mL；女老年組95%參考區間上限為3.21 ng/mL。此方案與第一種方案得出的參考區間相比較差異無統計學意義(P>0.05)。這與周邊地區研究報道結果相一致[10- 11]。常熟地區成年人血清CYFAR21- 1參考區間上限男性要高于女性，老年組高于青年組。年齡與性別是影響常熟地區成年人血清CYFAR21- 1參考區間的重要因素，實驗室在設立參考區間應區別對待，分組設定[14]。

通過臨床檢測數據計算參考區間的主要不足在于臨床送檢數據中包含大量疾病患者數據。因此對數據進行仔細篩選十分重要，這將直接影響到結果的正確性[15]。本文通過仔細篩選，統計分析得到的結果與以健康人群建立的參考區間，兩者間差異無統計學意義(P>0.05)，說明該方法可以運用于臨床檢驗計量項目參考區間的建立。而該方法的主要優勢在于其針對的主要人群與該指標的適用人群相對應，即不以另一人群的參考值來判別本人群的異常情況。同時，該方法基于的數據雖然龐大，但不需另行設計實驗來進行抽樣分析，可以節省大量的人力與物力。

綜上所述，通過對常熟地區成年人血清CYFRA21- 1參考區間的精準設定，既能指導醫師對病情做出準確判斷，又能避免給患者造成不必要的心理恐慌與過度的醫療檢查。