子宮內膜癌中β-內酰胺絲氨酸樣蛋白的表達及臨床意義

杭晨，印永祥，趙華，張金秋，蔣新顏

(南京醫科大學附屬無錫婦幼保健院1. 婦科，2. 病理科，3. 放射科，江蘇 無錫 214002)

根據病因和臨床病理特征，子宮內膜癌可主要分為Ⅰ型和Ⅱ型[1]。Ⅰ型通常是依賴于雌激素的子宮內膜樣腺癌，占所有子宮內膜癌的80%；Ⅱ型占20%，代表分化和預后較差的腫瘤類型[2-3]。β-內酰胺絲氨酸樣蛋白(Beta-lactamase-like protein，LACTB)是來自線粒體核糖體大亞基的39 S蛋白質，抑制乳腺癌細胞增殖，其作用機制涉及改變線粒體脂質代謝和乳腺癌細胞的分化[4]。但LACTB在子宮內膜癌發生發展過程中的作用尚不清楚，本文旨在初步探討LACTB在子宮內膜癌中的表達及其與患者臨床病理參數之間的聯系。

1 對象與方法

1.1 病例

收集2014年1月至2016年12月于南京醫科大學附屬無錫婦幼保健院因子宮內膜病變行子宮切除術的89例子宮內膜癌患者子宮組織的存檔蠟塊。患者術前均未接受輔助放療、化療或激素治療，且術前肝腎功能正常，術后常規病理確診。其中，≥50歲58例，<50歲31例。年齡36～75歲，中位年齡55.6歲。選擇同期因非子宮內膜因素切除子宮且術后病理證實為正常子宮內膜的21例存檔蠟塊作為對照組，年齡38～65歲，中位年齡54.5歲。本研究經過醫院倫理委員會批準和患者知情同意。

根據國際婦產科聯合會子宮內膜癌的分類，將子宮內膜樣腺癌Ⅰ級和Ⅱ級歸類為Ⅰ型子宮內膜癌，透明細胞、漿液性、黏液性癌和子宮內膜樣子宮內膜癌Ⅲ級歸類為Ⅱ型子宮內膜癌；其中Ⅰ型64例和Ⅱ型25例。臨床分期Ⅰ～Ⅱ期71例，Ⅲ～Ⅳ期18例。

1.2 免疫組織化學法檢測子宮內膜組織中LACTB的表達

兔抗人多克隆抗體濃縮型LACTB(1 ∶1 600)為美國Proteintech公司產品；兔抗人單克隆抗體雌激素受體(etrogen receptor，ER)、兔抗人單克隆抗體孕激素受體(progesterone receptor，PR)即用型抗體購于福州邁新生物技術開發有限公司。基于聚合物的免疫組織化學二抗檢測系統(EnVision)采用丹麥DAKO公司的HRP標記的抗兔/鼠IgG產品。

將存檔石蠟組織行5 μm切片，二甲苯脫蠟，無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇梯度水化；采用檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)行熱抗原修復，高壓鍋加熱噴氣2.5 min；室溫冷卻30 min；流水沖洗至室溫；0.3%過氧化氫室溫孵育10 min；PBS沖洗；滴加一抗室溫孵育60 min；PBS沖洗3次；滴加二抗室溫孵育20 min；PBS沖洗3次；抗原抗體復合物用DAB顯色10 min，蘇木精復染1 min；以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組織化學結果判斷

采用雙盲法對免疫組化結果行半定量評分。LACTB蛋白表達陽性為細胞質中呈棕黃色。著色強度評分：無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；著色范圍以陽性細胞所占百分比評分：無陽性細胞計0分，陽性細胞≤25%計1分，26%～50%計2分，>50%計3分；著色強度評分與著色范圍評分之積取其平均數，>2分為陽性，≤2分為陰性。

ER、PR蛋白陽性為細胞核中呈棕黃色，陽性細胞數>10%即為陽性。

1.4 利用Kaplan-Meier Plotter數據庫及其自帶軟件對子宮內膜癌患者行生存分析

設定條件： ① 腫瘤，子宮內膜癌； ② 基因：LACTB，患者分割方法(“split patients by”)，自動選擇最佳截止值； ③ 生存，總生存期或無進展生存期。根據設定的條件，默認選擇基因表達值和生存信息完整的數據納入分析。

1.5 統計學分析

采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行統計分析。計數資料組間比較采用Pearsonχ2檢驗，組間生存時間的比較采用Log-Rank法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 LACTB、ER和PR蛋白在子宮內膜癌組織中的表達

免疫組織化學染色結果顯示，子宮內膜癌組織中LACTB蛋白陽性表達率(50.30%，51/89)明顯低于正常子宮內膜組織(90.47%，19/21，χ2=5.866，P<0.05)。子宮內膜癌組織中ER陰性17例，ER陽性72例；PR陰性20例，PR陽性69例。見圖1和圖2。

圖1 LACTB在子宮內膜組織中的表達(×200)

圖2 ER和PR在子宮內膜癌組織中的表達(×200)

2.2 子宮內膜癌組織中LACTB表達與患者臨床病理參數間的關系

子宮內膜癌組織臨床分期Ⅰ～Ⅱ期LACTB蛋白表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；其表達與年齡分組無關(P>0.05)；Ⅰ型子宮內膜癌LACTB蛋白表達率低于Ⅱ型子宮內膜癌，但差異無統計學意義(P>0.05)。與ER陽性相比，ER陰性組LACTB蛋白陽性表達率明顯增加(P<0.05)；與PR陽性相比，PR陰性組LACTB蛋白陽性表達率也明顯增加(P<0.05)。見表1。

表1 子宮內膜癌組織中LACTB表達與患者臨床病理參數間的關系 例(%)

2.3 子宮內膜癌組織中LACTB蛋白表達與患者預后的關系

在線數據進行生存分析結果顯示，子宮內膜癌患者LACTB陽性組總生存期和無進展生存期高于LACTB陰性患者，但差異無統計學意義(P=0.29，0.32)。見圖2。

圖2 子宮內膜癌患者總生存期和無進展生存期生存曲線分析

3 討論

研究顯示，LACTB在不同腫瘤中呈低表達，包括乳腺癌、膠質瘤等，其通過抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲轉移發揮抑癌基因的作用[4-5]。本研究結果顯示，LACTB陽性表達率在子宮內膜癌組織中顯著降低，且隨臨床分期增加而降低。LACTB低表達可能促進子宮內膜癌增殖和侵襲轉移。肝細胞癌和膠質瘤中LACTB低表達與不良預后相關[5-6]。我們通過用Kaplan-Meier Plotter 對在線子宮內膜癌數據庫進行生存分析，發現LACTB陽性表達者預后優于陰性表達患者，但差異無統計學意義，LACTB表達可能與子宮內膜癌患者預后無關。

目前關于子宮內膜癌的形態學分型存在爭論。根據Bokhman分類，將子宮內膜腺癌歸為Ⅰ型，漿液性、透明細胞子宮內膜癌歸為Ⅱ型[7]。也有定義Ⅱ型子宮內膜癌以漿液性或透明細胞組織學為特征，包括低分化癌肉瘤或未分化癌[8-9]。子宮內膜腺癌組織學Ⅲ級與子宮乳頭狀漿液性癌和透明細胞癌有相似的臨床表現、免疫組織化學特征和預后不良，故認為子宮內膜腺癌組織學Ⅲ級最好歸為Ⅱ型子宮內膜癌[10]。根據國際婦產科聯合會的分類，我們將子宮內膜樣腺癌組織學Ⅰ級和Ⅱ級歸為Ⅰ型，透明細胞、漿液性、黏液性癌和子宮內膜腺癌組織學Ⅲ級歸為Ⅱ型子宮內膜癌。結果顯示，Ⅰ型子宮內膜癌LACTB蛋白陽性率低于Ⅱ型，但無統計學差異，有可能與標本量少、病例差異有關。有意思的是，我們發現與ER陽性組相比，ER陰性組LACTB蛋白陽性表達率明顯增加；與PR陽性組相比，PR陰性組LACTB蛋白表達率也明顯增加。有文獻報道，雌激素在線粒體平衡中起重要作用，其以細胞特異性的差異表達和定位介導的直接和間接機制協調和整合細胞代謝和線粒體活性[11]。最新研究表明，雌激素可以對線粒體產生直接和間接作用，促進或保持病理環境下的線粒體功能[12]。由此說明，LACTB作為一種線粒體蛋白，其表達可能受雌激素調控。

綜上所述，LACTB在子宮內膜癌中呈低表達，其低表達可能與臨床分期、ER以及PR相關，提示LACTB低表達可能促進子宮內膜癌的臨床進展。