色譜數據處理對藥品檢測結果的影響探討

章滿君 呂少風 蔣小英

（1.浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠，浙江 新昌

312500；2.浙江昌海制藥有限公司，浙江 紹興312366；3.浙江醫藥股份有限公司昌海生物分公司，浙

江 紹興 312300）

近年來，色譜法在藥品研發、質量控制以及復雜成分的分離分析等領域得到較為廣泛的應用[1～2]，已成為各國藥典[3]中應用范圍最廣泛的檢測技術之一。色譜分析法雖然在檢測靈敏度、分離度、數據采集效率、數據自動化處理等各個方面都有發展，但是在色譜數據的處理方面始終未能有統一的技術規范，因此各企業在應用實踐中也各有不同，數據處理規范管理程度良莠不齊。美國食品藥品監督管理局(FDA)和美國藥典(USP)均強調了色譜技術的重要性，并大大提高了其在驗證方面的運用比重。

1 色譜數據處理不規范的原因分析

綜合分析目前關于色譜數據處理方面的缺陷情況，主要的問題是：沒有建立科學有效的規程、沒有固定的積分參數或手動積分方式、選擇性報告數據、操縱數據、沒有審計追蹤、數據未經授權的訪問、修改或刪除，即數據處理不規范。原因可從客觀因素和主觀因素兩個方面來說。

1.1 客觀因素

在法規方面，各國GMP 都有關于數據可靠性、準確性、追溯性等原則性要求，但是關于色譜數據處理方式或積分參數設置并沒有相關的行業指南或者具體的指導原則，只能根據操作經驗或者查閱相關文獻作為參考。

在藥政部門的監管方面，早年對色譜數據處理方面的關注程度相對較低，在實際的GMP檢查中很少涉及，因此企業在內部管理上也大多不嚴格。近年來由于美國FDA在GMP檢查中將數據可靠性方面的檢查作為重點，因此許多企業在色譜數據處理和管理方面暴露出缺陷。

儀器硬件及軟件方面，不同的色譜儀器廠家，不同的儀器型號，在數據采集和數據處理上也各不相同。在建立產品質量標準和方法時，不能統一色譜數據處理方法。

1.2 主觀因素

企業重視程度不夠。一些企業對數據規范處理的重視程度不夠，或者有意利用其中的漏洞為企業創造利益。

迫于時間和經濟壓力。由于沒有相應的法規和指導原則，所以大部分積分參數需要進行大量重復的實驗進行摸索，而這不可避免地提高了企業的檢測成本，降低了效益。因此一些企業迫于時間和經濟壓力，為降低檢測成本而簡化了摸索合適參數的過程。

缺乏監管。由于檢測工作的專業性強，企業往往對實驗室的日常工作缺乏監管，沒有建立起很好的監督檢查機制，檢測結果的檢查大多由分析人員執行，因此在監督有效性上就存在風險。

技術能力欠缺/培訓不充分。有些企業對GMP/GLP的培訓意識不強，不能從根本上理解GMP/GLP。對于員工培訓不到位，敷衍了事。

個人職業素質欠缺。質量意識是一個企業對質量工作的認識和了解，包括企業的管理層到每一個員工。這對質量行為起著極其重要的影響和制約作用，也是企業生存和發展的思想基礎。

2 色譜數據處理不規范的影響因素考察

2.1 積分參數對計算結果的影響

色譜工作站的積分過程主要由積分事件表中的斜率靈敏度、峰寬靈敏度、最小峰面積及最小峰高等參數來控制，其中斜率靈敏度和峰寬靈敏度影響色譜峰起止點的識別，最小峰面積及最小峰高影響色譜峰是否被分析。文章討論不同積分參數對拖尾因子、分離度、信噪比及峰面積的影響。

斜率靈敏度應能確保靈敏度測試溶液最小峰能夠成功積出，常設置為工作站中的初始默認值，即1.0；峰寬通常設置為不大于最窄色譜峰的半峰寬（溶劑峰除外），常用初始默認值0.04；有關物質、殘留溶劑項下舍棄面積一般根據報告限最小峰面積的0.5 倍設置，含量項下舍棄面積一般根據對照溶液最小理論峰面積的0.5 倍設置；舍棄峰高一般設置為最小舍棄峰面積的0.5倍以下，或設為0。

2.1.1 不同積分參數對拖尾因子的影響

拖尾因子是用于評價峰形對稱性的一個參數。實驗結果表明，斜率靈敏度、峰寬靈敏度及舍棄峰面積在常用參數設置原則上下波動不大時，對拖尾因子不會有影響。但當斜率靈敏度過小或者過大時，均會使拖尾因子稍減小；而峰寬靈敏度的過大時會使拖尾因子稍偏大，舍棄峰面積則對拖尾因子無影響。

2.1.2 不同積分參數對分離度的影響

分離度又稱分辨率，判斷分離物質在色譜柱中的分離情況，通常用R=1.5 作為相鄰兩組分已完全分離的標志。實驗結果表明，斜率靈敏度、峰寬靈敏度及舍棄峰面積的設置對分離度均無影響。

2.1.3 不同積分參數對信噪比的影響

信噪比，評價色譜系統檢測微量物質的能力。配制低濃度的樣品溶液，改變噪聲選取范圍、位置及積分參數。實驗結果表明，斜率靈敏度、峰寬靈敏度及舍棄峰面積的設置對信噪比的大小均無影響。而噪聲的選取范圍及選取位置卻對目標峰的信噪比有很大影響，當所選取的時間段里基線波動較大時，噪聲變大，信噪比變小，人為主觀因素影響較大。

2.1.4 不同積分參數對峰面積的影響

選擇不同的積分參數對峰面積有較大影響。實驗結果表明，當斜率靈敏度選取較大值時，會導致一些小峰不被積出，使得樣品雜質峰減少；而當斜率靈敏度選取較小值時，基線上的一些小波動容易被積出，導致樣品雜質峰增加，并且使得一些峰型較差的色譜峰峰面積變大。當峰寬靈敏度選取較大值時，會使雜質峰減少，個別色譜峰的峰面積也會有較大變化。舍棄峰面積的改動對色譜峰面積不會有影響，只是當舍棄峰面積較小時，一些小峰會被積出。

2.2 不同校正參數對定量計算結果的影響

化學工作站中主要有六種定量方法，分別為百分比法、歸一化法、外標法、內標法、外標百分比法、內標百分比法。

外標法的計算需要通過建立校正表，設置校正參數，用校準曲線計算未知樣品中的化合物含量，但是校正參數的設置又包括兩種情況：強制過原點與不過原點，不同校正參數的設置對樣品組分含量或有影響。通常情況下，多濃度建立校正表或高低濃度建立校正表，應當選擇不過原點校正；在單一濃度建校正表時應當選擇過原點校正。同時，校正方法的確定，還需結合考慮方法驗證，及其該產品檢測時方法中是否有其他特殊規定。

2.3 手動積分對定量計算結果的影響

理想條件下，在通過系統適用性試驗后，對照品、供試品的色譜應一直以相同的方法進行積分。但是實際情況并非如此，尤其是接近定量限、檢測限，有些峰自動積不上，需要手動積分。手動積分雖然會受主觀因素的影響，在科學分析色譜結果時也是需要的。如當出現異常峰，分離度不好的峰時，手動強制分割；當進行手動積分時，特別是手動劃定基線進行積分時，積分結果容易受到分析員主觀因素的影響。企業應規定在何種情況下如何進行手動積分。

3 結語

鑒于色譜數據處理對藥品檢驗結果的重要影響，筆者建議企業采取以下措施來提高數據的準確性和有效性，進而有效的規避數據完整性問題的發生。

建立規范的操作規程。良好的文件是質量保證系統的基本要素，結合崗位制定相應操作規范，使檢測工作有據可依、有典可查，提高工作效率和準確度。

規范方法開發及驗證，通過驗證獲得準確的色譜數據處理方法，規范積分參數設置，控制隨意手動積分，定期對方法進行評估與確認，以保證分析方法的針對性和準確性，從源頭上解決數據的不規范處理。

標準化工作流程及定期內部審核機制能夠有效的規范工作人員的工作程序，減少出錯幾率。

加強人員培訓、提高技術能力。掌握色譜工作站的原理，理解不同色譜數據處理手段（參數設置等）對結果的影響。將產品的質量評價風險降到最低。

建立良好的企業文化。在企業經營管理中，良好的企業文化發揮的作用不容小覷，它不僅可以在“新產品研發、產品的升級與維護、新制度的執行與考評”等方面發揮不可估量的推進作用，更能有力的提高企業人員的執行力與責任心，并進一步建立良好的質量文化，為藥企創造一筆不可估量的寶貴財富。