1例羊駝腸毒血癥的病理學診斷

丁玉林 ， 鄭秉武 ， 湯君宇 ， 王金玲 ， 王鳳龍

(1.內蒙古農業大學獸醫學院 農業部動物疾病臨床診療技術重點實驗室 ， 內蒙古 呼和浩特 010010； 2.呼和浩特市大青山野生動物園 ， 內蒙古 呼和浩特 010010)

腸毒血癥是由產氣莢膜梭菌在腸道中大量繁殖，產生毒素引起的一種急性毒血癥。近年來，在我國許多省區的牛、羊、豬、鹿等動物中流行的一種以急性死亡為特征的疾病[1]。某羊駝養殖場發生了羊駝急性死亡，通過對羊駝的尸體剖檢、病理組織學觀察、細菌培養等方法對該病進行診斷，結果證實為羊駝的腸毒血癥。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 某羊駝養殖場送檢的病死羊駝；BALB/c 小鼠購自內蒙古醫科大學。

1.2 試劑和主要儀器設備 普通培養基，購自環凱生物科技有限公司；環保透明劑，購自貝索生物科技有限公司；革蘭染色液本實驗室自配；瑞氏染色液，購自南京建成生物工程研究所；甲醛、無水乙醇，均購自天津化學品三廠。

全自動組織脫水機(櫻花VIPTM5 Jr)；包埋機(櫻花TeK)；切片機(徠卡Leica 2235)；展片機(Leica)；烤片機(櫻花PS-53)；全自動蓋片機(Thermo CLEARVUE)；全自動染色機(Thermo Gemine)；五人共攬顯微鏡(Olympus BX51)；超凈工作臺(上海博迅醫療生物儀器股份有限公司)；生化培養箱(Memmert IPP110)。

1.3 方法

1.3.1 病料采集 對送檢的羊駝尸體進行尸體剖檢，記錄各組織器官的病理變化，并對各組織器官進行病理組織取材、固定以備病理組織切片制作，取材時注意組織塊全面而具有代表性、大小適宜。眼觀病變明顯的組織選取一小塊觸片，并進行革蘭染色、鏡檢。

1.3.2 病理組織切片制作 采用常規的石蠟切片制作技術進行病理組織切片制作，包括修塊→沖洗→脫水→透明→浸蠟→包埋→切片→展片→烤片→染色→封片[2]。病理組織切片在顯微鏡下進行病理組織學觀察。

1.3.3 毒素檢驗 取6只小鼠，分成2組，每組3只。取十二指腸和空腸血樣內容物，12 000 r/min離心5 min，取上清液，每只小鼠腹腔注射1 mL[3]。

1.3.4 細菌培養 取腸道內容物，接種于普通培養基，37 ℃培養24 h[4]，取獨立菌落涂片進行細菌的形態學觀察。

2 結果

2.1 臨床癥狀和尸體剖檢病理變化 病程2 d，初期精神不振，體溫升高，經藥物治療無明顯效果。

尸體剖檢：可見眼結膜呈暗紅色；下頜部、胸部脂肪可見血紅色斑點；腸呈暗紅色，十二指腸、空腸腸壁變薄，可見血樣內容物，呈血灌腸狀；腸淋巴結呈暗紅色；真胃黏膜呈明顯的暗紅色；脾呈藍紫色，不腫大；腎淤血，質度變軟；肺輕度淤血，可見小暗紅色病灶；心包外脂肪和心內膜可見大量的紅色斑點；肝腫大，呈土黃色，質度變脆；其他組織無明顯病變。見中插彩版圖1～4。

2.2 病理組織學觀察 腸黏膜脫落，可見大量的紅細胞，黏膜上皮細胞可見明顯的壞死，呈出血壞死性腸炎變化；腸淋巴結可見明顯的出血和壞死，淋巴細胞數量減少；腎臟淤血，腎小管上皮細胞明顯變性，偶見壞死；肝臟肝細胞發生明顯變性、壞死，可見小的壞死灶；脾臟淤血和輕度出血；胃黏膜脫落、出血，上皮細胞變性和壞死；大腦可見小出血灶；肺淤血和萎陷；其他組織無特征性病變。見中插彩版圖5～8。

2.3 毒素檢驗和細菌培養 組織觸片和培養細菌涂片經革蘭染色可見直桿狀、兩端鈍圓桿菌，革蘭染色呈陽性。毒素檢驗，腹腔注射十二指腸內容物上清液組小鼠8 h死亡，腹腔注射空腸內容物上清液組小鼠14 h死亡。見中插彩版圖9～10。

3 診斷

根據臨床癥狀、動物尸體剖檢變化、病理組織學變化、組織觸片、細菌培養、小鼠毒素檢驗綜合診斷為羊駝的腸毒血癥。

4 討論

羊、鹿、駱駝腸毒血癥均有報道，且四季均可發生，病程短，死亡快，主要以梭菌的毒素致病,引起動物的胃腸疾病, 導致腸黏膜通透性改變、新陳代謝紊亂、組織學損傷，最終導致腸黏膜的損傷而發病甚至死亡[3]。羊、鹿、馬鹿和駱駝尸體剖檢胃可見出血點或斑，腸管外觀似血腸樣, 內容物呈紅色的黏稠液體，腸系膜淋巴結腫大、出血；腎臟質軟，心內、外膜有出血點[5-8]。該病例也表現腸呈暗紅色，可見血樣內容物，呈血灌腸狀，腸系膜淋巴結呈暗紅色，真胃黏膜呈明顯的暗紅色，腎淤血，質度變軟，心內膜可見大量的紅色斑點。羊、鹿和馬鹿病理組織學觀察肝細胞普遍發生變性和壞死，并見小壞死灶，腸黏膜可見上皮細胞大量壞死、脫落，淋巴結可見出血壞死，腎臟可見腎小管上皮細胞變性壞死[1,3,8]。該病例腸道呈出血壞死性腸炎變化，腸黏膜脫落、壞死，腸系膜淋巴結可見明顯的出血和壞死，腎臟淤血，腎小管上皮細胞明顯的變性，肝臟明顯的變性、壞死。細菌分離培養，呈直桿菌，革蘭染色陽性[1,8]，毒素檢驗試驗小鼠在24 h內發生死亡[1,3，8]，細菌分離培養，可見陽性直桿菌，毒素檢驗14 h內發生死亡。羊駝腸毒血癥在國內少有報道，經過本次試驗證實，羊駝腸毒血癥與其他報道的動物腸毒血癥在臨床癥狀、動物尸體剖檢變化、病理組織學變化基本一致，以出血和實質器官的變性、壞死為主要表現。

該病的發生與飼養管理有很大的關系，因此要加強飼養管理，尤其環境衛生問題，保持清潔，天氣變化或更換飼料要注意采取必要的預防措施。病畜要及時隔離，死亡的要進行無害化處理，同時對受污染的環境進行徹底的消毒。每年定期進行疫苗接種，對預防該病是非常有效的措施。