血清和全血平板凝集方法檢測雞白痢抗體的差異比較

劉洋，潘海萍，陳輪鋒，嚴麗端，嚴專強，王占新，魯俊鵬

（1.溫氏食品集團股份有限公司，廣東 新興 527439；2.廣東溫氏南方家禽育種有限公司，廣東 新興 527439）

雞白痢沙門菌可引起雛雞大批量死亡， 產蛋雞產蛋率下降，成年雞多呈隱性感染，可長期帶毒和排毒。雞白痢沙門氏菌為細胞內寄生菌，利用藥物治療只能臨床治愈而不能根除， 且藥物預防和治療容易產生耐藥性， 給家禽養殖業帶來嚴重的經濟損失[1]，被中國農業部列為二類動物疫病?！秶抑虚L期動物疫病防治規劃（2012-2020）》中明確要求到2020 年全國所有種雞場沙門氏菌病達到凈化標準。 平板凝集試驗以其方便、快速、實用等特點成為國內外雞白痢抗體檢測最常用的診斷方法之一，檢測對象主要包括全血、血清等。 目前我國大部分養殖場都采用平板凝集的方法開展雞白痢沙門氏菌的凈化工作。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 雞白痢-雞傷寒多價染色抗原、雞白痢-雞傷寒陽性血清和陰性血清均購自中國獸醫藥品監察所。

1.2 試驗方法 將中海的凝集抗原在室溫回溫30min，采集100 只（大部分為即將淘汰的陽性雞）20 周齡的竹絲雞進行平板凝集試驗測定雞白痢抗體，每份樣品均按照4 種不同方法進行檢測，比較各檢測方法檢測結果的差異， 具體操作按照試劑說明書進行，見表1。 結果判定以陰、陽性對照血清成立時，在2min 內出現肉眼可見的75%的片狀明顯凝集顆粒判為強陽，50%凝集顆粒判為弱陽，25%小凝集顆粒則判為疑似。

表1 樣品的不同檢測方法

2 結果與分析

2.1 不同檢測方法的陽性率 全血平板凝集試驗中， 將全血與中?？乖謩e按照1:1、2:1、3:1 混合進行反應，血清平板凝集試驗則按照血清與抗原1:1 反應，試驗的操作與結果判斷均按說明書進行。檢測結果見表2 所示。

表2 全血和血清平板凝集檢測結果

從表2 可知，血清平板凝集陽性率為81%，全血與抗原2:1 和3:1 陽性率均為79%，全血與抗原1:1 陽性率最低，僅71%。因此，采用血清平板凝集檢測雞白痢抗體，陽性率最高，陰性率最低。

2.2 組間檢測結果的比較分析 在所有的全血平板凝集試驗中 （1:1、2:1、3:1）， 全血與抗原2:1和3:1 檢出率高于1:1， 且全血與抗原2:1 和3:1檢出的陽性樣品包括全血和抗原1:1 檢出的所有陽性樣品。全血和抗原按照2:1 和3:1 檢測結果相差不大，僅4 份樣品檢測結果具有差異，全血和抗原2:1 檢出為強陽， 全血和抗原3:1 檢出為弱陽。全血與抗原1:1 檢出的有17 份弱陽性和8 份疑似陽性樣品， 采用2:1 則分別檢出為強陽性和弱陽性。因此，在全血平板凝集實驗中，全血與抗原2:1檢測效果優于3:1 和1:1。

全血與血清平板凝集對比試驗中， 全血和抗原2:1 與血清平板凝集陽性符合率最高，達97.53%。所有陽性樣品中，僅2 份樣品檢測結果具有差異，即血清平板凝集檢測為弱陽，而全血與抗原2:1 凝集試驗檢測為可疑。

3 討論

目前，在雞白痢抗體檢測方法中，微量凝集試驗、ELISA 和平板凝集試驗等方法較常見。 微量凝集試驗則采用96 孔板進行，容易判斷結果，但操作較繁瑣，持續時間長（37℃，18～24h）[2]。 ELISA 適用于實驗室大批量檢測，檢測靈敏度高，但目前國內商品化的ELISA 試劑盒大部分都是針對D 群沙門氏菌， 可檢出雞白痢沙門氏菌、 禽傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌等產生的抗體[3]，檢出率高于實際雞白痢陽性率。平板凝集試驗存在易于操作、反應時間短、成本低的優勢，但通過肉眼是否出現凝集顆粒對讀取結果的工作人員要求高， 是目前最常用檢測雞白痢抗體的方法。

平板凝集主要包括全血平板凝集和血清平板凝集兩種， 其中全血平板凝集的優點在于反應速度快、耗時短、操作簡便、適合在現場進行大批量的檢測等優點， 在生產實踐中多被采用[4]；但是該方法檢測結果容易受肉雞舍環境溫濕度、 粉塵等干擾，且室溫過高容易造成全血凝固的現象；血清平板凝集可在實驗室進行， 可保證實驗室的檢測環境符合要求，但工作量增加，耗時長，不能當場檢測出結果并淘汰陽性雞。

本研究通過對比不同比例全血和抗原平板凝集與血清平板凝集試驗， 發現血清平板凝集檢測方法陽性檢出率高于全血平板凝集， 且包括全血平板凝集所有的陽性樣品， 這與蔣維維等的報道一致[5,6]。 在全血平板凝集中以全血與抗原2:1 混合的檢測效果最佳。 因此， 雞場進行雞白痢凈化時，建議首選血清平板凝集的方法進行檢測，有利于推進凈化歷程。 對于無法大規模推廣血清平板凝集的種雞場， 在保證雞舍環境符合檢測要求的前提下，可考慮采用全血與抗原2:1 的的方法。

雞白痢的防控和凈化是一項長期而系統的工程，不僅需要更精確的檢測方法來淘汰陽性雞，更重要的應是以生物安全措施為重點，落實“鼠不進舍、料不見天、糞不落地、精準消毒、精準檢測”等生物安全等細節措施[7]，做好雞群各個階段的飼養管理、公母雞分開飼養、加強衛生措施等環節，切斷水平傳播與垂直傳播等環節，消除病雞、帶菌雞和隱性感染雞， 避免帶菌公雞的精液傳染給母雞的人工授精途徑[8]，逐步實現雞白痢的凈化。